肖廣俠，徐文遠(yuǎn)，賈 磊*，鄭德斌，張 博，馬 超

(1.天津渤海水產(chǎn)研究所, 天津 300457;2.臨沂出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東 臨沂 276034)

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懸浮物對(duì)褐牙鲆肌肉抗氧化酶活性及相關(guān)基因表達(dá)的影響*

肖廣俠1，徐文遠(yuǎn)2，賈 磊1*，鄭德斌1，張 博1，馬 超1

(1.天津渤海水產(chǎn)研究所, 天津 300457;2.臨沂出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東 臨沂 276034)

為探究褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)幼魚在懸浮物脅迫下的耐受機(jī)制，以兩種規(guī)格褐牙鲆為實(shí)驗(yàn)材料，在懸浮物質(zhì)量濃度為5 000，10 000 mg/L脅迫下，研究了褐牙鲆肌肉中總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)、過氧化氫酶(CAT) 酶活力及SOD2、GST、CAT的mRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：T-SOD酶活力具有一定的變化趨勢，B幼魚T-SOD酶活力呈現(xiàn)先升高、再降低、再升高的趨勢，SOD2基因相對(duì)表達(dá)量在第48小時(shí)達(dá)到峰值(P<0.05)，兩種幼魚T-SOD基因相對(duì)表達(dá)變化趨勢在第72小時(shí)和第96小時(shí)相反；CAT酶活力呈現(xiàn)先升高、再降低的趨勢，A幼魚及5 000 mg/L實(shí)驗(yàn)組B幼魚CAT基因相對(duì)表達(dá)與CAT酶活力變化趨勢一致；B幼魚GST酶活力實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組(P<0.05)，GST基因相對(duì)表達(dá)量在第24小時(shí)和第48小時(shí)實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組(P<0.05)、在第72小時(shí)和第96小時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組無顯著差異。研究結(jié)果表明：懸浮物對(duì)褐牙鲆抗氧化酶活力及相關(guān)基因的表達(dá)具有一定的影響；不同體長規(guī)格的褐牙鲆抗氧化酶活力及相關(guān)基因的表達(dá)存在差異；T-SOD酶活力、GST酶活力與相關(guān)基因表達(dá)量變化趨勢不一致，CAT酶活力與相關(guān)基因表達(dá)量變化趨勢一致。本研究可為揭示褐牙鲆應(yīng)對(duì)懸浮物脅迫的耐受機(jī)制及褐牙鲆耐懸浮物品種選育提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

褐牙鲆；懸浮物；抗氧化系統(tǒng)酶；基因表達(dá)

褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)隸屬于鰈形目(Pleuronectiformes)、牙鲆科(Paralichthyidae)、牙鲆屬(Paralichthys)，屬于肉食性底棲魚類，具有變態(tài)發(fā)育過程。褐牙鲆主要分布于中國黃渤海及朝鮮、日本沿岸水域，是我國重要的海水增養(yǎng)殖魚類[1]。近幾年來，人工增殖放流恢復(fù)海洋中的生物資源的措施日益受到重視，僅2014年在天津渤海灣海區(qū)放流的中國對(duì)蝦達(dá)到14億尾，褐牙鲆達(dá)到147.2萬尾。渤海由于寬陸岸淺海的特性及其特殊地理位置，再加上陸地眾多河流匯入，使其成為中國懸浮物質(zhì)量最高的海域[2]；另外，隨著我國海洋經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，港口碼頭建設(shè)及填海造地等海洋工程越來越多，在建設(shè)施工過程中產(chǎn)生大量水體底泥懸浮，導(dǎo)致海域懸浮物濃度大幅度升高，改變了水體的物理、化學(xué)環(huán)境[3]。將人工培育的水產(chǎn)苗種直接投放到海域中，能否適應(yīng)海域自然水域環(huán)境，尤其褐牙鲆機(jī)體對(duì)懸浮物脅迫的耐受機(jī)制，在這方面尚無報(bào)道。

抗氧化系統(tǒng)酶是生物體內(nèi)應(yīng)對(duì)不利環(huán)境條件的重要物質(zhì)，在生物處于不適宜的生存條件下，抗氧化系統(tǒng)各種酶的活力會(huì)發(fā)生變化，來應(yīng)對(duì)外界的環(huán)境脅迫，這對(duì)環(huán)境污染有一定的生物指示作用[4]。目前針對(duì)影響褐牙鲆抗氧化系統(tǒng)酶活力的研究集中于重金屬及環(huán)境因子，王凡等[5-6]研究表明SOD，CAT，GSH-PX 活性變化可以反映牙鲆在銅污染下的傷害程度，3種酶活性均表現(xiàn)為低濃度誘導(dǎo)、高濃度抑制；Huang等[7]和Cao等[8]分別研究了重金屬汞(Hg)及鎘(Cr)對(duì)牙鲆的抗氧化系統(tǒng)酶活力的影響及重金屬在體內(nèi)的富集情況；王茂林等[9]研究揭示了過高濃度鈣(Ca)、鎂(Mg)對(duì)褐牙鲆幼魚肝臟的SOD和CAT活性產(chǎn)生一定抑制作用；柳意樊[10]研究了不同升溫模式下，褐牙鲆和雜交鲆SOD，CAT，GSH，LZM和PK相對(duì)活力的變化情況;黃偉[11]研究了Hg，Pb，Zn對(duì)褐牙鲆仔稚魚SOD，CAT，MDA及GSH的活性的影響;Lou等[12]認(rèn)為高水溫對(duì)褐牙鲆幼魚肝臟中SOD及CAT酶活性產(chǎn)生顯著影響，褐牙鲆幼魚肝臟中SOD及CAT酶活力與幼魚生長相關(guān)性顯著。徐冬冬等[13]研究表明褐牙鲆肝臟中SOD及CAT活力隨脅迫溫度升高而降低。在懸浮物對(duì)漁業(yè)生物抗氧化酶影響方面，目前也出現(xiàn)較多報(bào)道。張雪等[14]研究發(fā)現(xiàn)菲律賓蛤仔鰓絲SOD活力對(duì)懸浮物脅迫的反應(yīng)更迅速;楊國軍等[15]研究發(fā)現(xiàn)四角蛤蜊鰓絲抗氧化酶活力會(huì)對(duì)懸浮物脅迫快速更靈敏;蔣玫等[16]研究了底泥浸出液對(duì)脊尾白蝦抗氧化酶相關(guān)基因mRNA 轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)在一定時(shí)間內(nèi)有一定的誘導(dǎo)作用；王廣軍等[17]的研究表明底泥懸浮物質(zhì)量濃度對(duì)雜色鮑的生理生化存在一定影響。但是對(duì)懸浮物對(duì)褐牙鲆抗氧化系統(tǒng)影響方面的研究尚無報(bào)道。

