石鐵梅　徐靖宏　王玲　剡建平

SCC患者外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測的意義及與預(yù)后相關(guān)性分析

石鐵梅徐靖宏王玲剡建平

目的 觀察皮膚鱗狀細(xì)胞癌（SCC）患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化及其意義及與預(yù)后的關(guān)系，以探討免疫機(jī)制在SCC發(fā)生、發(fā)展中的可能機(jī)制。方法 采用流式細(xì)胞儀對46例SCC患者外周血T淋巴細(xì)胞及NK、B淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測，并與46例健康對照組進(jìn)行比較，同時所有SCC患者均行手術(shù)治療，并隨訪2年，觀察復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移情況，及與外周血淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系。結(jié)果 與對照組比較，SCC患者外周血中CD3+比值升高（P＜0.05），CD4+、NK細(xì)胞比例降低（P＜0.05，P＜0.01），B淋巴細(xì)胞、CD8+比例升高（P＜0.05，P＜0.01），CD4+/CD8+值降低（P＜0.05）；隨著腫瘤增大，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度降低以及浸潤深度的增加，外周血中血CD3+、CD8+T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞比例升高，CD4+T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞比例以及CD4+/CD8+值降低（P＜0.05），隨訪2年后，共有4例發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，Logistic回歸分析提示CD4+、NK細(xì)胞比例和CD4+/CD8+值降低是SCC復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的預(yù)測因素。結(jié)論 SCC患者存在免疫功能失調(diào)，可能與體液免疫亢進(jìn)，細(xì)胞免疫功能受抑制有關(guān)，CD4+、NK細(xì)胞比例和CD4+/CD8+值可預(yù)測SCC的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

皮膚鱗狀細(xì)胞癌 淋巴細(xì)胞亞群 流式細(xì)胞儀 體液免疫 細(xì)胞免疫

皮膚鱗狀細(xì)胞癌（skin squamous cell，SCC）是源于皮膚中角質(zhì)形成細(xì)胞的惡性腫瘤，具體原因不明，現(xiàn)認(rèn)為與SCC 發(fā)生有關(guān)的包括環(huán)境和宿主因素。環(huán)境因素包括日光、X線、砷和有致癌作用的碳?xì)浠衔锏?；宿主因素包括年齡、皮膚色澤、自體免疫狀態(tài)和某些基因的缺陷。本文通過觀察SCC患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化，探討免疫機(jī)制在SCC發(fā)生和發(fā)展中的可能機(jī)制，以及與預(yù)后的相關(guān)性。

1　臨床資料

1.1一般資料 選擇2010年1月至2013年1月于浙江省新昌縣人民醫(yī)院的SCC患者46例，其中男28例，女18例；年齡50～80歲，平均年齡66.8歲。病程6個月～2年，12例患者伴有高血壓或糖尿??；均經(jīng)過手術(shù)切除，切緣均陰性，其中腫塊大小1.0×1.0cm～8.0×7.0cm；高分化18例，中分化20例，低分化8例；10例有附近區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，病理檢查證實為SCC，皮膚癌局限于皮膚或皮下組織30例，浸潤至深層組織16例；并選擇同期在浙江省新昌縣人民醫(yī)院體檢中心體檢的46例體檢者作為對照，兩組間男女比例、年齡等一般情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），具有可比性。排除標(biāo)準(zhǔn)：全身轉(zhuǎn)移的SCC患者，其它腫瘤患者，嚴(yán)重肝腎功能不全，自身免疫性疾病及慢性感染等。

1.2方法 兩組患者均于次日空腹采集靜脈血2ml，6h內(nèi)作染色處理，使用美國BD公司生產(chǎn)FACSCalibur流式細(xì)胞儀，報告CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞、CD16+占總淋巴細(xì)胞的百分比、CD4+/CD8+比值，上述操作過程中各試劑均由美國BD公司生產(chǎn)。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多因素分析采用Logistic回歸分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1SCC患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和健康人員比較 見表1。

表1　兩組間淋巴細(xì)胞亞群比較（±s）

表1　兩組間淋巴細(xì)胞亞群比較（±s）

組別nCD3+(%)CD3+CD4+(%)CD3+CD8+(%)CD4+/CD8+NK(%)CD3-CD16+(%) SCC組46 56.41±10.931.42±8.831.60±7.41.12±1.21.63±1.327.63±11.0對照組4651.20±9.736.33±10.728.11±6.91.73±1.32.42±1.66.91±3.6 t值2.41712.39892.34622.30022.631912.13 P值0.01770.01850.02120.02380.010

