史宗勇 許冬梅 路 超 袁建琴

(山西農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，山西 太谷 030801)

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短期喂食轉(zhuǎn)基因大豆對雄性大鼠睪丸StAR表達的影響

史宗勇 許冬梅 路 超 袁建琴

(山西農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，山西 太谷 030801)

探討轉(zhuǎn)基因大豆對雄性大鼠睪丸類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(steroidogenic acute regulatory protein, StAR)mRNA水平和蛋白水平表達的影響，為轉(zhuǎn)基因大豆的安全性提供科學依據(jù)。將30只健康雄性離乳SD大鼠隨機分成兩組，設(shè)GM組喂食含轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆飼料，CK組喂食含非轉(zhuǎn)基因受體大豆(Soybean A5403)飼料，喂食試驗飼料30，60，90 d后，各組隨機處死3只大鼠，針對雄性主要生殖器官睪丸、附睪進行臟器系數(shù)分析；運用RT-PCR技術(shù)檢測大鼠睪丸StAR基因表達量；蛋白酶聯(lián)免疫反應(yīng)分析大鼠睪丸StAR蛋白含量。喂食30，60，90 d后，解剖觀察大鼠，與CK組相比GM組大鼠睪丸、附睪形態(tài)、顏色正常，大小、器官間比例協(xié)調(diào)，大鼠睪丸系數(shù)無顯著性差異，附睪系數(shù)除30 d處理組(P<0.05)差異顯著外，其它各處理組間t檢驗P值均大于0.05，無顯著性差異；GM組與CK組大鼠相比，StAR基因相對表達量、蛋白含量相同處理時間組間差異不顯著。短期喂食大鼠轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆，雄性大鼠主要生殖器官睪丸、附睪生長發(fā)育正常，喂食轉(zhuǎn)基因大豆對大鼠睪丸中StAR基因表達量、StAR蛋白含量無明顯影響。關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因大豆；大鼠；臟器系數(shù)；StAR

轉(zhuǎn)基因作物商品化19年來種植面積不斷擴大，2014年全球28個國家種植1.815億 hm2的轉(zhuǎn)基因作物，其中大豆種植面積占轉(zhuǎn)基因作物總面積的一半以上[1]。自轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)誕生以來，生物安全問題引起了國際社會的激烈爭論，轉(zhuǎn)基因大豆的安全評價成為當前民眾普遍關(guān)注的科學問題和社會問題。當前轉(zhuǎn)基因生物安全評價的主要依據(jù)是國際食品法典委員會(CAC)制定的轉(zhuǎn)基因食品安全評價指南，評價內(nèi)容集中在營養(yǎng)成分、毒理效應(yīng)和過敏反應(yīng)三個方面[2]。關(guān)于毒理學評價的研究主要是通過動物飼喂，圍繞其主要器官的生長發(fā)育進行研究，張力等[3]研究表明飼喂轉(zhuǎn)基因高油酸大豆對大鼠的器官發(fā)育未出現(xiàn)明顯的有害影響，主要臟器也未見明顯病理學改變。Qi等[4]采用轉(zhuǎn)基因大豆與傳統(tǒng)大豆喂養(yǎng)大鼠90 d后，在體重、食物消耗量、體重增重以及食物利用率上均無顯著差異。Appenzeller 等[5]以抗草甘膦大豆356?43為材料對大鼠進行神經(jīng)系統(tǒng)的檢測，研究表明轉(zhuǎn)基因大豆對大鼠神經(jīng)行為學也無顯著性影響。Batista等[6]又對大豆致敏性進行了研究，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆組未見顯著差異。此外，蘆春斌等報道了轉(zhuǎn)基因大豆對小鼠生殖系統(tǒng)[7]和雌鼠胚胎發(fā)育[8]無顯著影響。但尚未見喂食轉(zhuǎn)基因大豆對雄性動物性激素合成影響的研究。睪酮的合成對雄性生殖器的發(fā)育及其維持生精功能是至關(guān)重要的。在睪酮的合成過程中，膽固醇的跨膜轉(zhuǎn)運是關(guān)鍵步驟[9]。在此過程中，類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(steroidogenic acute regulatory protein，StAR)是調(diào)節(jié)這一過程的關(guān)鍵因子。Warita等[10]研究發(fā)現(xiàn)小鼠StAR蛋白的缺失會引起雄性不育，當Star基因過表達時，睪酮激素顯著性上調(diào)，說明該基因?qū)π∈笮坌缘陌l(fā)育起至關(guān)重要的作用。睪丸間質(zhì)細胞中StAR蛋白的表達與否及其表達量，勢必影響睪酮的合成和分泌，繼而影響動物的生殖生理活動。本研究擬通過比較飼喂轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆及其親本大豆Soybean A5403配制飼料對大鼠睪丸組織StAR基因表達的差異，進而探討轉(zhuǎn)基因大豆對其生殖系統(tǒng)發(fā)育及睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)分泌功能的影響，旨在為轉(zhuǎn)基因大豆對雄性大鼠生殖安全提供新的科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料、儀器與試劑

