朱 穎, 朱興平

(1南京市食品藥品監(jiān)督檢驗院藥品所, 南京 210038; 2涼山州第一人民醫(yī)院馬道分院急診科； *通訊作者，E-mail:1012309328@qq.com)

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HPLC法測定抗601合劑中(R,S)-告依春含量

朱 穎1, 朱興平2*

(1南京市食品藥品監(jiān)督檢驗院藥品所, 南京 210038;2涼山州第一人民醫(yī)院馬道分院急診科；*通訊作者，E-mail:1012309328@qq.com)

目的 建立測定抗601合劑中(R,S)-告依春含量的HPLC法。 方法 選擇甲醇-0.02%磷酸水溶液系統(tǒng)，采用梯度洗脫的辦法；檢測波長245 nm；色譜柱：Agilent Eclipse Plus-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫35 ℃，流速1.0 ml/min。 結(jié)果 制劑中其他組分與主峰能完全分離，不干擾測定；(R,S)-告依春在1.056-21.12 μg/ml范圍內(nèi)與HPLC峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 8);平均加樣回收率為99.78%，RSD%為0.8%(n=9)。 結(jié)論 HPLC法測定抗601合劑中(R,S)-告依春含量簡便、準(zhǔn)確。

高效液相色譜； 抗601合劑； (R,S)-告依春

抗601 合劑(Kang601 mixture)為南京市兒童醫(yī)院自制中藥復(fù)方制劑，由金銀花、黃芩、大黃、黃柏、板藍(lán)根五味藥組成, 具有清熱解毒, 抗病毒作用, 用于病毒性肺炎、感冒、急性支氣管炎、扁桃腺炎、腮腺炎[1]等,具有很好的臨床應(yīng)用價值。目前該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚無“含量測定”項，該院研究人員已經(jīng)報道采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)測定其中黃芩苷[1]、綠原酸[2,3]的研究。板藍(lán)根在方中擔(dān)當(dāng)清熱解毒和抗病毒作用。2015年版《中國藥典》通過HPLC法測定板藍(lán)根中(R,S)-告依春的含量對其進(jìn)行質(zhì)量控制[4]。本文采用HPLC法測定抗601合劑中的(R,S)-告依春含量，為該制劑的質(zhì)量評價增加了有效、可行的方法。

1 儀器藥品

1.1 儀器

高效液相色譜儀(Shimadu-20A)，METTLER TOLED X205DU分析天平(0.1 mg)。

1.2 藥品與試藥

抗601合劑(南京市兒童醫(yī)院自制，批號:150704，150901，151002)，(R,S)-告依春對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:111753-201304，含量99.9%，使用前無需干燥。甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的配制

精密稱取(R,S)-告依春對照品適量, 精密稱定, 加水溶解并稀釋制成每1 ml 含105.6 μg的溶液, 即得。

2.2 供試品溶液的制備

精密量取抗601合劑1 ml置10 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用前以0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.3 色譜條件

采用Agilent Eclipse Plus-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫35 ℃，流速1.0 ml/min，檢測波長245 nm。經(jīng)預(yù)試驗，選擇與2015年版《中國藥典》[4]一致的甲醇-磷酸-水系統(tǒng)，并在主峰出峰后，加大有機(jī)相比例，將其余雜質(zhì)洗脫下來，避免存于色譜柱中，影響下一份樣品。梯度洗脫系統(tǒng)見表1。在此色譜條件下,(R,S)-告依春與其他組分完全分離,未見明顯干擾，對照品和供試品色譜圖見圖1。對照品光譜圖和供試品溶液主峰光譜圖一致(見圖2)。

表1 流動相梯度系統(tǒng)

Table 1 Gradient system of mobile phase

時間甲醇(A)0.02%磷酸水溶液(B) 0.01min93%7%15min7%7%17min10%90%22min10%90%25min93%7%30min93%7%

圖1 (R,S)-告依春對照品和抗601合劑色譜圖Figure 1 The chromatogram of(R,S)-goitrin reference substance and Kang 601 mixture

圖2 (R,S)-告依春對照品和抗601合劑主峰光譜圖(6.34 μg/ml)Figure 2 The spectrogram of(R,S)-goitrin reference substance(6.34 μg/ml)and main peak in Kang 601 mixture

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密吸取對照品溶液1,3,3,2,3,5 ml，分別置100,100,50,20,10,25 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得濃度分別為1.06，3.17，6.34，10.56，15.84，21.12 μg/ml的對照品溶液，分別進(jìn)樣10 μl，以峰面積對對照品濃度繪制曲線，回歸方程為y=63 783x-314.5(r=0.999 8)。在濃度為1.06-21.12 μg/ml范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好線性關(guān)系(見圖3)。

2.5 精密度考察

取對照品溶液(6.34 μg/ml)，進(jìn)樣10 μl，重復(fù)6次，記錄(R,S)-告依春峰面積，計算峰面積RSD為0.07%，精密度良好。

2.6 重復(fù)性考察

平行制備6份供試品溶液(批號：150704)，分別進(jìn)樣10 μl，記錄主峰面積，計算平均含量為66.79 μg/ml，RSD%為0.8 %。試驗表明，重復(fù)性良好。

圖3 (R,S)-告依春標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 3 The calibration curve of (R,S)-goitrin

2.7 穩(wěn)定性考察

取供試品溶液一份(批號：150704)，分別于0,2,4,8,12,24 h進(jìn)樣10 μl，記錄主峰面積，計算峰面積RSD為0.25%，精密度佳。

2.8 準(zhǔn)確度考察

精密吸取9份已知含量的抗601合劑(批號：150704)1.0 ml，置20 ml量瓶中，將一定量(R,S)-告依春對照品溶液分別加入9份供試品中, 分別加水稀釋至刻度，搖勻，以0.22 μm微孔濾膜濾過，依法用HPLC測定，記錄峰面積，計算加樣回收率。結(jié)果表明，本法準(zhǔn)確度較好(見表2)。

