潘媛， 彭成， 劉建林

(成都中醫(yī)藥大學，成都 610075)

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DOI:10.11984/j.issn.1000-7083.20150364

川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠作用的研究

潘媛， 彭成*， 劉建林

(成都中醫(yī)藥大學，成都 610075)

目的 觀察川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠的作用。方法 將60只SD大鼠隨機分為正常對照組、模型組、佐米曲普坦組(0.83 mg每千克體質量)、川芎定痛顆粒高劑量組(1.75 g浸膏粉每千克體質量)、中劑量組(0.88 g浸膏粉每千克體質量)、低劑量組(0.44 g浸膏粉每千克體質量)6組，灌胃給予相應藥物5 d后，除正常對照組外，對大鼠皮下注射硝酸甘油每千克體質量10 mg，建立偏頭痛大鼠模型，通過ELASA方法檢測大鼠血漿中5-羥色胺(5-HT)、內(nèi)皮素(ET)、去甲腎上腺素(NE)和腦組織中5-HT、多巴胺(DA)、NE的含量。結果 與正常對照組比較，模型組血漿中5-HT與ET含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組可明顯升高其含量，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，佐米曲普坦組、川芎定痛顆粒低劑量組有升高的趨勢；NE含量明顯降低，正常對照組與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，川芎定痛顆粒高劑量組可明顯升高其含量，而佐米曲普坦組、川芎定痛顆粒中、低劑量組則是含量降低，與模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與正常對照組比較，模型組腦組織內(nèi)5-HT含量差異雖無統(tǒng)計學意義，但降低趨勢明顯，且川芎定痛顆粒高劑量組能明顯升高其含量，與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，佐米曲普坦組、中、低劑量亦有升高的趨勢；與正常對照組比較，模型組腦組織內(nèi)NE含量明顯升高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組能明顯降低其含量，與模型組比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；與正常對照組比較，模型組腦組織中DA含量降低，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組能升高其含量，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論 川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠有治療作用，其機制可能與調(diào)節(jié)模型大鼠血漿及腦組織內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質5-HT、NE、ET、DA含量有關。

川芎定痛顆粒; 偏頭痛; 單胺類神經(jīng)遞質

偏頭痛是一種間斷性反復發(fā)作的、以一側頭痛為主的搏動性頭痛疾病?，F(xiàn)代醫(yī)學之偏頭痛在中醫(yī)學中多屬內(nèi)傷頭痛，屬于中醫(yī)“頭風”“腦風”“偏頭痛”“厥頭痛”等疾病范疇。川芎定痛顆粒為中藥復方制劑，主要由川芎、白芷、延胡索、鉤藤等藥組成，功效有活血鎮(zhèn)痛、平肝潛陽。皮下注射硝酸甘油所致的大鼠偏頭痛模型動物所出現(xiàn)的耳紅、震顫、前肢頻繁撓頭、煩躁不安、爬籠次數(shù)增多等現(xiàn)象與肝陽上亢證、風火上擾證的偏頭痛類似(王玲玲，范吉平，2007)。本文通過研究川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠的作用，探討其治療偏頭痛的效果及可能存在的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗藥物 川芎定痛顆粒浸膏粉由奧康藥物研究所提供，每克浸膏粉相當于生藥5.6 g；陽性藥物：佐米曲普坦(國藥集團川抗制藥有限公司，生產(chǎn)批號100701)；硝酸甘油注射液(河南潤弘制藥股份有限公司，生產(chǎn)批號1202251)。

1.1.2 實驗動物 SD大鼠60只，雌雄各半，體質量200 g±20 g，由成都中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(川)2008-11，實驗動物使用許可證號：SYXK(川)2008-049。

1.1.3 主要試劑 大鼠5-羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒，批號201203；大鼠多巴胺(DA)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒，批號201203；大鼠去甲腎上腺素(NE)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒，批號201203；大鼠內(nèi)皮素(ET)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒，批號201203。

1.1.4 主要儀器 多功能酶標儀(美國Thermo公司，Varioskan型)，冷凍離心機(美國Thermo公司，型號Legend Micro 17R)，電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司，型號DZKW-4)，分析天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司，型號JA1003)；低溫冰箱(日本三洋電器集團)。

1.2 方法

1.2.1 分組與給藥 待大鼠適應環(huán)境1周后，按體質量隨機分為6組，分別為模型組、正常對照組、川芎定痛顆粒高、中、低劑量組和佐米曲普坦組，每組10只。川芎定痛顆粒高、中、低劑量組分別灌胃給予川芎定痛顆粒浸膏粉1.75 g、0.88 g、0.44 g每千克體質量(分別相當于人臨床服用劑量的20倍、10倍、5倍)，佐米曲普坦組灌胃給予佐米曲普坦片0.83 mg每千克體質量(相當于人臨床推薦劑量5 mg的10倍)，模型組、正常對照組給予蒸餾水灌胃，各組給藥容積均為10 mL·kg-1，每日1次，連續(xù)灌胃5 d。

