沈曉棠

赤峰市醫(yī)院 心內三科 (赤峰 024000)

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·論 著·

抗β1腎上腺素受體自身抗體在心衰患者血清中的分布及其對不同亞型T淋巴細胞增殖能力的影響研究

沈曉棠

赤峰市醫(yī)院 心內三科 (赤峰 024000)

目的 探討抗β1腎上腺素受體自身抗體(β1-AA)在心衰(HF)患者血清中的分布，及其對不同亞型T淋巴細胞增殖能力的影響研究。方法 選取2010年12月至2013年12月赤峰市醫(yī)院收治的符合納入標準的HF患者70例，作為試驗組；選取同時間段我院無HF、無肝腎功能異常的其他疾病患者70例，作為對照組；并選擇若干只健康、β1-AA陰性的雄性c型小鼠，體質量約20 g。對照組和試驗組均應用ELISA檢測β1-AA滴度；將檢測β1-AA呈陽性的患者的β1-AA提純，按照不同質量濃度梯度注入到雄性c型小鼠淋巴細胞中，并利用CCK8試劑盒檢測不同亞型T淋巴細胞增殖能力，應用AnnexinV/PI雙染法檢測不同亞型T淋巴細胞凋亡情況。結果 與對照組相比，試驗組β1-AA滴度較高(t=15.216，P<0.001)， β1-AA陽性檢出率高(2=53.178,P<0.001)。β1-AA按照不同質量濃度梯度注射到c型小鼠淋巴細胞后，未激活小鼠淋巴細胞差異無統(tǒng)計學意義(t=1.408，P=0.161)；CD3/CD28激活后差異有統(tǒng)計學意義(t=10.161，P<0.001；t=18.084，P<0.001；t=20.187，P<0.001；t=27.525，P<0.001)；β1-AA促進了不同亞型T淋巴細胞乳酸脫氫酶(LDH)的釋放(t=18.891，P<0.001；t=15.162，P<0.001；t=16.192，P<0.001；t=17.991，P<0.001)。結論 β1-AA可以損害不同亞型T淋巴細胞，加重HF患者病情。

β1腎上腺素受體自身抗體；心衰；不同亞型T淋巴細胞；凋亡；增殖能力

目前，心衰(HF)已成為重大公共衛(wèi)生事件[1]。 HF往往由各種疾病引起心肌收縮能力減弱，從而使心臟的血液輸出量減少，不足以滿足機體需要，并由此產生一系列癥狀和體征。 抗β1腎上腺素受體自身抗體(β1-AA)是新近發(fā)現的一種存在于許多類型心血管疾病患者血清中的自身抗體，能夠與β1-腎上腺素受體(β1-AR)細胞外第二環(huán)抗原肽段結合，發(fā)揮類受體激動劑樣作用。運用現代醫(yī)學科技，對HF的發(fā)病機制進行研究，可以降低病人死亡率，提高預后效果[2]?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2010年12月至2013年12月赤峰市醫(yī)院收治的70例HF患者為試驗組患者，納入標準：經超聲心動圖、心電圖、X線體格檢查確診為HF患者，自愿參與本次研究并簽署知情同意書。排除標準：伴有嚴重器質性疾??；心功能Ⅳ級；收縮壓<90 mm Hg； 心率<55 次/min。另外，選取同時間段我院無HF、無肝腎功能異常的其他疾病患者70例為對照組。兩組年齡、性別和入院時間比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性(表1)。

表1 兩組患者一般情況比較±s)

1.2 實驗動物

采用若干只健康、體質量約20 g、β1-AA陰性的雄性c型小鼠。所有小鼠均由我院特定動物實驗中心供應，合格證明齊全。

1.3 檢測方法

試驗組和對照組均應用ELISA檢測β1-AA滴度[3]，β1-AA呈陽性患者應用 IgG親和純化試劑盒提純β1-AA，提純β1-AA后，按0.01、0.10、1.00、10.0 μmol/L 4種質量濃度梯度注入到雄性c型小鼠淋巴細胞中，并以同樣質量濃度的陰性β1-AA注射到同種雄性c型小鼠淋巴細胞中，利用CCK8試劑盒檢測不同亞型T淋巴細胞增殖能力[4-5]，應用AnnexinV/PI雙染法檢測不同亞型T淋巴細胞凋亡情況[6]。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 兩組β1-AA檢測情況

試驗組的β1-AA滴度較高(t=15.216，P<0.001)，β1-AA陽性數所占比例達68.57%，遠高于對照組(8.57%)(2=53.178,P<0.001)(表2)。

表2 兩組β1-AA檢測情況

2.2 β1-AA對不同亞型T淋巴細胞增殖能力的影響

利用CCK8試劑盒檢測得出，未激活小鼠T淋巴細胞差異無統(tǒng)計學意義(t=1.408，P=0.161)；激活CD3/CD28小鼠T淋巴細胞后，各質量濃度均可抑制不同亞型T細胞增殖(t=10.161，P<0.001；t=18.084，P<0.001；t=20.187，P<0.001；t=27.525，P<0.001)(表3)。

2.3 β1-AA對不同亞型T淋巴細胞凋亡情況

β1-AA促進不同亞型T淋巴細胞乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，加速T淋巴細胞凋亡(t=18.891，P<0.001；t=15.162，P<0.001；t=16.192，P<0.001；t=17.991，P<0.001)(表4)。

表3 不同亞型T淋巴細胞增殖情況±s)