針對(duì)以上情況，本實(shí)驗(yàn)以兩種規(guī)格褐牙鲆幼魚為實(shí)驗(yàn)材料，研究其在不同懸浮物質(zhì)量濃度下體內(nèi)總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)、過氧化氫酶(CAT) 酶活力及SOD2，GST，CAT的mRNA轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)變化情況，分析了褐牙鲆幼魚底泥懸浮物的耐受免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，以期為褐牙鲆的抗逆品種選育及增殖放流提供理論依據(jù)，為進(jìn)一步評(píng)估海洋工程對(duì)放流生物的損害情況提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)魚

實(shí)驗(yàn)選用的褐牙鲆幼魚取自于天津市興盛水產(chǎn)有限公司，共分兩種規(guī)格：A幼魚體長(4.21±0.41) cm，B幼魚體長(14.53±1.58) cm。本研究挑選體質(zhì)健康、大小均勻的個(gè)體用于實(shí)驗(yàn)，兩種幼魚分別使用60條。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)用水

實(shí)驗(yàn)用水為高鹽鹵水兌淡水，經(jīng)過沉淀、砂濾、次氯酸鈉(NaClO)消毒、篩絹過濾等處理。水溫：(22±1) ℃；鹽度：25～28；pH：8.0～8.2；OD：5.8～7.5 mg/L；NH4-N：0.012～0.248 mg/L；NO2-N：0.005～0.011 mg/L；NO3-N：0.287～0.363 mg/L；PO4-P：0.012～0.025 mg/L。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)底泥

實(shí)驗(yàn)用懸浮物泥樣采自天津大神堂海域(117°55′18″E，39°09′01″N；位于漢沽淺海生態(tài)系統(tǒng)海洋特別保護(hù)區(qū)，在整個(gè)保護(hù)區(qū)內(nèi)具有代表性)的底泥表層，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)通風(fēng)晾干，然后放于烘箱中(80 ℃)烘干至恒重，冷卻后研磨處理，用100目篩絹過篩，放置于干燥器中低溫保存。實(shí)驗(yàn)所用沉積物中各成分含量檢測參照《海洋監(jiān)測規(guī)范》[18]進(jìn)行，分析結(jié)果見表1。其主要成分含量均符合《海洋沉積物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》[19]第一類要求，不會(huì)對(duì)受試生物產(chǎn)生毒害作用。

表1 實(shí)驗(yàn)底泥主要成分含量(mg/kg)Table 1 Contents of major components in the bottom sediment used for the experiments(mg/kg)

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 懸浮物溶液的配置方法

將烘干泥樣與海水按需濃度配置懸浮物溶液，實(shí)驗(yàn)前充分?jǐn)嚢瑁沟啄喑浞秩芙鉃閼腋∥铩?/p>

1.2.2 懸浮物粒徑的測量

懸浮物粒徑使用維納2008D激光粒度儀測量，底泥粒徑X80=12.70 μm，粒徑X<5 μm所占的比例為29.98%，具體粒度特征見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)用底泥粒徑特征Table 2 Grain size characteristics of the bottom sediment used in the experiments

1.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)參照國家標(biāo)準(zhǔn)《水質(zhì)·物質(zhì)對(duì)淡水魚(斑馬魚)急性毒性測定方法》[20]進(jìn)行，褐牙鲆幼魚暫養(yǎng)24 h后開始實(shí)驗(yàn)，懸浮物溶液濃度設(shè)置為5 000和10 000 mg/L，每個(gè)質(zhì)量濃度均設(shè)置5個(gè)平行組，另外設(shè)置相應(yīng)的對(duì)照組(不加泥樣)，懸浮物濃度認(rèn)為0 mg/L。實(shí)驗(yàn)容器為15 L透明整理箱，每個(gè)整理箱加入各質(zhì)量濃度懸浮物溶液10 L，放入實(shí)驗(yàn)魚4尾，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程不投餌。采用氣石均勻充氣及人工定時(shí)攪拌等方法，使底泥始終處于懸浮狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)期間不換水。懸浮物脅迫24，48，72，96 h后分別從每個(gè)實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)挑選3尾幼魚取樣。

1.2.4 樣品處理

剪取褐牙鲆幼魚背部肌肉，按照1∶10(W/V)加入預(yù)冷PBS緩沖溶液(pH=6.4)放置冰上以玻璃勻漿器勻漿，離心(4 ℃，800 g, 10 min)取上清液置-80 ℃冰箱保存用于3種抗氧化酶活性的測定，另-80 ℃冰箱保存肌肉樣本用于抗氧化酶相關(guān)基因表達(dá)的測定。

1.2.5 抗氧化酶活性的測定

T-SOD，GST，CAT酶活力測定均根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行(試劑盒購自南京建成生物工程研究所)。其中37 ℃時(shí)，每分鐘每毫克組織蛋白使反應(yīng)體系的吸光度(OD)值增加0.01 L/θ·cm時(shí)，定義為1個(gè)總抗氧化能力(T-SOD)單位；每毫克組織蛋白質(zhì)，每分鐘扣除非酶反應(yīng)的作用，使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1 μmol/L為一個(gè)GST酶活力單位；每毫克組織蛋白每秒鐘分解1 μmol的H2O2的量為1個(gè)CAT活力單位[21]。所有指標(biāo)吸光值均使用UV-7504單光束紫外可見分光光度計(jì)測定。

1.3 抗氧化酶基因的表達(dá)

