王且魯，劉 奕，宋紅梅，汪學(xué)杰，劉 超，牟希東，胡隱昌，羅建仁

(1.農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶水產(chǎn)資源利用與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，廣州 510380；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306)

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雙須骨舌魚轉(zhuǎn)錄組EST-SSR標(biāo)記開發(fā)與引物篩選

王且魯1,2，劉 奕1，宋紅梅1，汪學(xué)杰1，劉 超1，牟希東1，胡隱昌1，羅建仁1

(1.農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶水產(chǎn)資源利用與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，廣州 510380；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306)

利用MISA軟件對(duì)雙須骨舌魚(Osteoglossumbicirrhosum)性腺轉(zhuǎn)錄組測(cè)序獲得的188 461條Unigene進(jìn)行SSR檢測(cè)，結(jié)果在11 917個(gè)Unigene中共檢測(cè)到SSR位點(diǎn)12 578個(gè)，其中包含2個(gè)及以上SSR位點(diǎn)的Unigene有633個(gè)。SSR的發(fā)生頻率為6.32%，平均分布距離為9 949 bp。在篩選到的SSR位點(diǎn)中，優(yōu)勢(shì)重復(fù)基序?yàn)槎塑账?、三核苷酸和四核苷酸，其中二核苷酸重?fù)基序數(shù)量最多，占總數(shù)的50.52%。重復(fù)基元類型共216種，其中數(shù)量最多的類型為二核苷酸重復(fù)AC/GT，占總數(shù)的20.66%。從所有篩選出的SSR位點(diǎn)中隨機(jī)選取50個(gè)位點(diǎn)并運(yùn)用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)引物，共有25對(duì)引物成功擴(kuò)增出特異性產(chǎn)物，并且均在同科的美麗硬仆骨舌魚(Scleropagesformosus)的三個(gè)亞種中通用。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序產(chǎn)生的EST序列是開發(fā)SSR標(biāo)記的有效來源，開發(fā)所得EST-SSR引物可用于雙須骨舌魚及其近緣物種遺傳分析、遺傳圖譜構(gòu)建以及分子標(biāo)記輔助育種等工作中。

雙須骨舌魚(Osteoglossumbicirrhosum)；轉(zhuǎn)錄組；EST-SSR

雙須骨舌魚(Osteoglossumbicirrhosum)俗稱銀龍魚，隸屬于骨舌魚目(Osteoglossiformes)骨舌魚科(Osteoglossidae)骨舌魚屬(Osteoglossum)[1]，自然分布于亞馬遜河流域的巴西、圭亞那和秘魯?shù)鹊?，主要棲息在亞馬遜河及其支流的水潭及淺水灌木叢等緩流區(qū)，在原產(chǎn)地是一種重要的食用魚類[2-3]。而在亞洲，由于其霸氣的外表、優(yōu)美的游姿以及美好的寓意，而成為最受歡迎的大型熱帶觀賞魚之一，市場(chǎng)前景十分廣闊。另外骨舌魚科魚類從石炭紀(jì)即已出現(xiàn)，是現(xiàn)生硬骨魚類中最古老、最原始的類群之一，具有很高的科研價(jià)值。

SSR，即簡(jiǎn)單重復(fù)序列(simple sequence repeat)，又叫微衛(wèi)星，是目前廣泛研究和應(yīng)用的一種分子標(biāo)記，包括基因組SSR(gSSR)和表達(dá)序列SSR(EST-SSR) ，其中EST-SSR標(biāo)記除了微衛(wèi)星標(biāo)記的分布廣、遺傳信息含量高、重復(fù)性好、共顯性遺傳、便于PCR檢測(cè)等普遍特點(diǎn)外，由于其來源于cDNA文庫或轉(zhuǎn)錄組直接測(cè)序，位于功能基因上，因此還具有與功能基因連鎖更緊密，在物種間的通用性較高，開發(fā)成本較低，省時(shí)省力等優(yōu)勢(shì)，已迅速成為種質(zhì)資源分析、遺傳作圖、分子標(biāo)記輔助育種等研究領(lǐng)域的重要工具，尤其在植物和水生動(dòng)物的相關(guān)研究中應(yīng)用廣泛[4-5]。