2.2SCC患者淋巴細(xì)胞亞群與患者臨床病理因素分析 將SCC患者的腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、年齡、合并其它疾病情況與外周血淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，隨著腫瘤的增大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度的降低及浸潤深度的增加，外周血中血CD3+細(xì)胞比例升高（t值分別為2.3920，2.022，2.2615，2.0725，P＜0.05），CD4+T細(xì)胞降低（t值分別為2.6964，2.3019，2.4895，2.0981，P＜0.05），CD8+T細(xì)胞比例升高（t值分別為2.2458，2.0498，2.5355，2.217，P＜0.05），CD4+/CD8+值降低（t值分別為2.6135，2.0776，.22496，2.3245，P＜0.05），NK細(xì)胞比例降低（t值分別為1.9955，2.1455，2.2090，2.1659，P＜0.05），B淋巴細(xì)胞亞群比例升高（t值分別為2.2565，2.2886，2.0308，2.3045，P＜0.05）。

2.3淋巴細(xì)胞亞群與SCC復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析 所有SCC患者隨訪2年，其中4例發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，1例在遠(yuǎn)處皮膚出現(xiàn)腫塊、潰瘍，經(jīng)病理學(xué)檢查證實為與原來SCC相同類型的病理類型，2例經(jīng)影像學(xué)檢查證實為肝臟和肺部轉(zhuǎn)移，1例在原手術(shù)部位出現(xiàn)皮膚破潰，病理活檢證實為SCC；以外周血CD3+、CD4+、CD8+、NK、B淋巴細(xì)胞比例，CD4+/CD8+值等指標(biāo)為自變量作為預(yù)測SCC復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的備選危險因素，以SCC復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移為應(yīng)變量，采用Logistic回歸分析進(jìn)行篩選，結(jié)果顯示，CD4+、NK細(xì)胞比例和CD4+/CD8+值降低是SCC復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的危險因素（P＜0.05）。

3　討論

近幾年來國內(nèi)外多項研究表明，惡性腫瘤患者外周血T細(xì)胞亞群有明顯變化，CD4+T細(xì)胞減少，CD8+T細(xì)胞增多，CD4+/CD8+比值下降或倒置，且這種變化隨著腫瘤的進(jìn)展愈加明顯。其中CD4+T 淋巴細(xì)胞能促進(jìn)效應(yīng)細(xì)胞抗腫瘤作用，CD8+T淋巴細(xì)胞則主要起免疫抑制作用［1］，CD4+/CD8+是反應(yīng)機(jī)體免疫平衡狀況的敏感指標(biāo)，在正常生理狀況下，該比值相對恒定［2］，當(dāng)CD8+細(xì)胞數(shù)量增加，功能亢進(jìn)時，機(jī)體的體液免疫劑細(xì)胞免疫均受到抑制［3］；腫瘤通過表達(dá)、釋放某種腫瘤抗原或其他可溶性物質(zhì)誘導(dǎo)激活CD8+T細(xì)胞，從而參與機(jī)體的免疫抑制［4］。另一類免疫細(xì)胞NK細(xì)胞是機(jī)體中對腫瘤細(xì)胞具有高度細(xì)胞毒性作用的淋巴樣細(xì)胞，是一種廣譜的殺傷細(xì)胞，可直接發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)，并通過分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答［5］，對阻止腫瘤生長起重要作用。而B細(xì)胞主要介導(dǎo)體液免疫，與NK細(xì)胞協(xié)同在清除突變細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞中發(fā)揮重要作用。目前對于肝癌、肺癌、消化道惡性腫瘤、鼻咽癌、乳腺癌等惡性腫瘤的免疫機(jī)制研究較多，而對于SCC研究較少。

