張 瑜 曾聰彥 胡玉良 卓 斌 陳健聰

廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院，廣東 中山 528401

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藥物研究

HPLC法測定腦脈醒神膠囊中三七皂苷R1的含量

張 瑜 曾聰彥*胡玉良 卓 斌 陳健聰

廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院，廣東 中山 528401

目的：建立腦脈醒神膠囊中三七皂苷R1含量測定的方法，為其制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法：采用C18色譜柱；流動相：乙腈-水梯度洗脫；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：203nm。結(jié)果：三七皂苷R1進(jìn)樣量在0.05～0.3μg之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.9993，平均回收率99.30%，RSD為0.74%(n=6)。結(jié)論：本方法簡便、準(zhǔn)確、可靠，可用于腦脈醒神膠囊制劑的質(zhì)量控制。

腦脈醒神膠囊；三七皂苷R1；HPLC；含量測定

腦脈醒神膠囊系由三七、枳實、大黃、梔子、黃芩、桃仁、丹參等十七味中藥經(jīng)提取加工制成的膠囊劑，具有活血化瘀、化痰開竅、通腑瀉熱、開竅醒腦的功效，臨床用于腦外傷、中風(fēng)之神昏、頭暈頭痛、大便秘結(jié)等。其中三七為方中主藥，而三七皂苷R1又是三七中的主要活性成分之一。現(xiàn)代藥理研究表明，三七皂苷R1能改善微循環(huán)并適度延長凝血時間，[1]是三七活血化瘀的有效成分，這與腦脈醒神膠囊活血化瘀功效一致，提示三七皂苷R1為該制劑中主要活性成分。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，研究建立了高效液相色譜法(HPLC)測定該制劑中三七皂苷R1含量的方法現(xiàn)報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀；色譜柱：Venusil XBP C18(L)柱(250mm×4.6mm，5μm，Agela Technologies)。1.2 材料 三七皂苷R1對照品(批號：110745-200617，中國食品藥品檢定研究院)；腦脈醒神膠囊(批號：20140313、20150302、20160130)。乙腈為色譜純(批號:AC-12960217，瑞典OCEANPAK公司)；甲醇為分析純(批號：1506031，西隴化工股份有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵全硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A ，水為流動相 B，按表1的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速為1.0mL/min；柱溫為25℃；檢測波長為 203nm；進(jìn)樣10μL。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰算應(yīng)不低于3000。

表1 梯度洗脫程序

2.2 對照品溶液制備 精密稱取三七皂苷R1對照品適量，加甲醇溶解，制成每l mL含50μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 取本品10粒，內(nèi)容物研細(xì)，精密稱取約1g，置于塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，放置過夜，置80℃水浴上保持微沸2h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性干擾試驗 取缺三七陰性樣品，按照“2.3”項下供試品溶液制備方法制備缺三七陰性樣品溶液，再按“2.1”項下色譜條件分析，結(jié)果在與對照品保留時間相同的位置上無峰出現(xiàn)，表明腦脈醒神膠囊中其他成分對三七皂苷Rl的測定無干擾。見圖1。

2.5 線性范圍考察 精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6μL，進(jìn)樣，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，三七皂苷R1對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=4721.8X+11.542，r=0.9993。結(jié)果表明三七皂苷R1進(jìn)樣量在0.05～0.3μg之間呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗 取同一對照品溶液按“2.1”項下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣測定6次，三七皂苷R1峰面積的RSD為1.40%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批樣品(批號：20160130)6份，分別按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，各進(jìn)樣20μL，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果三七皂苷R1峰面積的RSD為1.20%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取樣品(批號：20160130)適量，按“2.3”項下的方法制成供試品溶液，放置0、1、2、4、8、24h，分別進(jìn)樣20μL，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果三七皂苷R1峰面積的RSD為1.11%，表明樣品溶液室溫放置24h穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品(批號：20140313)6份，分別添加三七皂苷R1對照品適量，按“2.3”項下的方法制成供試品溶液，各進(jìn)樣10μL，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 三七皂苷R1回收率試驗 (n=6)

2.10 樣品含量測定 取3個批號的樣品，按 “2.3”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取20μL進(jìn)樣，測定三七皂苷R1峰面積，根據(jù)峰面積用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算樣品含量。結(jié)果見表3。

表3 三批樣品中三七皂苷R1的含量

3 討論

三七具有散瘀止血，消腫定痛的作用[2]，現(xiàn)代藥理實驗研究表明其在抗凝血、抗冠心病、擴張血管及保護(hù)腦損傷等方面作用明顯[3]，是腦脈醒神膠囊處方中具有活血化瘀作用的主要藥物，故建立其有效成分含量測定方法，可進(jìn)一步加強對腦脈醒神膠囊的整體質(zhì)量控制。實驗中供試品溶液的制備方法及色譜條件均參照2015年版《中國藥典》一部中三七含量測定項下的方法和條件[2]，流動相曾采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水等度洗脫，結(jié)果分離效果均不佳，且分析時間較長。后采甲醇-水、乙腈-水進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈-水較甲醇-水分離效果好，也大大節(jié)省了分析時間，并能有效排除其他成分干擾，這與有關(guān)文獻(xiàn)報道的一致[4]。實驗表明，采用文中方法測定腦脈醒神膠囊中三七皂苷R1的含量重現(xiàn)性好，專屬強，穩(wěn)定可靠，方便快捷，可作為腦脈醒神膠囊的質(zhì)量控制方法之一。

[1]劉東平，楊軍，丁丹. 三七及其有效成分對血液系統(tǒng)的藥理活性研究概況[J].中醫(yī)藥信息，2012，29(4)：172-174.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：11-12.

[3]梅全喜.簡明實用中藥藥理手冊[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：328-331.

[4]張虹，李淑芳. 高效液相色譜法測定三七接骨丸中三七皂苷R1的含量[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2012，24(5)：461-462.

(編輯：梁志慶)

Determination of Notoginsenoside R1in Naomai Xingshen Capsules by HPLC

ZHANG Yu ZENG Congyan*HU Yuliang ZHUO Bin CHEN Jiancong

Affiliated Zhongshan Hospital of Guangzhou University of TCM，Zhongshan 528401 ，China

Objective To establish a method for the determination of Notoginsenoside R1in Naomai Xingshen Capsule and control its quanlity. Methods Separation and determination of allantoin were accessed by using an C18column and a mobile phase of acetonitrile- water gradient elution.The flow rate was 1.0mL/min,temperature at 25℃ and detection wavelength at 203nm. Results The linear range was 0.05～0.3μg，r=0.9993，marked recovety rate was 99.30%,andRSD=0.74%(n=6).Conclusion The method in this paper could provide an evidence for quality control of Naomai Xingshen Capsule.

Naomai Xingshen Capsule；Notoginsenoside R1；HPLC；Content Determination

2016-09-01

廣東省中山市衛(wèi)生和計劃生育局醫(yī)學(xué)科研項目(2015J050)。

張瑜(1972-)，女，主管藥師，研究方向為醫(yī)院制劑。E-mail：gdzsszy@126.com.

曾聰彥(1975-)，男，主任中藥師，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向為事醫(yī)院中藥制劑研究。E-mail：zszcy@126.com

R914.1

A

1007-8517(2016)21-0004-03