張 爽，張璞瑜， 蔣達青， 張 媚，張立欽， 林海萍

（1.浙江農(nóng)林大學 亞熱帶森林培育國家重點實驗室培育基地，浙江 臨安 311300；2.浙江農(nóng)林大學 生物農(nóng)藥高效制備技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室，浙江 臨安311300）

棘托竹蓀抑菌物質(zhì)的乙醇提取工藝優(yōu)化與抑菌作用

張 爽1,2，張璞瑜1,2， 蔣達青1,2， 張 媚1,2，張立欽1,2， 林海萍1,2

（1.浙江農(nóng)林大學 亞熱帶森林培育國家重點實驗室培育基地，浙江 臨安 311300；2.浙江農(nóng)林大學 生物農(nóng)藥高效制備技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室，浙江 臨安311300）

為研究棘托竹蓀Dictyophora echinovolvata乙醇提取物對食品腐敗菌和植物病原菌的抑菌作用，以不同體積分數(shù)乙醇溶液為提取劑，對棘托竹蓀子實體進行浸提，通過單因素和正交試驗測定了乙醇體積分數(shù)、料液比、浸提時間和浸提溫度等4個因素對棘托竹蓀提取物抑菌效果的影響，獲得的最佳提取工藝為乙醇體積分數(shù)90%，料液比50.0 g·L－1，浸提時間2.0 h，浸提溫度75℃。用牛津杯法和菌絲生長速率法分別測定了棘托竹蓀乙醇提取液對食品腐敗菌與植物病原菌的抑菌作用。結(jié)果表明：棘托竹蓀乙醇提取液對食品腐敗細菌和植物病原真菌均具有抑制作用，但對啤酒酵母不表現(xiàn)抑制作用。在供試的4種食品腐敗細菌中，抑菌效果從高到低依次是金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus，枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis，蠟狀芽孢桿菌Bacillus cereus，大腸埃希菌Escherichia coli，抑菌圈直徑分別為24.08，23.12，23.02和22.16 mm，可見棘托竹蓀乙醇提取液對革蘭氏陽性細菌的抑菌效果顯著大于革蘭氏陰性細菌。在供試的5種植物病原真菌中，抑菌效果從高到低依次為玉米大斑病菌Exserohilum turcicum，油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum，番茄灰霉病菌Botrytis cinerea，小麥赤霉病菌Fusarium graminearum，蘋果腐爛病菌Valsa mali，抑菌率分別為75.01%，57.67%，49.65%，21.34%和9.26%，且五者間均存在顯著性差異（P＜0.05），可見棘托竹蓀乙醇提取液對真菌的抑菌作用因菌種而異。圖4表4參16

微生物學；棘托竹蓀；乙醇提??；工藝優(yōu)化；抑菌作用；食品腐敗菌；植物病原菌

棘托竹蓀Dictyophora echinovolvata屬擔子菌門Basidiomycotina腹菌綱Gasteromycetes鬼筆科Phallaceae竹蓀屬Dictyophora真菌，是中國科學工作者發(fā)現(xiàn)并于1988年定名的新種［1］。棘托竹蓀是一種名貴的食用菌，香氣濃郁，脆嫩爽口，并具有降低血液中脂肪、膽固醇和延緩食品腐敗的功能［2］。盧惠妮等［3］研究發(fā)現(xiàn)棘托竹蓀提取物對5種常見的食源性致病菌均具有明顯抑制作用，抑菌率從大到小依次為副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus，單增李斯特菌Listeria monocytogenes，大腸埃希菌Escherichia coli O157:H7，腸炎沙門氏菌Salmonella enteritidis，金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus。棘托竹蓀提取物同時具有較高的熱穩(wěn)定性和廣泛的pH值穩(wěn)定性；劉文波等［4］利用超聲波輔助破碎竹蓀干粉，制取水、乙醇和石油醚為提取介質(zhì)的浸提物以及竹蓀揮發(fā)油，利用液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法對5種供試菌：大腸埃希菌、腸炎沙門菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌和單增李斯特菌等進行抑菌實驗，結(jié)果所有提取物對供試菌都具有抑菌活性；梁鳴等［5］報道棘托竹蓀醇提取物抑菌效果優(yōu)于水提取物。盡管目前國內(nèi)外對棘托竹蓀的研究已比較廣泛，但對乙醇提取工藝的優(yōu)化研究還比較少，且目前對于竹蓀抑菌作用的研究絕大多數(shù)還集中在對食品腐敗菌的研究，對植物病原菌的抑菌研究尚未見報道。本研究對棘托竹蓀抑菌活性物質(zhì)的乙醇提取工藝進行優(yōu)化，測定了提取液對常見食品腐敗菌與部分植物病原真菌的抑制效果，以期為利用竹蓀開發(fā)成天然的食品防腐劑和生物農(nóng)藥奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料 棘托竹蓀子實體干品購于浙江菇爾康食用菌有限公司，鼓風干燥箱60℃烘干至恒量，粉碎物過80目篩，密封避光保存。