雙須骨舌魚第二性征極不顯著，且性成熟時(shí)間較長(zhǎng)，個(gè)體較大，繁殖習(xí)性比較特殊，人工繁殖技術(shù)不完善，在雌雄鑒別、親本鑒定等方面都存在困難，亟待解決。然而目前對(duì)該魚的研究報(bào)道相對(duì)較少，田媛等[6]對(duì)雙須骨舌魚的形態(tài)特征和核型進(jìn)行了描述和分析，確定了其染色體數(shù)目為2n=56；汪學(xué)杰等[7]對(duì)雙須骨舌魚的性腺發(fā)育進(jìn)行了組織學(xué)觀察；Themis等[3]開發(fā)了19個(gè)雙須骨舌魚多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記，并對(duì)費(fèi)氏骨舌魚(O.ferreirai)、巨骨舌魚(Arapaimagigas)等進(jìn)行了通用性檢測(cè)，結(jié)果顯示在同科魚中的通用率高達(dá)57.89%～89.47%；田媛[7]根據(jù)文獻(xiàn)中提供的雙須骨舌魚SSR引物進(jìn)行性別鑒定研究，結(jié)果末發(fā)現(xiàn)性別特異性條帶。其他關(guān)于雙須骨舌魚的研究多集中在繁養(yǎng)殖技術(shù)、病害防治層面[9-11]。本研究利用轉(zhuǎn)錄組EST數(shù)據(jù)開發(fā)SSR標(biāo)記，并檢測(cè)了其在美麗硬仆骨舌魚(Scleropagesformosus)的三個(gè)常見亞種即金龍魚、紅龍魚和青龍魚中進(jìn)行了通用性檢測(cè)，以期為深入了解雙須骨舌魚及骨舌魚科其他珍貴魚種的群體遺傳結(jié)構(gòu)、系統(tǒng)進(jìn)化和種質(zhì)衰退等信息，指導(dǎo)開展分子標(biāo)記輔助育種等提供有益參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本實(shí)驗(yàn)所使用的雙須骨舌魚采自廣州珠江水產(chǎn)研究所觀賞魚基地，RNA提取材料為雙須骨舌魚性腺組織，取樣后加入Omega公司的RNA saferI，在4 ℃冰箱中放置過夜后放入-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 EST-SSR的篩選和引物設(shè)計(jì)

提取雙須骨舌魚性腺總RNA(OMEGA Total RNA KitII(200)試劑盒)并構(gòu)建文庫。通過Illumina HiSeq/MiSeg平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序，采用針對(duì)轉(zhuǎn)錄組拼接的Trinity(v2012-10-05)軟件進(jìn)行拼接獲得大量Unigene。

利用MISA軟件(http://pgrc.ipk-gatersleben.de/misa)對(duì)雙須骨舌魚Unigene序列進(jìn)行SSR搜索，篩選標(biāo)準(zhǔn)為二堿基重復(fù)次數(shù)≥8，三堿基重復(fù)次數(shù)≥6，四至六堿基重復(fù)次數(shù)≥5。

從篩選到的SSR位點(diǎn)中隨機(jī)選取50個(gè)并用Primer Primer 5.0設(shè)計(jì)引物，引物交由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.2.2 基因組DNA的提取和PCR擴(kuò)增