1.2.2 造模 除正常對照組外，各組在給藥第5天灌胃前1 h皮下注射硝酸甘油注射液，10 mg每千克體質量。正常對照組皮下注射等體積生理鹽水。

1.2.3 標本的采集與處理 于第5天造模4 h后，分別取大鼠動靜脈混合血5 mL于抗凝劑為10%EDTA-Na2的采血管和抗凝劑中。4 ℃ 3 000 rpm離心10 min，分離血漿，于低溫冰箱中-20 ℃儲存?zhèn)溆?。取血后，斷頭取腦，在0 ℃～4 ℃的生理鹽水中分離含腦干、丘腦、下丘腦區(qū)域的腦組織約300 mg，稱重，放入預先編號的錫箔紙中，置于-20 ℃低溫冰箱儲存，備用。按照試劑盒要求，測定血漿中5-HT、NE、ET含量，測定腦組織中5-HT、NE、DA含量。

2 結果

除正常對照組外，各組于皮下注射硝酸甘油后5～10 min，大鼠均出現(xiàn)搖頭、震顫、前肢頻繁撓頭、頭頸部抽動、煩躁不安，爬籠次數(shù)增多等反應。模型組大鼠的上述反應持續(xù)1.5 h后逐漸消失，大鼠表現(xiàn)為靜臥不動；給藥組大鼠的上述反應持續(xù)0.5 h后逐漸消失，大鼠表現(xiàn)為靜臥不動。

2.1 川芎定痛顆粒對偏頭痛大鼠血管活性物質的影響

與正常對照組比較，模型組血漿中5-HT與ET含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組可明顯升高其含量，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，佐米曲普坦組、川芎定痛顆粒低劑量組有升高的趨勢；NE含量明顯降低，正常對照組與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，川芎定痛顆粒高劑量組的含量明顯升高，而佐米曲普坦組、川芎定痛顆粒中、低劑量組則是含量降低，與模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表1)。

2.2 川芎定痛顆粒對偏頭痛大鼠腦組織神經(jīng)遞質的影響

與正常對照組比較，模型組腦組織內(nèi)5-HT含量差異雖無統(tǒng)計學意義，但模型組含量降低趨勢明顯，且川芎定痛顆粒高劑量組的含量明顯升高，與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，佐米曲普坦組、川芎定痛顆粒中、低劑量組含量亦有升高的趨勢；與正常對照組比較，模型組腦組織內(nèi)NE含量明顯升高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組的含量明顯降低，與模型組比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；與正常對照組比較，模型組腦組織內(nèi)DA含量降低，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組的含量升高，與正常對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表2)。

表1 川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠血漿中活性物質含量的影響

表2 川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠腦組織內(nèi)神經(jīng)遞質含量的影響

3 討論

5-HT又名血清素，是一種自體活性物質，約90%合成和分布于腸嗜鉻細胞，通常與ATP等物質一起儲存于細胞顆粒內(nèi)。趙斌等(2008)以經(jīng)顱多普勒超聲檢查40例偏頭痛患者和30例正常者的顱內(nèi)多條動脈的平均血流速度，高效液相色譜紫外光法測定患者血漿內(nèi)5-HT含量來研究偏頭痛患者腦血流動力學與血漿內(nèi)5-HT含量關系時發(fā)現(xiàn)，偏頭痛患者雙側大腦中動脈、雙側椎動脈以及基底動脈的血流速度與血漿內(nèi)5-HT含量存在明顯正相關。本實驗在造模前預防給予川芎定痛顆粒，能明顯升高偏頭痛大鼠血漿中5-HT含量，推測川芎定痛顆粒可能有調(diào)節(jié)偏頭痛前驅期5-HT大量從血小板釋放或發(fā)作期5-HT過度耗竭的作用，而具體是在哪個環(huán)節(jié)發(fā)揮作用還有待于進一步的研究。另外，模型大鼠腦組織內(nèi)5-HT含量較正常組顯著下降，而提前給予川芎定痛顆粒可以顯著升高偏頭痛大鼠腦組織內(nèi)的5-HT含量，考慮可能與5-HT是一種痛調(diào)制遞質，調(diào)節(jié)中樞內(nèi)5-HT含量可以防止偏頭痛發(fā)作期5-HT含量的過度減少所導致丘腦的痛閾值降低，疼痛敏感性增強(郭宇博，2010)。