1.1.1 試驗材料

SD大鼠：由山西醫(yī)科大學實驗動物中心提供；

轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆為孟山都GTS40-3-2大豆，非轉(zhuǎn)基因大豆為其親本Soybean A5403大豆。轉(zhuǎn)基因成分經(jīng)農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品成分監(jiān)督檢驗測試中心(太原)驗證檢測確認。

1.1.2 主要儀器和試劑

電子天平：BS124S型，德國賽多利斯集團；

實時熒光定量PCR儀：IQ5型，美國Bio-Rad公司；

移液器：0.1-200 μL系列，德國Ependorf公司；

臺式高速冷凍離心機：Neofuge 25R型，香港力康發(fā)展有限公司；

酶標儀：ELx808型，美國伯騰儀器有限公司；

qRT-PCR kit：50 μL反應(yīng)×120次，寶生物工程(大連)有限公司；

STAR酶聯(lián)免疫分析試劑盒：上海酶聯(lián)生物科技有限公司；

DEPC水：100 mL，碧云天生物技術(shù)研究所；

三氯甲烷、異丙醇、無水乙醇：分析純，天津化學試劑三廠。

1.1.3 飼料配制 大鼠飼料委托山西醫(yī)科大學實驗動物中心加工，飼料成分包括玉米(58.9%)、大豆(20%)、小麥(10%)、魚粉(6%)、骨粉(2%)、酵母(1%)、食鹽(1%)、植物油(0.9%)和蛋氨酸(0.2%)，其中試驗組飼料用轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆配制，對照組飼料用Soybean A5403大豆配制，營養(yǎng)成分滿足《實驗動物配合飼料營養(yǎng)成分》(GB 14924.3—2010)要求。

1.1.4 試驗動物分組及處理 30只健康雄性離乳SD大鼠，常規(guī)飼料喂食1周適應(yīng)環(huán)境后，隨機分成兩組，設(shè)喂食含轉(zhuǎn)基因大豆飼料大鼠為試驗組(GM組)，喂食含非轉(zhuǎn)基因大豆飼料大鼠為對照組(CK組)，按試驗設(shè)計分別喂食30，60，90 d后，各組隨機處死3只大鼠進行試驗。

1.2 試驗方法

1.2.1 臟器系數(shù) 喂食30，60，90 d后頸椎脫臼法處死大鼠，稱量體重，剪開腹腔，分離摘取雙側(cè)睪丸、附睪稱重(g)，依公式(臟器系數(shù)=臟器重量/大鼠體重)分別計算大鼠睪丸系數(shù)和附睪系數(shù)。去除睪丸結(jié)締組織被膜，加入一定量pH 7.4的PBS浸泡組織，用液氮迅速冷凍后移至-80 ℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 RT-PCR 采用Trizol提取大鼠睪丸組織總RNA。采用RT-PCR試劑盒(TaKaRa公司)按照指南進行逆轉(zhuǎn)錄。Star基因PCR擴增Star-F引物序列為AGTCATCACCCATGAGCTGG；Star-R引物序列為TTCAGCTCTGATGACACCGC。內(nèi)參基因選用在大鼠各組織、細胞中表達相對恒定的18SRNA基因，18S-F引物序列：GAAACGGCTACCACATCC；18S-R引物序列：ACCAGACTTGCCCTCCA。