SCC多認(rèn)為與以下因素明顯相關(guān)：（1）紫外線。（2）化學(xué)因素。（3）癌前期皮膚病。（4）瘢痕、外傷及其他慢性皮膚病。（5）免疫抑制等。朱明芳等［6］報道1例尋常性銀屑病繼發(fā)多發(fā)性皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者，認(rèn)為長期不規(guī)則使用免疫抑制劑治療銀屑病可能是多發(fā)性皮膚鱗癌的誘發(fā)因子，提示免疫功能異?？赡茉赟CC的發(fā)生方面起著一定作用。Sakai等［7］研究發(fā)現(xiàn)，2，2-二羥甲基丁酸（DMBA）誘導(dǎo)的鼠面頰部SCC中，隨著DMBA攝入量的增加和時間的延長，CD4+T細(xì)胞減少，CD8+T細(xì)胞增多，提示隨著腫瘤的進(jìn)展，免疫抑制作用逐漸增強(qiáng)。本文中，所有入院病例病程均在6個月至2年，病程長，且隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度的增加、腫塊的增大等因素，CD4+T細(xì)胞減少，CD8+T細(xì)胞增多，CD4+/ CD8+降低，考慮與過度免疫抑制有關(guān)。另有報道，異常的T細(xì)胞功能可導(dǎo)致繼發(fā)的表皮角質(zhì)細(xì)胞過度增生，從而出現(xiàn)不典型增生甚至惡變［8］；李敬果等［9］研究發(fā)現(xiàn)，CD3+T淋巴細(xì)胞在SCC組織中明顯高于正常皮膚組織，提示腫瘤細(xì)胞啟動機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答機(jī)制，阻礙了腫瘤細(xì)胞分裂、增殖，延緩了腫瘤進(jìn)展。本資料中，SCC患者外周血T細(xì)胞功能異常，CD3+T淋巴細(xì)胞總量較對照組升高，考慮與刺激表皮角質(zhì)過度增生及啟動免疫應(yīng)答機(jī)制有關(guān)；而NK細(xì)胞百分比明顯降低，說明腫瘤患者NK細(xì)胞免疫功能明顯受損；同時CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比值下降，CD8+T細(xì)胞明顯高于對照組，說明SCC患者存在細(xì)胞免疫功能下降，B淋巴細(xì)胞升高，提示體液免疫的亢進(jìn)，與文獻(xiàn)報道相符［10］。另外，46例SCC患者在手術(shù)切除病灶后隨訪2年后有4例發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，明顯高于SCC10年3%的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率，考慮與患者就診晚、未及時隨診、腫瘤惡性程度高等有關(guān)，同時多因素回歸分析提示CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞及CD4+/CD8+比值下降是預(yù)測SCC復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的危險因素，考慮機(jī)體免疫功能受到抑制有利于SCC患者發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

總之，SCC患者存在著免疫機(jī)制的異常，通過研究SCC患者外周血淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)情況可能有助于進(jìn)一步了解皮膚惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制，并在評估預(yù)后方面具有一定價值，但由于本資料入選例數(shù)較少，隨訪時間較短，故外周血淋巴細(xì)胞亞群是否有更大的臨床意義，仍需進(jìn)一步研究。

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Objective To observe the alteration of peripheral blood lymphocyte subsets in patients of skin squamous cell carcinoma（SCC）and analysis the correlation between prognosis，in order to investigate the immune mechanism in the development of SCC occurred，the possible mechanism. Methods Peripheral blood T-lymphocyte subgroups and NK cells，B-lymphocyte subgroups from 46 patients with SCC were detected by flow cytometry instrument；46 healthy persons were detected as a control group. All the SCC patients were treated by surgery，followed-up of 2 year，and observed the recurrence，metastasis，and the relationship with the peripheral blood lymphocyte subsets. Results Compared with control group，the CD3+ratio increased in peripheral blood of patients with SCC（P＜0.05），the CD4+and NK cells ratio decreased（P＜0.05，P＜0.01），the ratio of B lymphocyte，CD8+（P＜0.05，P＜0.01）increased，the value of CD4+/CD8+decreased（P＜0.05）.Accompanied by the increase of tumor size，Infiltrating depth and lymph node transfer，decrease of differentiation degree，the CD4+、NK cells ratio and CD4+/CD8+decreased，the B lymphocyte，CD8 + cells ratio increased（P＜0.05）；After 2 years followed-up，4 cases recurrenced and metastasized，Logistic regression analysis suggested the reduction of proportion of CD4+and NK cells and CD4+/CD8+values was a predictor of SCC recurrence and metastasis. Conclusion The disorders of immune function in patients with squamous cell carcinoma existed，may be related to the humoral immune hyperfunction，suppression of cellular immune function. The proportion of CD4+and NK cells and CD4+/ CD8+values may predict recurrence and metastasis of SCC.

Skin squamous cell carcinoma Lymphocyte subsets Flow cytometry instrument Humoral immune Cellular immune

312500 浙江省新昌縣人民醫(yī)院（石鐵梅 王玲 剡建平）

310003 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院（徐靖宏）