表2 抗601合劑中(R,S)-告依春加樣回收率測定結(jié)果

Table 2 Results of recovery tests of(R,S)-goitrin in Kang 601 mixture

取樣量(ml)已知量(μg)加入量(μg)測得量(μg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)1.066.7810.5677.37100.2899.780.801.066.7810.5677.2499.071.066.7810.5677.1698.291.066.7884.48151.85100.691.066.7884.48151.58100.381.066.7884.48151.83100.671.066.78168.96234.9199.511.066.78168.96234.9499.531.066.78168.96235.0399.58

2.9 樣品含量測定

取供試品3批次，依2.2項下方法制備供試品溶液，依法測定，每批次樣品平行測定3份，分別計算含量。結(jié)果見表3。

表3 抗601合劑中(R,S)-告依春的含量測定 (μg/ml)

Table 3 The contents of(R,S)-goitrin in Kang 601 mixture (μg/ml)

批號123平均15070466.7466.8266.7866.7815090156.8656.9256.9156.9015100241.5341.5241.6141.55

3 討論

抗601合劑處方中含板藍(lán)根，(R,S)-告依春(C5H7NOS)為板藍(lán)根的主要抗病毒有效成分之一[5]。本文選擇測定抗601合劑中(R,S)-告依春含量對該制劑質(zhì)量評價進(jìn)行補(bǔ)充和完善。(R,S)-告依春水溶性較好，無需再用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，但為降低樣品中其他成分對色譜柱的污染，將樣品進(jìn)行稀釋[6]。試驗中考察了稀釋25倍和10倍，稀釋倍數(shù)為25倍時，(R,S)-告依春峰面積過小不利于計算，因此選擇稀釋10倍。為避免誤判，HPLC采用PDA檢測器，分別采集對照品和樣品供試液色譜圖中與對照品保留時間一致的色譜峰在200-300 nm紫外吸收光譜，經(jīng)比對，二者光譜一致，樣品供試液中與對照品保留時間一致的色譜峰為(R,S)-告依春。

當(dāng)前國內(nèi)醫(yī)院制劑普遍存在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法落后、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)重缺項(尤其含量測定)等問題，達(dá)不到其控制制劑質(zhì)量、保證患者用藥安全有效的作用[7]，提高醫(yī)院制劑標(biāo)準(zhǔn)迫在眉睫?？?01合劑為醫(yī)院制劑，與國內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院制劑一樣，目前其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中尚無含量測定項。本文采用HPLC法測定601合劑中(R,S)-告依春含量，經(jīng)方法學(xué)考察，本法準(zhǔn)確度高、精密度好、穩(wěn)定性佳、簡單易行，可考慮補(bǔ)充到該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

[1] 孫芳,景霞,朱明媚.HPLC法測定抗601合劑中黃芩苷的含量[J].中國藥師，2015,18(12):2180-2182.

[2] 王珊珊,黃薇薇,廖清船,等.HPLC法測定抗601合劑中綠原酸的含量[J].安徽醫(yī)藥，2011,15(2):162-163.

[3] 王絢，單晨嘯，程莉華,等.UPLC法測定抗601合劑中黃芩苷、綠原酸的含量[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2014,30(4):370-372.

[4] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2015：205-206.

[5] 陳凱，竇月，陳智，等．板藍(lán)根抗病毒與抗內(nèi)毒素等清熱解毒藥效作用及化學(xué)基礎(chǔ)研究進(jìn)展[J].中國方劑學(xué)雜志，2011,17(18):275-278.

[6] 鞏偉，孫旭，趙慶華，等．HPLC法測定雙根口服液中(R,S)-告依春的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報，2014,30(2):167-169.

[7] 馬佩杰，沈偉，張妍，等．醫(yī)院制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在的問題分析及對策探討[J].中國醫(yī)學(xué)倫理學(xué)，2015,28(3):353-355.

Contents of (R,S)-goitrin in Kang 601 mixture with HPLC

ZHU Ying1, ZHU Xingping2*

(1NanjingInstituteforFoodandDrugControl,DrugInspection,Nanjing210038,China;2DepartmentofEmergency,FirstPeople’sHospitalofLiangshanPrefecture;*Correspondingauthor,E-mail:1012309328@qq.com)

ObjectiveTo establish a high performance liquid chromatography(HPLC) method for determining the content of(R,S)-goitrin in Kang 601 mixture．MethodsAgilent Eclipse Plus-C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used to separate(R,S)-goitrin in Kang 601 mixture. The mobile phase was composed of methanol and 0.02% phosphoric acid aqueous with a gradient elution．The detection wavelength was 245 nm. The column temperature was 35 ℃ and the flow rate was 1 ml/min．Results(R,S)-goitrin was thoroughly separated with its related substances. The calibration curve of(R,S)-goitrin showed good linear regression in the range of 1.056-21.12 μg/ml(r=0.999 8), and the average recovery was 99.78% with RSD of 0.8%(n=9)．ConclusionThis HPLC method for determining the content of(R,S)-goitrin in Kang 601 mixture is simple and accurate．

high performance liquid chromatography; Kang 601 mixture; (R,S)-goitrin

朱穎，女，1982-12生，碩士，主管藥師，E-mail:zhuyingunique@163.com

2016-09-01

R927.1

A

1007-6611(2016)11-0992-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.11.007