1.1.2 供試菌 選用常見食品腐敗菌：大腸埃希菌，金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis，蠟狀芽孢桿菌Bacillus cereus和啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae；部分植物病原真菌：玉米大斑病菌Exserohilum turcicum，油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum，番茄灰霉病菌Botrytis cinerea，蘋果腐爛病菌Valsa mali和小麥赤霉病菌Fusarium graminearum為供試菌。菌種由生物農(nóng)藥高效制備技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室與浙江農(nóng)林大學林業(yè)與生物技術(shù)學院微生物學實驗室提供。

1.1.3 培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200.00 g，葡萄糖20.00 g，瓊脂20.00 g。馬鈴薯去皮切成塊煮30 min，用紗布過濾取汁，加葡萄糖和瓊脂溶化，補水至1 000 mL，pH值自然。Luria-Bertani（LB）培養(yǎng)基：胰化蛋白胨10.00 g，酵母提取物5.00 g，氯化鈉10.00 g，補水至1 000 mL，pH值自然。培養(yǎng)基121℃蒸汽滅菌20 min備用。

1.2 方法

1.2.1 提取方法 取棘托竹蓀粉末10.00 g，分別按照33.3，40.0，50.0，66.7，100.0 g·L－1的料液比加入60.0，70.0，80.0，90.0，1 000.0 g·kg－1的乙醇水溶液，混勻后置于60，65，70，75，80℃水浴鍋中處理1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 h，過濾，所得濾渣再按原條件進行抽提，過濾，棄濾渣，合并2次濾液，

過濾除菌濃縮到10.0 mL，置于4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 抑菌試驗 ①供試菌株的準備。在無菌室中將供試菌株接入相應(yīng)斜面培養(yǎng)基上，細菌37℃恒溫培養(yǎng)18～24 h，植物病原真菌、酵母菌在30℃恒溫培養(yǎng)44～48 h后備用。②供試菌懸液制備。用接種環(huán)挑取少許菌體于裝有9.0 mL無菌水的試管內(nèi)，制成菌懸液。細菌用麥氏比濁法計數(shù)，酵母菌用血球計數(shù)板計數(shù)，調(diào)整菌懸液比例為含細胞（或孢子）量109～1010個·L－1。③對食品腐敗菌抑菌作用測定。吸取0.2 mL供試細菌懸液涂布于LB平板上，37℃培養(yǎng)18～24 h，0.2 mL啤酒酵母涂布于PDA平板上，30℃培養(yǎng)48 h，采用祖若夫等［6］的牛津杯法測定抑菌圈，重復(fù)3次。④對植物病原真菌的抑制率測定。吸取0.2 mL質(zhì)量濃度為100.0 g·L－1棘托竹蓀提取液涂布于PDA平板上制成含藥培養(yǎng)基平板，在對照上則涂布相同體積的溶劑；用打孔器取直徑為8 mm的供試菌菌餅，移至含藥培養(yǎng)基平板中央，使菌餅培養(yǎng)基面向上；置于26℃培養(yǎng)44～48 h，采用歐陽桐嬌等［7］的菌絲生長速率法測定菌落直徑，重復(fù)3次，用公式（1）計算抑菌率。