選用25 μL qRT-PCR體系，每個體系中加入1 μL cDNA，12.5 μL SYBR Premix Ex TaqTMII，上游和下游引物各1.0 μL，ROX reference dye 0.5 μL和水9 μL。每個樣本設(shè)4個平行。采用Bio-Rad公司IQ5實時熒光定量PCR儀進行擴增。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性10 min； 95 ℃變性5 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸10 s，40個循環(huán)；繪制溶解曲線，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s，0.3 ℃/s。

相同條件下，內(nèi)參18S基因和Star基因在不同的管內(nèi)擴增，反應(yīng)結(jié)束后，軟件自動導(dǎo)出擴增動力學曲線，溶解曲線和CT值，通過溶解曲線來判定RCR反應(yīng)的特異性，根據(jù)熒光曲線的CT值分析計算得出定量結(jié)果。

1.2.3 STAR蛋白酶聯(lián)免疫分析 取出冷凍保存的睪丸組織，融化后仍然保持2～8 ℃。用預(yù)冷的PBS沖洗去除組織表面殘留血液和雜質(zhì)，剪刀剪碎組織稱重，按1 g組織加入預(yù)冷的9 mL PBS，冰上3 000 r/min勻漿10 s，重復(fù)3～5次，3 000 r/min離心20 min，取上清分裝(1 mL)備用。然后按大鼠類固醇合成急性調(diào)節(jié)蛋白(STAR)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書操作，終止反應(yīng)后15 min內(nèi)上酶標儀完成檢測，運用GEN5CHS 2.01軟件分析處理檢測數(shù)據(jù)，統(tǒng)計記錄檢測結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 轉(zhuǎn)基因大豆對大鼠睪丸、附睪臟器系數(shù)的影響

解剖觀察大鼠睪丸、附睪形態(tài)、顏色正常，大小、器官間比例協(xié)調(diào)。喂食對應(yīng)飼料30，60，90 d后計算臟器系數(shù)結(jié)果顯示，試驗組睪丸、附睪臟器系數(shù)略高于或低于對照組，經(jīng)t檢驗發(fā)現(xiàn)，除30 d處理組附睪系數(shù)(P<0.05)差異顯著外，其它各處理組間P值均大于0.05，無顯著性差異，見表1。

表1 轉(zhuǎn)基因大豆對臟器系數(shù)的影響?

? *表示試驗組與對照組間差異顯著(P<0.05)。

臟器系數(shù)是毒性試驗的常用指標，可以敏感反映受試物對動物臟器的毒性作用，GM組與CK組相比，僅30 d處理組附睪系數(shù)(P<0.05)差異顯著，其它各組間差異均不顯著。董延生等[11]研究表明SD大鼠8～12周齡臟器系數(shù)正常值參考范圍：睪丸0.566～1.043，附睪0.181～0.349；12～24周齡臟器系數(shù)正常值參考范圍：睪丸0.420～0.894，附睪0.169～0.366。飼喂試驗飼料30 d后，大鼠處于8～12周齡期間，飼喂試驗飼料60，90 d后，大鼠處于12～24周齡期間，分析試驗所得臟器系數(shù)數(shù)據(jù)，所測結(jié)果全部處于正常值范圍內(nèi)，30 d處理組附睪系數(shù)差異顯著可能是由動物個體差異造成的，且轉(zhuǎn)基因大豆并未造成睪丸與附睪的增生、水腫、充血或萎縮等退行性改變。研究結(jié)果與蘆春斌等[12]喂食轉(zhuǎn)基因大豆對子代雄鼠睪丸臟器系數(shù)影響一致。

2.2 轉(zhuǎn)基因大豆對大鼠睪丸StAR mRNA水平表達的影響

用RT-PCR方法測定大鼠相關(guān)基因的表達量，由圖1可知，擴增曲線光滑平穩(wěn)，基線平整沒有引物二聚體產(chǎn)生，指數(shù)區(qū)較明顯，由于多種原因影響擴增后期曲線分散，基本呈S型，符合測定要求。