1.3.1 引物設(shè)計(jì)

根據(jù)褐牙鲆SOD2,CAT,GST的cDNA序列，以Primer 5.0設(shè)計(jì)Real-time PCR 擴(kuò)增特異性引物，選擇基因穩(wěn)定表達(dá)及片段大小適合的β-actin作為內(nèi)參基因，引物序列詳見表3。引物合成和cDNA 序列測定委托上海生工生物工程有限公司完成。

表3 Real-time PCR 擴(kuò)增的特異性引物Table 3 Specific primers used for the real-time PCR amplification

1.3.2 總RNA提取cDNA第一鏈的合成

將保存于-80 ℃冰箱的樣品取出后于冰上融化，并按照TRizol試劑說明書提取總RNA，RNA 沉淀用DEPC水溶解，用核酸定量儀(Thermo Scientific)測定260和280 nm處的吸收值，檢測RNA的產(chǎn)量和純度，并使用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行RNA非變性電泳檢測RNA 的完整性。取等量(2 μg)的RNA，按照All-in-OneTMFirst-Strand cDNA Synthesis Kit(GeneCopoeiaCat.No.AORT-0050)說明書反轉(zhuǎn)錄各組織的總RNA，合成cDNA 第一鏈。

1.3.3 Real-time PCR 擴(kuò)增

采用Real-time PCR(SYBR Green)2-△△Ct相對(duì)定量方法，按照Platinum?SYBR?Green qPCR SuperMix-UDG試劑盒說明書進(jìn)行操作，反應(yīng)體系如下：SYBR?Premix Ex Super Mix (2×) 10.0 μL，F(xiàn)orward primer(10 μmol/L) 2.0 μL，Reverse primer(10 μmol/L) 2.0 μL,PCR板每個(gè)孔分別加入：DNA 1.0 μL，ddH2O 5.0 μL,反應(yīng)總體積共20 μL。將樣品在PCR 管內(nèi)混勻后分裝入96孔PCR板(Axygen)中，瞬時(shí)離心后放入ABI 7500 Fast熒光定量PCR儀中進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共40 個(gè)循環(huán)；熔解曲線條件為95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s, 60 ℃ 15 s。反應(yīng)完成后，用ABI 7500 system軟件分析結(jié)果。

1.3.4 Comparative Delta-delta Ct相對(duì)定量

由標(biāo)準(zhǔn)曲線可知，目的基因與內(nèi)參擴(kuò)增效率基本一致，均在95%以上，符合Comparative Delta-delta Ct 相對(duì)定量計(jì)算要求，Comparative Delta-delta Ct相對(duì)定量參考Livak和Schmittgen的方法[22]，目的基因的表達(dá)量定義為待測樣品與對(duì)照組中目的基因的表達(dá)差異倍數(shù)(Fold change)，計(jì)算公式為

1.4 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)使用軟件SPSS 22.0 進(jìn)行，所得數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示，使用單因素方差分析ANOVA進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)(P<0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 懸浮物脅迫對(duì)褐牙鲆幼魚T-SOD 酶及基因表達(dá)的影響

懸浮物對(duì)褐牙鲆幼魚肌肉T-SOD酶活力的影響見圖1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：懸浮物對(duì)褐牙鲆A幼魚在第72和第96小時(shí)時(shí)T-SOD酶活力具有誘導(dǎo)作用，5 000和10 000 mg/L A幼魚T-SOD酶活力分別在第96小時(shí)和第24小時(shí)達(dá)到峰值(P<0.05)；在懸浮物脅迫下，B幼魚T-SOD酶活力呈現(xiàn)先升高、再降低、再升高的趨勢，并且在第96小時(shí)時(shí)達(dá)到峰值(P<0.05)；懸浮物對(duì)兩種幼魚T-SOD酶活力在第72小時(shí)影響趨勢相反，在第96小時(shí)誘導(dǎo)趨勢一致。

圖1 褐牙鲆幼魚體內(nèi)T-SOD活性隨懸浮物脅迫時(shí)間的變化Fig.1 Changes of the T-SOD activity in the body of P. olivaceus with the time of SS stress

懸浮物對(duì)褐牙鲆幼魚肌肉內(nèi)SOD2基因相對(duì)表達(dá)的影響見圖2，在5 000 mg/L實(shí)驗(yàn)組，A幼魚SOD2基因相對(duì)表達(dá)在24～96 h具有升高的趨勢(P<0.05)，B幼魚SOD2基因相對(duì)表達(dá)在24～96 h呈現(xiàn)先降低、再升高、再降低的趨勢；在10 000 mg/L實(shí)驗(yàn)組，A幼魚SOD2基因相對(duì)表達(dá)在48～96 h呈現(xiàn)升高趨勢(P<0.05)，B幼魚SOD2基因相對(duì)表達(dá)在48～96 h呈現(xiàn)先升高、再降低的趨勢。兩種幼魚T-SOD基因相對(duì)表達(dá)都在第48小時(shí)達(dá)到峰值(P<0.05)。A幼魚T-SOD酶活力與基因表達(dá)量在第72小時(shí)和第96小時(shí)實(shí)驗(yàn)組都呈現(xiàn)增高趨勢(P<0.05)，B幼魚T-SOD酶活力與基因表達(dá)量在第48小時(shí)和第96小時(shí)變化趨勢相反，在第72小時(shí)誘導(dǎo)趨勢一致。

圖2 褐牙鲆幼魚體內(nèi)SOD2基因相對(duì)表達(dá)量隨懸浮物脅迫時(shí)間的變化Fig.2 Changes of the relative gene expression of T-SOD in the body of P. olivaceus with the time of SS stress

2.2 懸浮物脅迫對(duì)褐牙鲆CAT酶及基因表達(dá)的影響

懸浮物對(duì)褐牙鲆幼魚肌肉內(nèi)CAT酶活力的影響見圖3，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：懸浮物脅迫下，兩種規(guī)格的幼魚體內(nèi)CAT酶活力均呈現(xiàn)先升高、后降低的趨勢，在第24小時(shí)和第48小時(shí)實(shí)驗(yàn)組幼魚CAT酶活力高于對(duì)照組(P<0.05)，在第72小時(shí)和第96小時(shí)實(shí)驗(yàn)組幼魚CAT酶活力低于對(duì)照組(P<0.05)，5 000和10 000 mg/L實(shí)驗(yàn)組對(duì)兩種規(guī)格幼魚CAT酶活力在各時(shí)間點(diǎn)的誘導(dǎo)或者抑制趨勢一致。