1.2.3 提取工藝優(yōu)化試驗 ①乙醇體積分數(shù)對提取物抑菌能力的影響。準確稱取10.00 g竹蓀粉末，以50.0 g·L－1的料液比分別加入到體積分數(shù)為60%，70%，80%，90%和100%的乙醇水溶液中，于80℃水浴2 h后過濾，收集濾渣，用濾渣代替竹蓀粉末，用相同的方法再處理1次，合并2次的濾液，過濾并濃縮至10.0 mL。按照方法1.2.2節(jié)中③以金黃色葡萄球菌作為指示菌種測定提取液的抑菌圈直徑。②料液比對提取物抑菌能力的影響。準確稱取10.00 g竹蓀粉末，分別以33.3，40.0，50.0，66.7，100.0 g·L－1的料液比加入到體積分數(shù)90%乙醇水溶液中，于80℃水浴2.0 h后過濾，之后操作同①。③浸提時間對提取物抑菌能力的影響。準確稱取10.00 g竹蓀粉末，以50.0 g·L－1的料液比加入到體積分數(shù)為90%乙醇水溶液中，于80℃分別水浴1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 h后過濾，之后操作同①。④浸提溫度對提取物抑菌能力的影響。準確稱取10.00 g竹蓀粉末，以50.0 g·L－1的料液比加入到體積分數(shù)90%乙醇水溶液中，分別于60，65，70，75和80℃水浴2.5 h后過濾，之后操作同①。⑤多因素正交試驗。選擇乙醇體積分數(shù)（A），浸提溫度（B），料液比（C），浸提時間（D）4個因素進行4因素3水平正交設(shè)計，采用L9（34）正交表進行正交試驗以確定最佳工藝參數(shù)（表1）。

表1 正交試驗因素水平表Table 1 Factors and levels of orthogonal experiment

2 結(jié)果與分析

2.1 單提取工藝因素試驗結(jié)果

2.1.1 乙醇體積分數(shù)對提取物抑菌能力的影響 乙醇提取液對金黃色葡萄球菌的抑菌結(jié)果見圖1。從圖1可見：隨著乙醇體積分數(shù)的加大，抑菌效果不斷增強，乙醇體積分數(shù)從60%～90%時，抑菌圈直徑顯著增加（P＜0.05），而乙醇體積分數(shù)為90%～100%時，抑菌圈直徑增加不顯著，綜合考慮工藝成本，確定90%乙醇水溶液為竹蓀提取溶劑。乙醇體積分數(shù)的差異造成抑菌圈直徑的顯著差異，可能是因為不同體積分數(shù)乙醇提取液的抑菌成分存在差異，乙醇體積分數(shù)高更有利于抑菌物質(zhì)的浸出。

2.1.2 料液比對提取物抑菌能力的影響 從圖2可以看出：隨著料液比的增加，提取液的抑菌效果不斷下降，料液比從33.3 g·L－1到40.0 g·L－1和50.0 g·L－1，從66.7 g·L－1到100.0 g·L－1，抑菌圈直徑降低均不顯著，而料液比從50.0 g·L－1到66.7 g·L－1，抑菌圈直徑顯著降低（P＜0.05），因此確定在料液比為50.0 g·L－1時進行抑菌物質(zhì)的提取。固液提取中，料液比的大小在較大程度上影響著傳質(zhì)的效率和速度，濃度差是提取過程的一個推動力，保持良好的濃度差可得到較好的提取效果［8］。

2.1.3 浸提時間對提取物抑菌能力的影響 分別浸提1.5，2.0，2.5，3.0與3.5 h后，乙醇提取液對金黃色葡萄球菌的抑菌結(jié)果見圖3。由圖3可得：隨著浸提時間的增加，提取液的抑菌效果不斷上升，提取時間從1.5 h增加到2.0 h，從2.5 h增加到3.0 h和3.5 h，抑菌圈直徑增加均不顯著，而提取時間從2.0 h增加到2.5 h，抑菌圈直徑顯著增加（P＜0.05）。綜合考慮時間成本，確定提取時間為2.5 h。

圖1 不同體積分數(shù)乙醇提取液對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑的影響Figure 1 Effect of ethanol concentration on the inhibitory zone diameter of Staphylococcus aureus