RT-PCR完成后根據(jù)記錄數(shù)據(jù)，在相同模板下，用擴增目的基因的CT值減去內(nèi)參基因的CT值，得到目的基因的相對表達量ΔCT值，即StAR目的基因相對于內(nèi)參基因18SRNA的表達量。分別計算30，60，90 d轉(zhuǎn)基因飼料飼喂大鼠(GM組)和非轉(zhuǎn)基因飼料飼喂大鼠(CK組)的StAR目的基因、內(nèi)參基因的CT值和StAR目的基因的相對表達量，具體ΔCT值見表2。

由表2可知，大鼠內(nèi)參基因18SRNA基因表達CT數(shù)值個體間有所差異，但表達量相對穩(wěn)定，內(nèi)參基因表達個體間差異不顯著，說明內(nèi)參基因選擇合理。飼喂試驗飼料30 d后，試驗大鼠進入性成熟期，不同處理時間組內(nèi)大鼠StAR 基因相對表達量有所變化，但同組內(nèi)30 d/60 d、30 d/90 d、60 d/90 d基因表達t檢驗P值均大于0.05，表明性成熟期組內(nèi)大鼠StAR 基因表達未受時間影響，差異不顯著，統(tǒng)計分析結(jié)果見表3。

通過計算得30，60，90 d飼喂轉(zhuǎn)基因飼料組和非飼喂轉(zhuǎn)基因飼料組StAR 基因相對表達量的平均值分別為5.037±0.597，3.963±0.323，4.353±0.648，4.29±0.233，4.757±0.269，5.337±0.579。運用方差分析兩組大鼠StAR 基因相對表達量，經(jīng)t檢驗，P值分別為0.175，0.556，0.185，均大于0.05，不同處理時間GM組與CK組StAR 基因表達差異不顯著，見圖2。表明試驗大鼠StAR 基因表達未受飼料成分調(diào)節(jié)影響。

圖1 熒光定量擴增曲線

處理時間/d項目GM組CK組目的基因CT值26.1125.9625.8426.4826.1526.2530內(nèi)參基因CT值21.8320.8720.1021.8821.9222.21ΔCT值4.285.095.744.604.234.04目的基因CT值24.9625.1523.9124.7524.7124.1460內(nèi)參基因CT值20.5621.5220.0519.7619.8119.76ΔCT值4.403.633.864.994.904.38目的基因CT值27.0226.9626.9627.5627.6627.5490內(nèi)參基因CT值22.9523.2221.7121.7721.9623.02ΔCT值4.073.745.255.795.704.52

表3 組內(nèi)大鼠不同處理時間StAR 基因表達量比較

圖2 目的基因相對表達水平

2.3 轉(zhuǎn)基因大豆對大鼠睪丸StAR蛋白水平表達的影響

記錄酶標儀檢測結(jié)果，根據(jù)標準品系列數(shù)據(jù)，運行GEN5CHS 2.01軟件，得到檢測標準曲線(見圖3)，生成R2=1的曲線方程y=Y=A×X+B，其中A=0.007 33，B=-0.051 06。

根據(jù)酶標儀檢測結(jié)果，依試驗操作換算，結(jié)果見圖4，喂食轉(zhuǎn)基因大豆30，60，90 d后，GM組大鼠睪丸組織中StAR蛋白含量分別為(0.691±0.039)，(0.720±0.013)，(0.987±0.130) ng/g，與CK組StAR蛋白含量(0.758±0.028)，(0.756±0.024)，(0.742±0.094) ng/g相比，t檢驗P值分別為0.118，0.130，0.098，均大于0.05，表明喂食轉(zhuǎn)基因大豆對大鼠睪丸中StAR蛋白含量無明顯影響。