圖3 褐牙鲆幼魚體內(nèi)CAT活性隨懸浮物脅迫時(shí)間的變化Fig.3 Changes of the CAT activity in the body of P. olivaceus with the time of SS stress

懸浮物對(duì)褐牙鲆幼魚肌肉內(nèi)CAT基因相對(duì)表達(dá)的影響見圖4，在懸浮物脅迫下，A幼魚及5 000 mg/L實(shí)驗(yàn)組B幼魚CAT基因表達(dá)量在24～96 h呈現(xiàn)先升高后降低趨勢，并且第24小時(shí)和第48小時(shí)實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組(P<0.05)，第72小時(shí)和第96小時(shí)實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組，CAT基因相對(duì)表達(dá)量在第24小時(shí)達(dá)到峰值(P<0.05)。10 000 mg/L實(shí)驗(yàn)組B幼魚第72小時(shí)和第96小時(shí)CAT基因相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組(P<0.05)，這與CAT酶活力的變化趨勢相同。

圖4 褐牙鲆幼魚體內(nèi)CAT基因相對(duì)表達(dá)量隨懸浮物脅迫時(shí)間的變化Fig.4 Changes of the relative gene expression of CAT in the body of P. olivaceus with the time of SS stress

2.3 懸浮物脅迫對(duì)褐牙鲆GST酶及相關(guān)基因表達(dá)的影響

懸浮物對(duì)褐牙鲆幼魚肌肉內(nèi)GST酶活力的影響見圖5，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：懸浮物對(duì)A幼魚在第24小時(shí)、B幼魚在第24小時(shí)和第72小時(shí)肌肉內(nèi)CAT酶活力呈現(xiàn)抑制趨勢，10 000 mg/L實(shí)驗(yàn)組A幼魚在第72小時(shí)和第96小時(shí)GST酶活力高于對(duì)照組(P<0.05)，5 000 mg/L實(shí)驗(yàn)組A幼魚在第48小時(shí)和第96小時(shí)GST酶活力與對(duì)照組無顯著差異。

圖5 褐牙鲆幼魚體內(nèi)GST活性隨懸浮物脅迫時(shí)間的變化Fig.5 Changes of the GST activity in the body of P. olivaceus with the time of SS stress

懸浮物對(duì)褐牙鲆幼魚肌肉內(nèi)GST基因相對(duì)表達(dá)的影響見圖6，在第24小時(shí)和第48小時(shí)懸浮物實(shí)驗(yàn)組對(duì)褐牙鲆A，B幼魚GST基因相對(duì)表達(dá)誘導(dǎo)效果明顯，實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組(P<0.05)，并且GST基因相對(duì)表達(dá)在第24小時(shí)達(dá)到峰值(P<0.05)；在第72小時(shí)和第96小時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異不顯著，實(shí)驗(yàn)組在第24小時(shí)和第48小時(shí)GST基因相對(duì)表達(dá)量明顯高于第72小時(shí)和第96小時(shí)GST基因相對(duì)表達(dá)量；懸浮物對(duì)B幼魚GST酶活力與相對(duì)基因表達(dá)量在第24小時(shí)和第48小時(shí)影響趨勢相反。

圖6 褐牙鲆幼魚體內(nèi)GST基因相對(duì)表達(dá)量隨懸浮物脅迫時(shí)間的變化Fig.6 Changes of the relative gene expression of GST in the body of P. olivaceus with the time of SS stress

3 討 論

在外界環(huán)境因子的脅迫下，生物體會(huì)產(chǎn)生一種會(huì)對(duì)細(xì)胞和基因結(jié)構(gòu)造成損壞的活性氧分子，主要是超氧陰離子(O2-)、羥自由基(·OH)和H2O2[23]。低濃度的活性氧對(duì)生物體具有一定的積極作用[24]，但是濃度過高的活性氧會(huì)對(duì)生物體產(chǎn)生損傷[25]。生物體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)能清除過量的活性氧，保護(hù)體內(nèi)各組織免受活性氧的損傷[26]，抗氧化系統(tǒng)主要包括酶類抗氧化劑和非酶類抗氧化劑，目前針對(duì)生物體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)主要集中于抗氧化系統(tǒng)酶活力方面的研究。

3.1 懸浮物對(duì)褐牙鲆總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力及基因相對(duì)表達(dá)的影響

SOD是機(jī)體內(nèi)唯一以O(shè)2為底物的酶，能催化超氧化物陰離子自由基(O·2-)發(fā)生歧化反應(yīng)，及時(shí)清除生物體內(nèi)的O·2-自由基，避免·OH的產(chǎn)生，在清除生物體內(nèi)有害物質(zhì)時(shí)發(fā)揮著重要的作用。已有研究表明，生物體的SOD酶活性與脅迫因子的強(qiáng)弱有關(guān)，大致表現(xiàn)為：輕度脅迫，SOD酶活力升高；重度脅迫，SOD酶活力下降[27-29]。本研究中5 000和10 000 mg/L試驗(yàn)組中A幼魚在72和96 h時(shí)T-SOD酶活力變化趨勢一致，原因可能是與褐牙鲆屬于底棲魚類、對(duì)懸浮物的耐受力較強(qiáng)有關(guān)，懸浮物濃度并未達(dá)到對(duì)褐牙鲆T-SOD酶活力產(chǎn)生重度脅迫的作用。在懸浮物脅迫下，B幼魚T-SOD酶活力呈現(xiàn)先升高、再降低、再升高的趨勢，并且在96 h達(dá)到峰值(P<0.05)，推測原因是：在0～24 h，懸浮物脅迫可能刺激幼魚體內(nèi)產(chǎn)生較多的活性氧離子，為減少活性氧離子對(duì)機(jī)體的損害，魚體內(nèi)大量合成T-SOD酶，造成T-SOD酶活力升高，在24～72 h，魚體短暫適應(yīng)了懸浮物脅迫的環(huán)境，體內(nèi)T-SOD酶合成減弱，當(dāng)脅迫時(shí)間到達(dá)96 h，超過了幼魚的耐受時(shí)間，又重新誘導(dǎo)了體內(nèi)T-SOD酶的合成，直至T-SOD酶活力在96 h達(dá)到峰值，這與張雪等[14]對(duì)懸浮脅迫對(duì)菲律賓蛤仔對(duì)SOD影響的研究結(jié)果基本一致。