圖2 不同料液比提取液對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑的影響Figure 2 Effect of material and resolvent ration on the inhibitory zone diameter of S.aureus

2.1.4 浸提溫度對提取物抑菌能力影響 從圖4可見：隨著浸提溫度的升高，提取液的抑菌效果不斷上升，提取溫度從60℃增加到65℃和70℃，抑菌圈直徑顯著增加（P＜0.05），而提取溫度從70℃增加到75℃和80℃，抑菌圈直徑增加均不顯著，綜合考慮能源成本，確定提取溫度為70℃。提取溫度是影響浸出效果的重要因素，溫度高有利于有效成分的溶解和滲透擴散，促進其浸出［9］。

圖3 不同浸提時間提取液對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑的影響Figure 3 Effect of ethanol water bath time on the inhibitory zone diameter of S.aureus

圖4 不同浸提溫度提取液對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑的影響Figure 4 Effect of ethanol water bathtemperature on the inhibitory zone diameter of S.aureus

2.2 多提取因素正交試驗結(jié)果

以金黃色葡萄球菌為測試菌株，對棘托竹蓀子實體的提取工藝進行乙醇體積分數(shù)、料液比、浸提時間、浸提溫度等4個因素的3個水平進行正交實驗測試，結(jié)果見表2。從表2極差分析結(jié)果可知：影響竹蓀有效成分提取率的主次因素順序為A（乙醇體積分數(shù)）＞D（浸提溫度）＞B（料液比）＞C（浸提時間），A2B3C1D3為提取參數(shù)因子的最佳組合，即乙醇體積分數(shù)為90%，料液比為40.0 g·L－1，浸提時間為2.0 h，浸提溫度75℃。

對4個因素進行方差分析，結(jié)果見表3。從表3可見：A和D因子對提取液抑菌效果有顯著性影響（P＜0.05），B和C因子對提取液抑菌沒有顯著性影響。說明乙醇體積分數(shù)、浸提溫度對竹蓀中抑菌物質(zhì)的提取效果起主要作用。

2.3 抑菌效果

按照正交實驗優(yōu)化的提取工藝對棘托竹蓀的抑菌物質(zhì)進行提取，測得的它對食品腐敗菌和植物病原真菌的抑菌結(jié)果分別見表4～5。由表4可見：棘托竹蓀乙醇提取液對食品腐敗細菌均具有抑制作用，但對啤酒酵母不表現(xiàn)抑制作用。在供試的4種食品腐敗細菌中，抑菌效果從高到低依次是金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和大腸埃希菌。其中提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑顯著大于

枯草芽孢桿菌與蠟狀芽孢桿菌（P＜0.05），同時提取物對這3種革蘭氏陽性菌（G+）的抑菌圈直徑亦顯著大于革蘭氏陰性菌（G－）大腸埃希菌（P＜0.05），可見在當前優(yōu)化工藝下，棘托竹蓀乙醇提取液對革蘭氏陽性菌的抑制效果顯著大于對革蘭氏陰性菌的抑制效果。

表2 正交試驗結(jié)果Table 2 Design and results of orthogonal experiment

從表5可知：棘托竹蓀乙醇提取液對供試5種植物病原真菌菌絲生長的抑制效果從高到低依次為玉米大斑病菌、油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌、小麥赤霉病菌和蘋果腐爛病菌，且五者間的差異均為顯著（P＜0.05），可見棘托竹蓀乙醇提取液對真菌菌絲生長具有廣譜的抑制作用，但抑制作用強弱因真菌種類而異。

表3 正交實驗方差分析表Table 3 VARA analyze of orthogonal experiment

3 結(jié)論與討論

獲得棘托竹蓀子實體抑菌物質(zhì)提取優(yōu)化工藝為：乙醇體積分數(shù)90%，料液比40.0 g·L－1，浸提時間2.0 h，浸提溫度75℃。極差分析確定影響竹蓀有效成分提取率效率的主次因素順序為A（乙醇體積分數(shù)）＞D（浸提溫度）＞B（料液比）＞C（浸提時間），A2B3C1D3為提取參數(shù)因子的最佳組合，即乙醇體積分數(shù)為90%，料液比為40.0 g·L－1，浸提時間為2.0 h，浸提溫度75℃。方差分析發(fā)現(xiàn)乙醇體積分數(shù)和浸提溫度對竹蓀抑菌有效成分提取起關(guān)鍵作用。