圖3 StAR檢測標準曲線

圖4 喂食轉(zhuǎn)基因大豆對大鼠睪丸StAR蛋白含量的影響

睪酮是雄性大鼠的主要性激素，在胚胎發(fā)育雄性化、精子生成、雄性性行為激發(fā)與維持以及性腺的發(fā)育等生理過程中起著重要的作用。睪酮合成在睪丸間質(zhì)細胞線粒體內(nèi)膜上進行，而合成原料膽固醇存在于線粒體外，生理條件下膽固醇從線粒體外膜向內(nèi)膜的轉(zhuǎn)運需要StAR蛋白作用于線粒體外膜，介導(dǎo)并促進膽固醇的轉(zhuǎn)運，轉(zhuǎn)運蛋白StAR在膽固醇轉(zhuǎn)運中起限速作用[13]。研究表明在飼喂含轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆飲料30，60，90 d后，試驗組大鼠睪丸組織中StAR基因mRNA水平的表達與對照組無顯著差異，StAR基因蛋白水平的表達對應(yīng)組間差異無統(tǒng)計學意義，可見短期喂食含轉(zhuǎn)基因成份飼料不會影響動物的生長發(fā)育及其組織器官的功能。Qi等[4]認為復(fù)合性狀轉(zhuǎn)基因大豆35?423×40-3-2與非轉(zhuǎn)基因大豆具有同樣的安全性。劉莎莎等[14]也未發(fā)現(xiàn)大豆轉(zhuǎn)基因成分對肉雞生化指標、器官發(fā)育、代謝殘留有不良影響，且劉斌等[15]也報道轉(zhuǎn)基因豆粕對嶗山奶山羊生長性能和肌肉品質(zhì)無顯著影響。但這類研究有其局限性，如Raffaella等[16]研究發(fā)現(xiàn)喂食抗草甘膦大豆的母羊所產(chǎn)的小羊γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶的水平較高，影響了其肝臟和腎臟的細胞代謝。

3 結(jié)論

試驗研究了短期喂食轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆對雄性大鼠睪丸StAR表達的影響，結(jié)果表明，喂食轉(zhuǎn)基因大豆未造成雄性大鼠主要生殖器官病理改變，睪丸、附睪生長發(fā)育正常；試驗變量對大鼠睪丸間質(zhì)細胞雄性激素合成過程固醇類原料轉(zhuǎn)運蛋白表達沒有明顯影響。表明短期飼喂轉(zhuǎn)CP4-epsps基因大豆對試驗大鼠無毒害作用，但隨著對轉(zhuǎn)基因喂食動物的深入研究(檢測更多的相關(guān)分子)，或更長久地(以年為單位)喂食動物轉(zhuǎn)基因飼料是否會影響動物的生長發(fā)育及其組織器官的功能還有待深入研究。本課題組正在對大鼠雄性激素合成調(diào)控的其它關(guān)鍵基因表達進行研究，以進一步探討轉(zhuǎn)基因大豆的食用安全性。

[1] CLIVE James. 2014年全球生物技術(shù)/轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化發(fā)展態(tài)勢[J]. 中國生物工程雜志, 2015, 35(1): 1-14.

[2] ANDREW C. Assuring the safety of genetically modified (GM) foods: the importance of an holistic, integrative approach[J]. Journal of Biotechnololgy, 2002, 98(1): 79-106.

[3] 張力, 程呈, 何寧, 等. 轉(zhuǎn)基因高油酸大豆對大鼠的亞慢性毒性研究[J]. 毒理學雜志, 2011, 25(5): 391-394.

[4] QI Xiao-zhe, HE Xiao-yu, LUO Yun-bo, et al. Subchronic feeding study of stacked trait genetically-modified soybean(3?5423 x 40-3-2)in Sprague-Dawley rats[J]. Food Chem Toxicol., 2012, 50(9): 3 256-3 263.

[5] APPENZELLER L M, MUNLEY S M, HOban D, et al. Subchronic feeding study of herbicide-tolerant soybean DP-356?43-5 in Sprague-Daw-ley rats[J]. Food and Chemical Toxicology, 2008, 46(6): 2 201-2 213.

[6] BATISTA R, MARTINS I, JENO P, et al. A proteomic study to identify soya allergens: the human response to transgenic versus non-transgenic soya samples[J]. Int Arch Allergy Immunol, 2007, 144(1): 29-38.