T-SOD酶活性及基因表達(dá)在受到懸浮物脅迫后，在開始的24 h或者48 h內(nèi)存在一定增加的傾向，這與Stebbing[30]提出的“毒物興奮效應(yīng)”表現(xiàn)類似。但是脅迫時(shí)間過長，如B幼魚T-SOD酶活力在48和72 h及SOD2的mRNA相對(duì)表達(dá)量在72和96 h實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組，表明長時(shí)間懸浮物脅迫可能對(duì)褐牙鲆T-SOD酶活力及SOD2的mRNA 相對(duì)表達(dá)產(chǎn)生抑制作用。A幼魚在懸浮物脅迫下，T-SOD酶活力與SOD2的mRNA 相對(duì)表達(dá)量在72和96 h誘導(dǎo)一致，這與A幼魚T-SOD酶活力及SOD2的mRNA相對(duì)表達(dá)量變化趨勢相反，原因推測是與不同體長規(guī)格的褐牙鲆對(duì)懸浮物耐受力不同，體長較小的A幼魚為消除體內(nèi)過多的活性氧分子，在72和96 h T-SOD酶活力較高，而體長較大的B幼魚由于體內(nèi)較強(qiáng)的懸浮物耐受能力，不需要誘導(dǎo)過多的T-SOD酶活力表達(dá)，便可以減少活性氧分子對(duì)機(jī)體的損害。

3.2 懸浮物對(duì)褐牙鲆過氧化氫酶(CAT)活力及基因相對(duì)表達(dá)的影響

生物體在脅迫因子的影響下，機(jī)體產(chǎn)生過多的H2O2，H2O2可產(chǎn)生活性極高的羥自由基(·OH)，對(duì)生物體產(chǎn)生損傷[23]，為減輕污染因子對(duì)機(jī)體傷害，生物體可調(diào)節(jié)抗氧化水平來清除機(jī)體中羥自由基和活性氧[31-33]。CAT是一種含鐵的抗氧化酶，廣泛存在于生物體各種組織[32]，能清除體內(nèi)過多H2O2，通過Haber-Weiss反應(yīng)[31]阻斷羥自由基(·OH)的產(chǎn)生，保持機(jī)體正常的生理功能。外源環(huán)境脅迫因子會(huì)造成細(xì)胞膜損傷，導(dǎo)致細(xì)胞膜透性增加，由于Haber-Weiss反應(yīng)使CAT活性下降，而細(xì)胞內(nèi)H2O2的水平不會(huì)產(chǎn)生大幅度變化[33]。

A幼魚CAT酶活力及基因相對(duì)表達(dá)量變化趨勢一致，都呈現(xiàn)先誘導(dǎo)、再抑制趨勢，這表明CAT酶活力與基因相對(duì)表達(dá)存在較為明顯的正相關(guān)關(guān)系。另外，懸浮物對(duì)CAT酶活力的影響可能存在一定的時(shí)間效應(yīng)關(guān)系，所以在48 h以前CAT酶活力及A魚CAT基因相對(duì)表達(dá)被誘導(dǎo)(P<0.05)，在48～96 h時(shí)CAT酶活力及A魚CAT基因相對(duì)表達(dá)被抑制(P<0.05)，這與Stebbing[30]提出的“毒物興奮效應(yīng)”表現(xiàn)類似，也與蔣玫等[16]在底泥浸出液對(duì)脊尾白蝦CAT酶活力及基因表達(dá)研究、楊國軍等[15]在懸浮物對(duì)四角蛤蜊鰓CAT酶活力的研究結(jié)果一致。短時(shí)間脅迫會(huì)誘導(dǎo)褐牙鲆幼魚體內(nèi)的CAT酶活力，產(chǎn)生較多的CAT酶，來減輕懸浮物脅迫對(duì)機(jī)體的傷害，清除體內(nèi)由于懸浮物脅迫產(chǎn)生的過多活性氧。當(dāng)脅迫時(shí)間超過一定的限度，可能是褐牙鲆適應(yīng)了脅迫環(huán)境，也可能是過長時(shí)間脅迫超過了褐牙鲆的耐受限度，造成了褐牙鲆CAT酶活力及基因相對(duì)表達(dá)量的下降。懸浮物脅迫下，兩種規(guī)格的褐牙鲆CAT酶活力及基因表達(dá)相對(duì)量誘導(dǎo)或者抑制時(shí)間相一致，這表明，褐牙鲆肌肉內(nèi)CAT的mRNA相對(duì)表達(dá)量與蛋白酶活性一致。

3.3 懸浮物對(duì)褐牙鲆谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)活力及基因相對(duì)表達(dá)的影響

