劉蘭，楊莎莎，陳海月,李香丹

(1延邊大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林延吉133000；2延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

?

宮頸癌組織中Ki67與Ebp1表達(dá)變化及意義

劉蘭1，楊莎莎2，陳海月1,李香丹2

(1延邊大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林延吉133000；2延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

目的 觀察細(xì)胞增殖抗原Ki67及增強(qiáng)子結(jié)合蛋白1(Ebp1)在宮頸癌組織中的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)42例宮頸癌組織及相應(yīng)癌旁正常宮頸黏膜組織中的Ki67及Ebp1，分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 宮頸癌組織中Ki67及Ebp1表達(dá)陽性率分別為73.8%和31.0%，均明顯高于癌旁正常宮頸黏膜組織的0、2.4%(P均<0.05)；宮頸癌組織中Ki67、Ebp1表達(dá)與患者年齡、腫瘤直徑、家族史無明顯關(guān)系(P均>0.05)，與腫瘤的TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)；相關(guān)性分析結(jié)果顯示，宮頸癌組織中Ki67與Ebp1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.113,P<0.05)。結(jié)論 宮頸癌組織中Ki67、Ebp1高表達(dá)，二者聯(lián)合檢測(cè)有助于宮頸癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后的判斷。

宮頸癌;細(xì)胞增殖抗原；增強(qiáng)子結(jié)合蛋白1

宮頸癌在全球婦女中的發(fā)病率僅次于乳腺癌，近年研究報(bào)道其發(fā)生發(fā)展受多種基因的調(diào)控。在各種環(huán)境因素作用下，原癌基因的激活和抑癌基因的失活均可導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生癌變[1]。Ki67是一種細(xì)胞增殖核抗原，其表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)。已有文獻(xiàn)報(bào)道，宮頸癌組織中Ki67基因高表達(dá)[2]。增強(qiáng)子結(jié)合蛋白1(Ebp1)是新發(fā)現(xiàn)的ErbB-3胞內(nèi)結(jié)合蛋白，屬于增殖相關(guān)的PA2G4家族中的一員。目前，有關(guān)Ki67與Ebp1在宮頸癌組織中表達(dá)相關(guān)性的研究尚未見報(bào)道。2016年3～6月，我們采用免疫組化SP法觀察了Ki67與Ebp1在宮頸癌組織中的表達(dá)變化，并分析二者的相關(guān)性及其與臨床病理特征的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集延邊大學(xué)附屬醫(yī)院病理科2010年2月～2013年2月宮頸癌患者手術(shù)切除的腫瘤標(biāo)本42例，患者年齡34～76歲。腫瘤直徑≤5 cm 20例，腫瘤直徑>5 cm 22例；臨床分期Ⅰ期+Ⅱ期23例，Ⅲ期19例；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例；所有病例經(jīng)術(shù)后病理確診為宮頸癌，且患者確診前未經(jīng)任何抗腫瘤治療。術(shù)中同時(shí)收集相應(yīng)癌旁正常宮頸組織42例作為對(duì)照，術(shù)后病理檢查均未出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞。