本研究結(jié)果表明：棘托竹蓀乙醇浸提液對食品腐敗細菌有明顯抑菌效果，但對啤酒酵母不表現(xiàn)抑制作用，該結(jié)果與郝景雯等［10－11］和宋飛飛等［12］的研究結(jié)論一致。棘托竹蓀乙醇浸提液對4種供試細菌的抑菌效果從強到弱依次是金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和大腸埃希菌，與林陳強［13］報道的結(jié)果一致?？梢?，革蘭氏陽性菌相對革蘭氏陰性菌對棘托竹蓀乙醇提取物質(zhì)更敏感。革蘭氏陽性菌和

革蘭氏陰性菌細菌對棘托竹蓀乙醇提取物的敏感性差異可能與革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的細胞壁結(jié)構(gòu)與組成的差異有關(guān)。棘托竹蓀乙醇提取物對革蘭氏陽性菌的抑制機理值得進一步探明。

表4 棘托竹蓀醇提物對供試細菌、酵母菌的抑菌圈直徑Table 4 Antimicrobial activity of the ethanol extract on tested bacteria and Saccharomyces cerevisiae

表5 棘托竹蓀醇提物對供試植物病原真菌的抑菌率Table 5 Antimicrobial activity of the ethanol extract on phytopathogenic fungi

本研究發(fā)現(xiàn)：竹蓀醇提物對5種植物病原真菌均具有一定抑制作用，其中對植物生產(chǎn)危害性大的玉米大斑病菌、油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌等3種植物病原菌抑制效果較好，因此，竹蓀具有開發(fā)成生物農(nóng)藥的較大潛力。

梁鳴等［5］研究認為：棘托竹蓀丙酮提取物的化學成分主要成分為酮、有機酸、倍半萜、酯等，其中酮類物質(zhì)占主導(dǎo)地位，其對細菌抑菌作用明顯，而對霉菌和酵母菌抑菌作用不明顯。羅盛蓮等［14］研究表明：棘托竹蓀乙酸乙酯浸膏水溶液的主要成分是脂肪酸及其酯類、烯烴、鄰苯二甲酸酯類、酚類和酮類，其中有機酸和芳香酯類含量較多，對供試的細菌、霉菌和酵母菌均有明顯抑菌作用。迄今為止，棘托竹蓀乙醇提取物中抑菌活性物質(zhì)的化學成分尚未明確，值得進一步探討。

由于竹蓀本身是一種名貴食用菌，具有較大的食用與保健功能，其可食部分價格較高，為竹蓀開發(fā)利用帶來了一定的阻力，但是竹蓀采收加工時，菌蓋和菌托均被棄而不用，而這2部分占總生物量的60%以上［15］。檀東飛等［16］用水蒸汽蒸餾法提取棘托竹蓀菌托干品揮發(fā)油，表明其揮發(fā)油對受試的霉菌、酵母菌、細菌都有強的抑菌作用，若棘托竹蓀的菌蓋和菌托可提取抑菌活性物質(zhì)而加以利用，可變廢為寶。這些都值得進一步深入研究。

［1］ 上海農(nóng)業(yè)科學院食用菌研究所.中國食用菌志［M］.北京：中國林業(yè)出版社,1991:271.

［2］ 暴增海,周超,夏振強,等.棘托竹蓀發(fā)酵液的抑菌作用研究［J］.北方園藝,2010（3）:171－173.

BAO Zenghai,ZHOU Chao,XIA Zhenqiang,et al.Study on bacteriostatic action of Dictyophora echinovolvata fermentation broth［J］.Northern Hortic,2010（3）:171－173.

［3］ 盧惠妮,潘迎捷,孫曉紅,等.棘托竹蓀子實體抑菌活性的研究［J］.食品科學,2009,30（15）:120－123.

LU Huini,PAN Yingjie,SUN Xiaohong,et al.Antibacterial activity of water extract of Dictyophora echinovolvata fruitbody［J］.Food Sci,2009,30（15）:120－123.