[7] 蘆春斌, 楊冬宇, 高忱, 等. 轉(zhuǎn)基因大豆對雄性鼠生殖系統(tǒng)的安全性評估[J]. 揚州大學學報: 農(nóng)業(yè)與生命科學版, 2012, 33(1): 23-27.

[8] 蘆春斌, 鄭建新, 蔡娟, 等. 轉(zhuǎn)基因大豆對雌鼠胚胎發(fā)育及受精能力的影響[J]. 大豆科學, 2014, 33(4): 578-582.

[9] STOCCO D M. StAR protein and the regulation of steroid hormone biosynthesis[J]. Annu Rev Physiol, 2001, 63: 193-213.

[10] WARITA K, MITSUHASHI T, FUKUI S, et al. Immunohistochemical analysis of steroidogenic acute regulatory protein(StAR) and StAR-binding protein (SBP) expression in the testes of mice during fetal development[J]. Reproductive Biology, 2013, 13(1): 92-95.

[11] 董延生, 尹紀業(yè), 陳長, 等. SD大鼠臟器重量及臟器系數(shù)正常參考值的確立與應(yīng)用[J]. 軍事醫(yī)學, 2012, 36(5): 351-353.

[12] 蘆春斌, 周文, 劉標. 喂食轉(zhuǎn)基因大豆對子代雄鼠生殖系統(tǒng)的影響[J]. 大豆科學, 2013, 32(1): 119-123.

[13] STOCCO D M. Intramitochondrial cholesterol transfer[J]. Biochim Biophys Acta, 2000, 1 486(1): 184-197.

[14] 劉莎莎, 譚建莊, 孫哲, 等. 轉(zhuǎn)基因成分在肉雞體內(nèi)的代謝殘留及對生化指標、器官發(fā)育的影響[J]. 飼料工業(yè), 2011, 32(9): 19-25.

[15] 劉斌, 秦志華, 黃娟, 等. 轉(zhuǎn)基因豆粕對嶗山奶山羊生長性能、肌肉營養(yǎng)成分及組織器官中外源基因轉(zhuǎn)移的影響[J]. 動物營養(yǎng)學報, 2014, 26(4): 1 028-1 033.

[16] VINCENZO M, RAFFAELLA T, GIOVANNI M, et al. Gamma-glutamyl transferase activity in kids born from goats fed genetically modified soybean[J]. Food and Nutrition Sciences, 2013, 4(6): 50-54.

Effects of short term feeding transgenic soybean on the expression of StAR in rat testis

SHIZong-yongXUDong-meiLUChaoYUANJian-qing

(CollegeofLifeScience,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu,Shanxi030801,China)

The present study was conducted to discuss the effects on genetically modified soybeans on the level of mRNA and protein in StAR gene in male rat, and aimed to provide a scientific basis for the security of transgenic soybeans. Thirty male SD rats were randomly divided into GM group and CK group. The GM group were fed with transgenic Roundup Ready soybean containing CP4-EPSPS gene, and the CK group were fed with non-transgenic soybean. Three rats of every group were killed at 30 d, 60 d and 90 d, respectively. Viscera index (testes and epididymides) was calculated. RT-PCR was used to measure the expression of StAR gene, and ELISA was used to analysis the expression of StAR protein. The morphology and color of testes and epididymides of the GM group and CK group were observed. No significant differences were found in size and testis coefficient. Epididymis coefficient were no significant difference(P>0.05)except 30 d group. The average expression of StAR gene and protein in GM and CK group (30 d 60 d and 90 d) was detected, and no significant differences between the two groups at the same time were found. The results suggested that feeding transgenic soybean for 30 d showed no damages to occurrence of testes and epididymides in rat, and the expression of StAR gene and protein were no difference either.Keywords： GM soybeans; rat; visceral coefficents; StAR

山西省自然科學基金(編號：2013011028-2)；山西省科技攻關(guān)基金(編號：20140311025-3)

史宗勇(1970—)，男，山西農(nóng)業(yè)大學副教授，碩士。

E-mail：zongyongtg@sohu.com

2016-03-01

10.13652/j.issn.1003-5788.2016.10.003