1.2 Ki67與Ebp檢測(cè)方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)，兔抗人Ebp1單克隆抗體(Abcam)、鼠抗人Ki67單克隆抗體(即用型) 及SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片。脫蠟后水化組織切片，微波爐抗原熱修復(fù)，3% H2O2去離子水孵育以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；滴加一抗，4 ℃過夜；PBS沖洗，滴加聚合酶輔助劑，37 ℃孵育20 min；PBS沖洗后滴加辣根酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG多聚體，37 ℃孵育30 min；應(yīng)用DAB溶液顯色，自來水沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。PBS代替一抗作陰性對(duì)照，用已知陽性切片作陽性對(duì)照。隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，Ki67和Ebp陽性細(xì)胞呈淡黃色或棕黃色顆粒，根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比與染色程度判定結(jié)果。陽性細(xì)胞所占百分比<10%為1分，10%～<50%為2分，50%～<75%為3分，≥75%為4分；細(xì)胞無染色為0分，淡黃色為1分，中度黃色為2分，棕黃色為3分。兩項(xiàng)相乘0為-，1～3為+，4～6為+ +，7～9為+ + +。+ + +為強(qiáng)陽性，+、+ +為陽性，-為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki67與Ebp1在宮頸癌及癌旁正常組織中的表達(dá) Ki67陽性染色主要位于細(xì)胞核，Ebp1陽性染色主要位于胞質(zhì)或細(xì)胞膜。42例宮頸癌組織切片中，Ki67 陰性11例、陽性26例、強(qiáng)陽性5例，陽性率為73.8%；Ebp1陰性29例、陽性11例、強(qiáng)陽性2例，陽性率為31.0%。42例癌旁正常組織切片中，Ki67陰性42例、陽性0例，陽性率為0；Ebp1陰性41例、陽性1例，陽性率為2.4%。宮頸癌組織中Ebp1與Ki67表達(dá)陽性率明顯高于癌旁正常組織，且其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 Ki67和Ebp1表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系 宮頸癌組織中Ki67、Ebp1表達(dá)與患者年齡、腫瘤直徑、家族史無明顯關(guān)系(P均>0.05)，與腫瘤的TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。

表1 Ki67和Ebp1表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 宮頸癌組織中Ki67與Ebp1表達(dá)的關(guān)系 在31例Ki67陽性表達(dá)的宮頸癌組織中，Ebp1陽性表達(dá)11例、陰性表達(dá)20例；在11例Ki67陰性表達(dá)的宮頸癌組織中，Ebp1陽性表達(dá)2例、陰性表達(dá)9例。經(jīng)Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，兩者表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.113,P<0.05)。

3 討論

宮頸癌是一種發(fā)生在子宮頸上皮的惡性腫瘤,腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞的異常增生有關(guān)。Ki67是存在于增殖細(xì)胞核的標(biāo)志蛋白，與細(xì)胞增殖密切相關(guān)，參與細(xì)胞周期的調(diào)控。Ki67在有絲分裂期的G1、S、G2期和M期均有合成，但在G0期缺失；由于其半衰期短，可以準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖活性，被認(rèn)為是較理想的檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的抗體[3],對(duì)惡性腫瘤診斷和預(yù)測(cè)腫瘤的預(yù)后具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中Ki67表達(dá)陽性率為73.8%，明顯高于癌旁正常組織，而且腫瘤分期越高、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性率越高，患者預(yù)后也越差，與其他研究[4～6]報(bào)道結(jié)論一致。

Ebp1是新發(fā)現(xiàn)的ErbB-3胞內(nèi)結(jié)合蛋白，屬于增殖相關(guān)的PA2G4家族中的一員。在外界刺激作用下，Ebp1與ErbB-3分離并遷移至核內(nèi)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖[7]。本研究結(jié)果顯示，42例宮頸癌組織中Ebp1表達(dá)陽性率為31.0%，明顯高于癌旁正常組織的2.4%，而且其表達(dá)與腫瘤的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與之前研究[8,9]結(jié)果一致。但部分文獻(xiàn)報(bào)道，Ebp1在一些腫瘤組織中表達(dá)水平下調(diào)，而且Ebp1的表達(dá)情況與腫瘤的分期及轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)[10～13]。這可能與Ebp1的兩個(gè)不同片段p42、p48有關(guān)，其對(duì)細(xì)胞增殖起不同效應(yīng)。p48主要位于胞質(zhì)及胞核內(nèi)，過表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖；p42主要位于胞質(zhì)內(nèi)，過表達(dá)抑制細(xì)胞增殖[14]。組織類型不同，兩個(gè)片段的表達(dá)量也不同，從而影響腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化。