［4］ 劉文波,趙勇,孫曉紅,等.竹蓀提取物對食源性細菌的抑菌特性研究［J］.微生物學雜志,2013,33（4）:50－54.

LIU Wenbo,ZHAO Yong,SUN Xiaohong,et al.Inhibition effects of zhusun （Dictyophora spp.）extract on foodborne pathogens［J］.J Microbiol,2013,33（4）:50－54.

［5］ 梁鳴,檀東飛,李惠珍,等.棘托竹蓀丙酮提取物的化學成分及丙酮、乙醇、水提取物的抑茵活性研究［C］//中國菌物學會.首屆海峽兩岸食（藥）用菌學術(shù)研討會論文集.北京：［s.l.］,2005:197－201.

［6］ 祖若夫,胡寶龍,周德慶.微生物學實驗教程［M］.上海:復(fù)旦大學出版杜,1993:199－203.

［7］ 歐陽桐嬌,林勇,張迪,等.長裙竹蓀發(fā)酵液抗菌活性初步研究［J］.江西農(nóng)業(yè)學報,2012,24（6）:76－79.

OUYANG Tongjiao,LIN Yong,ZHANG Di,et al.Preliminary study on antimicrobial activity of fermentation liquor of Dictyophora indusial［J］.Acta Agric Jiangxi,2012,24（6）:76－79.

［8］ 呂峰.我國薏苡仁資源主要品質(zhì)及薏苡仁活性多糖的研究［D］.福州:福建農(nóng)林大學,2008.

L譈Feng.Studies on Main Qualities of Coix Lachryma-jobi Kernel Resources of China and Activative Coixan［D］. Fuzhou:Fujian Agriculture and Forestry University,2008.

［9］ 王宏雨.食用菌抗氧化活性研究及竹蓀抗氧化物質(zhì)提取工藝優(yōu)化［D］.福州:福建農(nóng)林大學,2010.

WANG Hongyu.Study on Antionxidant Activities of Mushrooms and Extraction Process Optimization for Dictyophora indusiata［D］.Fuzhou:Fujian Agriculture and Forestry University,2010.

［10］ 郝景雯,張剛,韓慧,等.長裙竹蓀乙醇提取工藝及抑菌作用研究［J］.食品工業(yè)科技,2008,29（10）:123－127.

HAO Jingwen,ZHANG Gang,HAN Hui,et al.Study on the extracted method of Dictyophora indusia fisscher and its antimicrobial action［J］.Sci Technol Food Ind,2008,29（10）:123－127.

［11］ 郝景雯,賈士儒,張剛.長裙竹蓀乙醇提取物與水提取物抑菌作用研究［J］.食品研究與開發(fā),2010,31（10）:8－10.

HAO Jingwen,JIA Shiru,ZHANG Gang.Comparison on the antimicrobial activity of ethanol and water extracts of Dictyophora indusia fisscher［J］.Food Res Dev,2010,31（10）:8－10.

［12］ 宋飛飛,尤潔,王倩雯,等.不同溶劑提取菌草竹蓀抑菌活性物質(zhì)的初步研究［J］.中國農(nóng)學通報,2015,31（4）:

95－98.

SONG Feifei,YOU Jie,WANG Qianwen,et al.Preliminary study on antimicrobial activity of the extracts from Dictyophora indusial by different solvents［J］.Chin Agric Sci Bull,2015,31（4）:95－98.

［13］ 林陳強.棘托竹蓀菌托抑菌物質(zhì)及多糖研究［D］.福州:福建農(nóng)林大學,2011.

LIN Chenqiang.The Study of the Antimicrobial Activity Components and the Polysaccharides of Dictyophora echinovolvata volva［D］.Fuzhou:Fujian Agriculture and Forestry University,2011.

［14］ 羅盛蓮,游霞,丁聰聰,等.長裙竹蓀和棘托竹蓀的抑菌作用及其化學成分研究［J］.食品工業(yè)科技,2012,21（33）:70－73.