NE、ET、DA也是與偏頭痛的發(fā)生密切相關的單胺類神經(jīng)遞質。有國外資料表明，偏頭痛病人血漿內(nèi)DβH的活性較高，而DβH可以催化DA產(chǎn)生NE(Fettesetal,1985)。國內(nèi)也有學者研究了偏頭痛患者的NE變化。謝煒等(1999)對20例無先兆偏頭痛患者進行了發(fā)作期和間歇期血漿以及血小板內(nèi)NE含量的比較，結果發(fā)作期偏頭痛患者血漿中NE含量低于對照組，與本研究結果吻合。川芎定痛顆粒提高偏頭痛發(fā)作期血管中NE的含量可能還有利于對抗由于5-HT的大量耗竭而致使的血管擴張，減輕頭痛癥狀。硝酸甘油致偏頭痛大鼠腦組織內(nèi)的NE含量較正常組高，與血漿內(nèi)相反，預防給予川芎定痛顆粒能降低偏高的NE水平，有利于緩解頭痛。在偏頭痛發(fā)病過程中，DA是除5-HT外最重要的神經(jīng)遞質，但對其作用機制認識還較少(Masciaetal.,1998)。本研究中，川芎定痛顆粒預防給藥能升高硝酸甘油致偏頭痛大鼠腦組織內(nèi)較低的DA水平。中外學者大量研究表明，ET可能通過血管收縮、增加微血管通透性及調(diào)節(jié)痛覺感知等參與了偏頭痛發(fā)作的病理生理過程，臨床上也檢測到偏頭痛患者在發(fā)作期和間歇期血漿內(nèi)ET含量高于正常對照組(任旭，牛爭平，2005)。但本研究中硝酸甘油致偏頭痛大鼠血漿內(nèi)ET含量低于正常對照組，與國內(nèi)一些實驗研究結果相似(姚干，2002)。川芎定痛顆粒預防給藥可以升高偏頭痛大鼠血漿內(nèi)降低的ET水平。實驗研究和臨床研究為什么會出現(xiàn)相悖的結果需要進一步的探討研究。

此外，本研究中僅檢測了5-HT、DA、NE、ET幾個對于偏頭痛比較重要的實驗指標。其他如降鈣素相關基因肽(CGRP)、一氧化氮(NO)、P物質、β-內(nèi)啡肽、組織胺等重要的指標尚未檢測，未來的工作需要進一步完善，以進一步探索川芎定痛顆粒治療偏頭痛的機制。

郭宇博. 2010. 不同配伍中藥方劑對偏頭痛大鼠血清和腦組織中5-HT含量的影響[J]. 中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志, 16(3): 206-208.

任旭, 牛爭平. 2005. 偏頭痛病人血漿內(nèi)皮素及降鈣素基因相關肽測定的臨床意義[J]. 中西醫(yī)結合心腦血管病雜志, 3(11): 960-962.

王玲玲, 范吉平. 2007. 偏頭痛動物模型在中藥研究中的應用[J]. 中華中醫(yī)藥學刊, 25(4): 760-762.

謝煒, 陳寶田, 朱成全. 1999. 無先兆偏頭痛患者血DA、NE變化的初步研究[J]. 中華神經(jīng)科雜志, 32(6): 346.

姚干. 2002. 大川芎丸治療偏頭痛的細胞及分子藥理作用機理的實驗研究[D].成都:成都中醫(yī)藥大學.

趙斌,董軍立,秦碧勇,等. 2008. 偏頭痛患者腦血流動力學與血漿5-羥色胺的關系[J].廣東醫(yī)學, 29(12): 2022-2023.

Fettes I, Gawel M, Kuzniak S,etal. 1985. Endorphin levels in headache syndromes[J]. Headache, 25(1): 37.

Mascia A, Afra J, Schoenen J. 1998. Dopamine and migraine: a review of pharmacological, biochemical, neurophysiological, and therapeutic data[J]. Cephalalgia An International Journal of Headache, 18(4): 174-182.

Study of the Effect of the Chuanxiong Dingtong Grains on the Rats with Migraine

PAN Yuan, PENG Cheng*, LIU Jianlin

(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China)

Objective To investigate the effect of Chuanxiong Dingtong grains (CXDT grains) on the rats with migraine. Method A total of 60 rats were randomly divided into 6 groups including the normal control group, the model control group, the zolmitriptan control group (0.83 mg·kg-1), the high-dose (1.75 g powdered extract per kg), the medium-dose (0.88 g powdered extract per kg) and the low-dose group (0.44 g powdered extract per kg). Five days after intragastric administration of appropriate drugs, except the normal control group, the rats were subcutaneously injected with nitroglycerin (10 mg·kg-1) to establish migraine rat model. The content of 5-hydroxytryptamine (5-HT), norepinephrine (NE), endothelin (ET) in the plasma and 5-HT, NE, dopamine (DA) in the brain were tested by ELASA. Results Compared with the normal control group, the contents of 5-HT, NE, and ET were significantly decreased (P<0.05) in the plasma of the migraine model rats, and the content of 5-HT in brain tissue showed a decreasing trend, the content of NE was significantly increased (P<0.05), and the content of DA was significantly decreased (P<0.05). Therefore, CXDT grains can significantly improve the active substance in rat plasma and brain neurotransmitter content of migraine rat model. Conclusion CXDT grains had a positive effect on the rats with migraine by adjusting the levels of the brain neurotransmitters.

Chuanxiong Dingtong grains; migraine; monoamine neurotransmitters

2015-11-18 接受日期：2016-01-30 基金項目:國家支撐計劃項目(2009BAI84B00)

潘媛(1987—), 女, 博士研究生, 助理實驗師, 研究方向: 中藥藥效與毒理學, E-mail:panyuan1129@163.com

*通信作者Corresponding author, E-mail:pengchengchengdu@126.com

Q95-33

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1000-7083(2016)02-0252-04