腫瘤的發(fā)生發(fā)展受多種基因的調(diào)控。有文獻(xiàn)報(bào)道，在子宮內(nèi)膜癌組織中ErbB-2與Ki67表達(dá)呈正相關(guān)，ErbB-2可通過過度表達(dá)，降低機(jī)體對(duì)細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)節(jié)作用，使Ki67表達(dá)增強(qiáng)，促使細(xì)胞增殖異常，最終導(dǎo)致惡變[15]。但是，目前有關(guān)Ki67與Ebp1在宮頸癌組織中表達(dá)相關(guān)性研究尚未見報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，Ki67與Ebp1在宮頸癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)。由此可見，在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移過程中Ki67與Ebp1同時(shí)發(fā)揮重要作用，二者協(xié)同作用促進(jìn)宮頸癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。因此，兩者的聯(lián)合檢測(cè)有助于宮頸癌惡性程度的判斷，可為宮頸癌的預(yù)防、診斷及治療提供更多的理論依據(jù)。

[1] Yao J, Zhao X, Ding X. Systematic profiling of chemotherapeutic drug response to EGFR gatekeeper mutation in non-small cell lungcancer[J]. Comput Biol Chem, 2016,64:126-133.

[2] 陳玉梅,趙軍偉,劉繼敏,等.p53,Ki67在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義[J].光明中醫(yī)， 2009, 24(1):109-110.

[3] 文艷紅,張永建,徐洪.消化道類癌43 例Ki-67 表達(dá)與腫瘤分期相關(guān)性研究[J].交通醫(yī)學(xué)，2013,27(2):131-133.

[4] 雷蕾,葉斌,王西川. p16、p53 和Ki67 在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志,2014,11(40)：123-125.

[5] 王曉英, 黃永宏, 張宏偉,等. Ki67、p53、survivin在宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸炎中的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥,2010,50(25)：88-89.

[6] 常麗琴,吳素慧,李超,等.Ki67、survivin在早期宮須癌中的表達(dá)與預(yù)后相關(guān)性分析[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué),2013,3(4):20-22.

[7] Protrka Z, Arsenijevic S, Arsenijevic P, et al. Prognostic significance of co-overexpression of bcl-2 and c-erbB-2/neu in uterine cervix carcinomas and premalignant lesions[J]. Med Glas(Zenica), 2012,9(2):248-255.

[8] 李香丹,劉蘭.宮頸癌組織中Ebp1蛋白的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥，2013,53(8)：44-45.

[9] Liu L, Li XD, Chen HY, et al. Significance of Ebp1 and p53 protein expression in cervical cancer[J].Genet Mol Res, 2015,14(4):11860-11866.

[10] Zhang Y, Ali TZ, Zhou H. ErbB-3 binding protein 1 represses metastasis promoting gene anterior gradient protein 2 in prostate cancer[J]. Cancer Res, 2010,70(1):240-248.

[11] 崔玲玲,朱明宇,陳幕華,等.Ebp1蛋白在賁門癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2010,14(3)：419-422.

[12] 王慶,余優(yōu)成.Ebp1基因?qū)ι圜[狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞增殖的抑制作用[J].復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2009,36(2)：201-205.

[13] Yu Y, Chen W, Zhang Y. Suppression of salivary adenoid cystic carcinoma growth and metastasis by ErbB-3 binding protein Ebp1 gene transfer[J]. Int J Cancer,2007,120(9):1909-1913.

[14] 孫鳳丹,許東元,劉蘭,等.肝細(xì)胞癌組織中Ebp1蛋白的表達(dá)變化及意義[J].山東醫(yī)藥,2012,52(2)：34-35.

[15] 丁堪鑠,盧麗娜,余莉萍,等.C-erbB-2、p53、Ki-67、ER、PR在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及臨床相關(guān)性[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2015,31(24):4069-4071.

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31560324，81560400)。

李香丹(E-mail: lixiangdan@ybu.edu.cn)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.38.028

R737.33

B

1002-266X(2016)38-0078-03

2016-08-12)