表4 不同亞型T淋巴細胞LDH釋放情況±s)

3 討論

隨著社會不斷發(fā)展，競爭力不斷提升，人們在日常生活中的運動、飲食等方面形成許多不良習慣，因此，高血壓、高血糖、高血脂等一系列疾病隨之到來，HF的發(fā)病率上升，嚴重影響患者健康，降低患者生活質量[7]。HF的病因復雜，常與感染、心律失常、過度勞累、情緒波動、心臟病加重等有關[8]，其病理生理十分復雜，多種機制相互作用[9]，可以由神經體液、心肌肥厚、心肌損害等先出現代償機制[10]，但是，代償有一定限度，導致心肌細胞能量供應相對或絕對不足，使心肌收縮力和心室順應性下降[11]，最終會導致HF發(fā)生。臨床上通常把HF分為急性HF和慢性HF[12]，其臨床表現為惡心、納差、呼吸困難、疲倦、少尿等，常伴有水電解質平衡紊亂、腎功能不全、心律失常等[13]。

HF已成為心內科醫(yī)生乃至整個醫(yī)學界亟需解決的問題。通過本研究可以看出，應用ELISA檢測70例HFβ1-AA滴度，HF病人的β1-AA滴度明顯高于無HF、無肝腎功能異常的其他疾病患者(t=15.216，P<0.001)；HF病人的β1-AA陽性人數遠高于無HF、無肝腎功能異常的其他疾病患者(2=53.178,P<0.001)，是其8倍左右(68.57%/8.57%)，表明HF患者血清中分布較多的β1-AA，可能β1-AA參與了HF過程或者存在于某些疾病，如高血壓、冠心病等，并且可能存在年齡關系[14]。

ELISA檢測得出的54例β1-AA呈陽性的患者，提純其β1-AA；其余86例患者提純陰性β1-AA。利用CCK8試劑盒檢測不同亞型T淋巴細胞增殖能力。通過本研究可以看出，未激活小鼠T淋巴細胞不存在β1-AA導致的增殖抑制(t=1.408，P=0.161)；但激活CD3/CD28小鼠T淋巴細胞使用陽性β1-AA后，則在不同質量濃度梯度的β1-AA均有抑制T淋巴細胞增殖現象(t=10.161，P<0.001；t=18.084，P<0.001；t=20.187，P<0.001；t=27.525，P<0.001)，提示β1-AA可以抑制增殖，其可能導致T淋巴細胞無法增殖分化以及釋放淋巴因子[15]，從而破壞了人體的細胞免疫，抑制了體液免疫的發(fā)生，降低機體免疫力，導致更多并發(fā)癥的發(fā)生。

LDH廣泛存在于機體組織細胞中，心肌細胞尤甚[16]。當組織細胞受到破壞時，LDH可釋放入血，導致血清中LDH滴度升高。通過本研究可以看出，β1-AA促進不同亞型T淋巴細胞LDH的釋放(t=18.891，P<0.001；t=15.162，P<0.001；t=16.192，P<0.001；t=17.991，P<0.001)，表明β1-AA可以破壞或者加速T淋巴細胞的凋亡，使血液中的LDH增高。

綜上所述，β1-AA可以抑制不同亞型的T淋巴細胞增殖，促進其凋亡，導致HF患者病情加重，預后效果可能較差。

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A Study on the Distribution of β1-AA in the Serum of Patients with Congestive Heart Failure and Its Effect on the Proliferation of Different Subtypes of T lymphocytes

Shen Xiaotang.

The Third Department of Cardiology, Chifeng Municipal Hospital, Chifeng 024000, China

Objective To explore the distribution of β1-AA in the serum of patients with congestive heart failure and its effect on the proliferation of T lymphocyte proliferation. Methods 70 patients with congestive heart failure treated in Chifeng Municipal Hospital from December of 2010 to December of 2013 were selected and divided into the experiment group. Another 70 cases without heart failure or liver and kidney dysfunction were selected and divided into the control group. Besides, a number of healthy, β1-AA-negative male c mice with 20g were selected. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the β1-AA titer of both groups. The β1-AA of β1-AA-positive patients were purified and injected to the lymphocyte of the selected c mice according to the different β1-AA concentration gradients. CCK8 was used to detect different subtypes of T lymphocyte proliferation. AnnexinV/PI staining was used to detect different subtypes of T lymphocyte apoptosis. Results Compared with the control group, the experiment group had higher β1-AA titer (t=15.216，P<0.001) and higher rate of β1-AA positive detection (2=53.178,P<0.001). After the injection of β1-AA with different concentrations into the lymphocyte of c mice, no statistical significance was found in the activation of lymphocytes (t=1.408，P=0.161), but there was statistical significance after the activation of CD3/CD28 (t=10.161，P<0.001；t=18.084，P<0.001；t=20.187，P<0.001；t=27.525，P<0.001). β1-AA promoted the release of lactate dehydrogenase in the different subtypes of T lymphocytes (t=18.891，P<0.001；t=15.162，P<0.001；t=16.192，P<0.001；t=17.991，P<0.001). Conclusion β1-AA can damage different subtypes of T lymphocytes and aggravate the conditions of patients with congestive heart failure.

β1-AA；Congestive heart failure；Different subtypes of T lymphocytes；Apoptosis；Proliferation ability

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20161027.1712.080.html

10.3969/j.issn.1674-2257.2016.05.021

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