作為生物體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分之一，GST參與生物機(jī)體的解毒代謝和抗氧化等過程，在生物體對(duì)各類來源的有毒物質(zhì)的降解過程中均起著重要作用。GST的主要作用機(jī)制是催化谷胱甘肽(GSH)的巰基與一些內(nèi)源性有毒物質(zhì)(過氧化物)和外源性有毒物質(zhì)(醌類化合物、α,β-不飽和羰基化合物)進(jìn)行軛合反應(yīng)，消除這些物質(zhì)的毒性，保護(hù)機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)免受有毒物質(zhì)的損傷，從而達(dá)到維持機(jī)體正常生理環(huán)境的目的[34-35]。在本文研究中，懸浮物對(duì)A幼魚24 h、B幼魚24～72 h肌肉內(nèi)CAT酶活力呈現(xiàn)抑制趨勢，這與王凡等[5]的較高濃度Cu2+對(duì)牙鲆GSH-PX的活性產(chǎn)生抑制研究結(jié)果相一致，原因可能是當(dāng)脅迫因子的濃度高于一定程度時(shí)，生物體內(nèi)GST酶未能及時(shí)清除體內(nèi)產(chǎn)生的有害物質(zhì)，導(dǎo)致生物體細(xì)胞結(jié)構(gòu)受到破壞，細(xì)胞中酶活性又逐漸下降[28]。A幼魚在48 h以后GST酶活力趨勢不明顯，這可能與不同體長大小的魚GST酶活力對(duì)懸浮物耐受力不同有關(guān)，一般來講，魚體越大，對(duì)外界脅迫因子的耐受力越強(qiáng)，B規(guī)格魚體內(nèi)GST酶活力下降，說明一部分GST酶可能進(jìn)行降解因懸浮物脅迫機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，保護(hù)體內(nèi)一些蛋白質(zhì)免受損傷，以達(dá)到保護(hù)機(jī)體維持正常的生命代謝活動(dòng)。

褐牙鲆GST基因相對(duì)表達(dá)量在24～48 h內(nèi)呈現(xiàn)明顯的誘導(dǎo)效應(yīng)，但在72～96 h與對(duì)照組無顯著差異，表明在24～48 h懸浮物脅迫誘導(dǎo)了GSTmRNA的相對(duì)表達(dá)，但是此階段內(nèi)幼魚GST酶活力并未呈現(xiàn)增加的趨勢，褐牙鲆GST酶活力與mRNA相對(duì)表達(dá)量不一致，推測原因如下：第一、mRNA表達(dá)水平與蛋白水平不一定完全一致，可能有時(shí)間上的差異；第二、蛋白質(zhì)檢測方法的不同，在具體的酶活力測定實(shí)驗(yàn)中受到的干擾也有可能造成結(jié)果的差異；第三、mRNA的表達(dá)與蛋白的表達(dá)水平的線性關(guān)系只有0.4～0.5左右，影響蛋白質(zhì)半衰期的因素(mRNA 轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控、各種翻譯后的修飾)較多，這些因素都可能造成蛋白質(zhì)水平與mRNA表達(dá)水平的不一致[36]。

[1] WANG B, ZHANG C H, ZUO Y M, et al. The research introduction to biology and farming technologyof main species ofParalichthys[J].Marine Fisheries Research, 2004, 25(5): 86-72. 王波, 張朝輝, 左嚴(yán)明, 等. 牙鲆屬主要經(jīng)濟(jì)魚類的生物學(xué)及養(yǎng)殖研究概況[J].海洋水產(chǎn)研究,2004,25(5):86-72.

[2] YU W. Study on distribution variation of surface suspended solids in Bohai[D].Beijing: The University of Chinese Academy of Sciences,2011: 1-5. 于煒. 渤海表層懸浮物分布變異規(guī)律的研究[D].北京：中國科學(xué)院研究生院，2011： 1-5.

[3] ZHAO K H,translating. Chemical composition and material sources of marine suspended matter[J].Coastal Engineering,1999,15(3): 58-63. 趙奎寰譯.海洋懸浮物的化學(xué)組成及物質(zhì)來源[J].海岸工程,1999,15(3):58-63.

[4] LIU S, ZHOU Q X. Research advances in antioxidant enzymes for diagnosing environmental contamination[J].Chinese Journal of Ecology,2008,27(10):1791-1798．劉碩, 周啟星.抗氧化酶診斷環(huán)境污染研究進(jìn)展[J].生態(tài)學(xué)雜志,2008,27(10):1791-1798.

[5] WANG F, ZHAO Y F, LV J C, et al. Effect of Cu2+on CAT, SOD, GSH-PX of Paralichthys olivaceus[J].Journal of Huazhong Agricultural University,2007,26(6):836-838.王凡, 趙元鳳, 呂景才,等.銅對(duì)牙鲆CAT、SOD和GSH-PX活性的影響[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007, 26(6):836-838.

[6] WANG F, ZHAO Y F, LIU C F. Effect of Cu2+on the antioxidative defence in muscle ofParalichthysolivaceus[J].Freshwater Fisheries, 2007,37(2):27-29. 王凡, 趙元鳳, 劉長發(fā). Cu2+對(duì)牙鲆肌肉抗氧化防御系統(tǒng)的影響[J].淡水漁業(yè),2007,37(2):27-29.

[7] HUANG W, CAO L, YE Z J, et al. Antioxidative responses and bioaccumulation in Japanese flounder larvae and juveniles under chronic mercury exposure[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology， 2010, 152(1): 99-106.

[8] CAO L, HUANG W, LIU J H, et al.Accumulation and oxidative stress biomarkers in Japanese flounder larvae and juveniles under chronic cadmium exposure[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Pharmacology, Toxicology and Endocrinology, 2010, 151(3): 386-392.

[9] WANG M L, ZHANG X M, HUANG G Q, et al. Effects of Ca2+and Mg2+concentrations on growth,SOD and CAT enzymatic activity of juvenileParalichthysolivaceus[J].Progress in Fishery Sciences, 2010, 31(3):29-36.王茂林, 張秀梅, 黃國強(qiáng), 等. 不同鈣、鎂濃度對(duì)褐牙鲆幼魚生長及SOD和CAT酶活力的影響[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2010, 31(3):29-36.

[10] LIU Y F. Study on the thermal tolerance of juvenileParalichthysolivaceusand the hybridsP.olivaceus♀×P.dentatus.♂[D].Qingdao:Ocean University of China,2014: 66-81.柳意樊. 褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)與雜交鲆(褐牙鲆P.olivaceus♀×大西洋牙鲆P.dentatus♂)幼魚高溫耐受性研究[D].青島：中國海洋大學(xué)， 2014：66-81.

[11] HUANG W. Toxic effects of mercury, lead and zinc on early life stages of flounder(Paralichthysolivaceus)[D].Beijing: University of Chinese Academy of Sciences,2010, 45-57.黃偉.汞、鉛、鋅對(duì)褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)早期發(fā)育過程毒理作用的研究[D].北京：中國科學(xué)院研究生院, 2010： 45-57.