LUO Shenglian,YOU Xia,DING Congcong，et al.Antimicrobial activities and chemical compositions of Dictyophora indusia fisscher and Dictyophora echinovolvata［J］.Sci Technol Food Ind,2012,21（33）:70－73.

［15］ 林陳強,陳濟琛,林戎斌,等.竹蓀資源綜合利用研究進展［J］.中國食用菌,2011,30（2）:8－11.

LIN Chenqiang,CHEN Jichen,LIN Rongbin,et al.Study on the development of the comprehensive utilization about the Dictyophora resource［J］.Edible Fungi China,2011,30（2）:8－11.

［16］ 檀東飛,吳若菁,梁鳴,等.棘托竹蓀揮發(fā)油化學成分及抑菌作用的研究［J］.菌物系統(tǒng),2002,21（2）:228－233.

TAN Dongfei,WU Ruojing,LIANG Ming,et al.Studies on chemical compositions and antimicrobial activity of volatile oil of Dictyophora echinovolvata［J］.Mycosystema,2002,21（2）:228－233.

Antibiotic activity of Dictyophora echinovolvata and optimization of the ethanol extracted antibiotic substance

ZHANG Shuang1,2,ZHANG Puyu1,2,JIANG Daqing1,2,ZHANG Mei1,2,ZHANG Liqin1,2,LIN Haiping1,2
（1.The Nurturing Station for the State Key Laboratory of Subtropical Silviculture，Zhejiang A&F University,Lin’an 311300,Zhejiang,China;2.Local and National Joint Engineering Laboratory of Biopesticide High-Efficient Preparation,Zhejiang A&F University,Lin’an 311300,Zhejiang,China）

To study the antibiotic activity of Dictyophora echinovolvata on food spoilage microorganisms and phytopathogenic fungi and to provide a theoretical basis for developing D.echinovolvata into a natural food preservative and a green biological pesticide,an antibiotic extraction of the D.echinovolvata fruiting body was prepared by boiling an ethanol extract.Single factor and orthogonal experiments were used to determine the optimal extraction parameters.Four factors was optimized included ethanol concentration,ratio of material to solvent,extraction time and extraction temperature.Antibiotic activity was determined by the Oxford cup method and mycelium growth rate method.The size of the inhibitory zone diameter was to evaluate antibacterial ability of food spoilage microorganisms,and the inhibitory rate was used for phytopathogenic fungi,with three replications.Results showed that the optimal extraction parameters were ethanol concentration-90%,ratio of material to solvent-50.0 g·L－1,extraction time-2.0 h,and extraction temperature-75℃.Extract from

microbiology;Dictyophora echinovolvata;ethanol extraction;optimizing process;antimicrobial activity;food spoilage microorganisms;phytopathogenic fungi

S646

A

2095-0756（2016）06-1045-07

2015-11-17；

2015-12-15

浙江省科技廳公益技術(shù)研究農(nóng)業(yè)項目（2015C32078）

張爽，從事食藥用菌開發(fā)研究。E-mail：1148971445@qq.com。通信作者：林海萍，教授，博士，從事食用菌研究。E-mail：zjlxylhp@163.com

10.11833/j.issn.2095-0756.2016.06.017

D.echinovolvata exhibited a strong antibiotic effect on food spoilage bacteria and phytopathogenic fungi,but no inhibitory effect on Saccharomyces cerevisiae.For four selected species of bacteria causing food decay,the successive order for the bacteriostatic effect with inhibitory zone diameter（in mm）was Staphylococcus aureus（24.08）,Bacillus subtilis（23.12）,Bacillus cereus（23.02）,and Escherichia coli（22.16）.The antibiotic effect of gram positive bacteria was significantly greater（P＜0.05）than the antibiotic effect of gram-negative bacteria.Five selected phytopathogenic fungi were significantly different（P＜0.05）for bacteriostatic effect and inhibitory rate （%）with the successive order being Exserohilum turcicum （75.0%）,Sclerotinia sclerotiorum（57.7%）,Botrytis cinerea（49.7%）,Fusarium graminearum（21.3%）,and Valsa mali（9.3%）.Obviously,there is a great potential for developing D.echinovolvata into natural food preservatives and green biological pesticide.［Ch,4 fig.4 tab.16 ref.］