[12] LOU B,XU D D, XU H X, et al. Effect of high water temperature on growth, survival and antioxidant enzyme activities in the Japanese flounderParalichthysolivaceus[J].African Journal of Agricultural Research, 2011, 6(12): 2875-2882.

[13] XU D D, LOU B, ZHAN W, et al. Effect of high temperature stress on growth performance and activities of antioxidant enzymes in liver of olive flounderParalichthysolivaceus[J].Journ Aloffisheries of China, 2010, 34(7):1100-1106. 徐冬冬, 樓寶, 詹煒,等. 高溫脅迫對(duì)褐牙鲆生長及肝臟抗氧化酶活性的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2010, 34(7):1100-1106.

[14] ZAHNG X, SONG L, YANG G J, et al. Effect of suspended solids on superoxide dismutase activity in Manila ClamRuditapesphilippinarum[J].FISHERIESS SCIENCE.2013, 32(6): 328-332.張雪, 宋倫, 楊國軍,等. 懸浮物對(duì)菲律賓蛤仔超氧化物歧化酶活力的影響[J].水產(chǎn)科學(xué), 2013, 32(6): 328-332.

[15] YANG G J, SONG L ,WANG N B, et al.Effects of suspended solid on the survival, growth, and antioxidant enzyme activities ofMactraveneriformis[J].Chinese Journal of Ecology, 2013, 32(8):2097-2103. 楊國軍, 宋倫, 王年斌, 等. 懸浮物對(duì)四角蛤蜊生存和氧化酶活性的影響[J].生態(tài)學(xué)雜志, 2013, 32(8):2097-2103.

[16] JIANG M, LI L, SHEN X Q, et al.Effects of lixivium from ooze mud exposure on activity of antioxidant enzymesand related genes expression ofExopalaemoncarinicaudamysis larvae[J].Ecology and Environmental Sciences, 2013, 22(7):1182-1186. 蔣玫, 李磊, 沈新強(qiáng), 等.底泥浸出液對(duì)脊尾白蝦抗氧化解毒酶及相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào), 2013, 22(7): 1182-1186.

[17] WANG G J, XIE J, YU D G, et al.Physiological responses of abaloneHaliotisdivericolorto suspended sediment stress[J].Journal of Dali an Fisheries University, 2007, 22(5):353-357. 王廣軍, 謝駿,余德光,等. 雜色鮑對(duì)底泥懸浮物脅迫的生理響應(yīng)[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 2007, 22(5):353-357.

[18] Specification for marine monitorying: GB 17378-2007[S].Beijing:Standards Press of China, 2007.海洋監(jiān)測規(guī)范: GB 17378-2007[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

[19] Marine sediment quality: GB 18668-2002[S].Beijing:Standards Press of China,2002.海洋沉積物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn): GB 18668-2002[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2002.

[20] Water quality-determination of the acute toxicity of substance to a freshwater fish(BrachydaniorerioHamilion-Bachanan):GB/T 13267-91[S].Beijing:Standards Press of China,1992.水質(zhì)·物質(zhì)對(duì)淡水魚(斑馬魚)急性毒性測定方法:GB/T 13267-91[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1992.

[21] WANG J Z, FAN M.Protein technical manual[M].Beijing:Science Press,2000: 42-47.汪家政, 范明. 蛋白質(zhì)技術(shù)手冊(cè)[M].北京: 科學(xué)出版社,2000: 42-47.

[22] LIVAK K J, SCHMITTGEN T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T))method[J].Methods,2001, 25(4):402-408.

[23] WEN C G, DAI G Y, XIE Y H, et al.Pb2+Effect on superoxide anion and scavenging hydroxyl free radicaland analysis soluble protein from anodonta woodioma[J].Journal of Nanchang University (Natural Science), 2009,33(4): 380-384.文春根, 代功園, 謝彥海, 等. 鉛對(duì)背角無齒蚌抗超氧陰離子能力與抑制羥自由基的影響以及可溶性蛋白分析[J].南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(理科版),2009,33(4): 380-384.

[24] ZHENG Z H, DONG S L, TIAN X L. Effects of cyclic pH with different durations on the growth ofLitopenaeusvannamei[J].Periodical of Ocean University of China,2008, 38(1):45-51.鄭振華，董雙林，田相利. pH不同處理時(shí)間的周期性變動(dòng)對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長的影響[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2008, 38(1):45-51.

[25] FRANCO R, SNCHE-OLEA R, REYES-REYES E M, et al. Environmental toxicity, oxidative stress and apoptosis: Ménageàtrois[J].Mutation Research/Fundamental & Molecular Mechanisms of Mutagenesis, 2009,674(2):3-22.

[26] CAO L. Toxic effects of cadmium and copper to early life stages of flounder (Paralichthysolivaceus)[D].Beijing:The University of Chinese Academy of Sciences, 2010:95-114. 曹亮. 銅、鎘對(duì)褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)早期發(fā)育階段的毒理效應(yīng)研究[D].北京：中國科學(xué)院研究生院, 2010:95-114.

[27] LIU C Q, LIU LI J, ZHANG Y J. et al. Effect of Ca2+/Mg2+in brine water from saltworks on growth and activities of APK and SOD in white legged shrimp[J].Fisheries Science, 2007, 26(2): 67-69. 劉存歧, 劉麗靜, 張亞娟,等.基于鹵水的養(yǎng)殖用水中Ca2+/Mg2+對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長及體內(nèi)SOD和AKP的影響[J].水產(chǎn)科學(xué), 2007, 26(2): 67-69.

[28] LU S Q, LIU S J, LIU H Y. Effects of Cu2+on activities of protecting enzymes SOD,CAT and GSH-PX in liver tissue of Monopterus albus[J].Journal of Fishery Sciences of China,2002, 9(2): 138-141. 魯雙慶, 劉少軍, 劉紅玉. Cu2+對(duì)黃鱔肝臟保護(hù)酶 SOD,CAT,GSH-PX 活性的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2002,9(2):138-141.

[29] YANG L H, FANG Z Q, ZHENG W B. Experiment with effect of cadmium on activity of superoxide dismutase in gill and liver tissue of crucian[J].Journal of Safety and Environment,2003, 3(3): 13-16. 楊麗華, 方展強(qiáng), 鄭文彪. 鎘對(duì)鯽魚鰓和肝臟超氧化物歧化酶活性的影響[J].安全與環(huán)境學(xué)報(bào), 2003, 3(3): 13-16.

[30] STEBBING A R D. Hormesis the stimulation of growth by low levels of inhibition[J].Science of the Total Environment, 1982, 22(3):213-234.

[31] FENG T, ZHENG H Y, HONG W S, et al. Effect of benzo(a)pyrene on antioxidant enzyme activities inBoleophthalmuspectinirostrisliver[J].Chinese Journal of Applied Ecology, 2001,12(3):442-424. 馮濤,鄭徽云,洪萬樹,等.苯并(a)花對(duì)大彈涂魚肝臟抗氧化酶活性影響的初步研究[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2001, 12(3):442-424.

[32] FANG Y Z, LI W J. Basic theory of free radical and enzyme and its application in biology and medicine[M].Beijing: Science Press,1989:129-146. 方允中, 李文杰. 自由基與酶基礎(chǔ)理論及其在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用[M].北京: 科學(xué)出版社, 1989: 129-146.

[33] SHEN A L, MA S Q, JIA Q H. Research on the physiological responses ofSparusmacrocephalusstressedby Cu2+and Cd2+[J].Marine Fisheries,2007, 29(3):23-29. 沈盎綠, 馬勝偉, 賈秋紅. 黑鯛受銅、鎘脅迫的生理反應(yīng)[J].海洋漁業(yè),2007, 29(3):23-29.

[34] MASELLA R, DI Benedetto R D, VARI R, et al. Novel mechanisms of natural antioxidant compounds in biological systems: involvement of glutathione and glutathione-related enzymes[J].The Journal of Nutritional Biochemistry, 2005, 16(10): 577-586.

[35] SHIMADA T. Xenobiotic-metabolizing enzymes involved in activation and detoxification of carcinogenic polycyclic aromatic hydrocarbons[J].Drug Metabolism and Pharmacokinetics, 2006, 21(4):257-276.

[36] MATHEWS M B, SONENBERG N, HERSHEY J W B. Translational control in biology and medicine[M].New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2007: 534-546.

Received: December 10, 2015

Effects of Suspended Substances on Antioxidant Enzyme Activities in Muscle ofParalichthysolivaceusand Related Gene Expressions

XIAO Guang-xia1, XU Wen-yuan2, JIA Lei1, ZHENG De-bin1, ZHANG Bo1, MA Chao1

(1.BohaiFisheriesResearchInstituteofTianjin, Tianjin 300457, China; 2.LinyiEntry-ExitInspectingandQuarantineBureau, Linyi 276034, China)

In order to study the tolerance mechanism of juvenile ofParalichthysolivaceusisunder the stress of suspended substances (SS), two sizes ofP.olivaceusare chosen as the experimental material and the activities of total superoxide dismutase (T-SOD), catalase (CAT), glutathions S-transferase (GST) in the muscle ofP.olivaceusand the changes in mRNA transcription levels of SOD2, CAT and GST are studied under the conditions of suspended substance concentrations of 5 000 mg/L and 10 000 mg/L. The experimental results show that the enzyme activity of T-SOD has a certain changing tendency: in the B size of juvenile the enzyme activity of T-SOD shows a trend of first increased-then decreased and then increased again and the relative gene expression of T-SOD reaches to the peak value (P<0.05) in 48 h. The relative gene expressions of T-SOD in the two sizes of juveniles show an opposite changing tendency in 72 h and 96 h. The enzyme activity of CAT tends to increase first and then to decrease and the relative gene expressions of CAT in the A size of juvenile and the B size of juvenile tested under the condition of 5 000 mg/L are consistent in their changing tendency with the CAT enzyme activity. The enzyme activity of GST in the B size of juvenile is lower in the experimental groups than that in the control group (P<0.05). The relative gene expression of GST is higher in the 24 h and 48 h experimental groups than that in the control group (P<0.05), but shows no significant difference in the 72 h and 96 h experimental groups and the control group. All these results indicate that the SS has a certain effect on the antioxidant enzyme activities and gene expressions ofP.olivaceusand different size ofP.olivaceusvaries in the antioxidant enzyme activity and gene expression. The enzyme activities of T-SOD and GST differ in their changing trends from the relative gene expression, whereas the changing trend of the CAT enzyme activity is consistent with that of the relative gene expression. This study may provide basic data not only for studying the tolerance mechanism ofParalichthysolivaceusisunder the SS stress, but also for breeding theP.olivaceusspecies which can be tolerant of suspended substances.

Paralichthysolivaceus; suspended substances(SS); antioxidant system enzyme; gene expression

2015-12-10

天津市水產(chǎn)局青年科技創(chuàng)新項(xiàng)目——懸浮物脅迫對(duì)褐牙鲆存活、抗氧化系統(tǒng)酶活力及基因表達(dá)的研究(J2014-02)；天津市農(nóng)委農(nóng)業(yè)科技合作項(xiàng)目——海水新品種的引進(jìn)及示范(201304070)；國家鲆鰈類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目——天津綜合試驗(yàn)站建設(shè)(CARS-05-z01)；天津市科技計(jì)劃項(xiàng)目——海珍品高效養(yǎng)殖技術(shù)集成與應(yīng)用(15zxbfnc00100)；國家農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目——鲆鰈類高效生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)的集成與示范(2014GB2A100531)

肖廣俠(1984-)，男，工程師，碩士，主要從事水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種及增殖放流評(píng)估方面研究. E-mail:gxxiao@163.com

*通訊作者：賈 磊(1983-)，男，高級(jí)工程師，碩士，主要從事苗種培育及生態(tài)養(yǎng)殖方面研究. E-mail: tianjinbohaisuo@163.com

Q945.78

A

1671-6647(2016)04-0542-11

10.3969/j.issn.1671-6647.2016.04.010