DNA提取樣品取自雙須骨舌魚和美麗硬仆骨舌魚的三個(gè)亞種(金龍魚、紅龍魚、青龍魚)鰭條組織，采用鹽析法提取.取約0.06 g組織，剪碎后加400 μL裂解液和6 μL 20 mg/mL的蛋白酶K，混勻后放入55 ℃水浴至組織消化完全；逐滴加入400 μL 5 mol/L的NaCl溶液，在4 ℃下8 000 r/min離心10 min，取其上清液，加入400 μL氯仿，4 ℃下1 000 r/min離心10 min，取上清液至新管中，加等體積的-20 ℃預(yù)冷的異丙醇約450 μL，顛倒混勻，4 ℃下12 000 r/min離心20 min，棄上清液，加1 mL 75%乙醇清洗沉淀，4 ℃下8 000 r/min離心5 min，棄上清液，室溫下晾干至無乙醇味，加30 μL雙蒸水溶解。

PCR反應(yīng)的總體系為10 μL，包括DNA模板0.4 μL，10×Buffer(含Mg2+)，dNTPs(2.5 mmol/L) 0.6 μL，酶0.04 μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。PCR產(chǎn)物用8%的非變性聚丙烯酰胺膠進(jìn)行電泳檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 SSR在轉(zhuǎn)錄組中的分布特點(diǎn)

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得到的總數(shù)據(jù)量為3.4G，序列GC含量為51.73%，拼接得到Unigene共188 461個(gè)。利用MISA軟件(http://pgrc.ipk-gatersleben.de/misa)從Unigene中分析得到個(gè)2～6核苷酸重復(fù)的EST-SSR候選位點(diǎn)12 578個(gè)(表1)。其中二核苷酸重復(fù)的位點(diǎn)最多，有6 354個(gè)，占總數(shù)的50.52%；其次為三核苷酸重復(fù)位點(diǎn)和四核苷酸重復(fù)位點(diǎn)，分別有3 839個(gè)和2 326個(gè)，占總數(shù)的30.52%和18.49%；五核苷酸重復(fù)位點(diǎn)和六核苷酸重復(fù)位點(diǎn)很少，分別有49個(gè)和10個(gè)，各占總數(shù)的0.39%和0.08%。

表1 雙須骨舌魚轉(zhuǎn)錄組中鑒定的EST-SSR類型和出現(xiàn)頻率

在檢測(cè)的188 461個(gè)Unigene序列(總長(zhǎng)度125 143 372 bp)中，有11 917個(gè)序列存在SSR位點(diǎn)，SSR的發(fā)生頻率(含SSR的Unigene個(gè)數(shù)與Unigene總個(gè)數(shù)的比值)為6.32%，轉(zhuǎn)錄組序列中平均每9.95 kb長(zhǎng)度就有一個(gè)SSR位點(diǎn)分布。在含有SSR位點(diǎn)的Unigene中，有11 284個(gè)序列只含有1個(gè)SSR位點(diǎn)，而另外的633個(gè)序列含有2個(gè)及2個(gè)以上SSR位點(diǎn)，總的SSR分布頻率(SSR位點(diǎn)的個(gè)數(shù)與Unigene總個(gè)數(shù)的比值)為6.67%。另外，有4 870個(gè)位點(diǎn)以復(fù)合重復(fù)形式出現(xiàn)(表2)。

表2 雙須骨舌魚EST-SSR分布特征

2.2 SSR的序列類型與特征

核苷酸數(shù)目不同的重復(fù)基元，其重復(fù)次數(shù)也有較大差異。二核苷酸重復(fù)位點(diǎn)的基元重復(fù)次數(shù)多在8～10次，少數(shù)位點(diǎn)達(dá)到11或12次；3核苷酸重復(fù)位點(diǎn)的基元重復(fù)次數(shù)集中在6～7次，少數(shù)為8次，極個(gè)別位點(diǎn)達(dá)到11次；4～6核苷酸重復(fù)位點(diǎn)的基元重復(fù)次數(shù)大多為5次，少數(shù)為6～8次，有一個(gè)5核苷酸重復(fù)位點(diǎn)達(dá)到13次重復(fù)(表3)。

表3 雙須骨舌魚EST-SSR各重復(fù)類型的重復(fù)次數(shù)特點(diǎn)

重復(fù)基元類型共有216種。出現(xiàn)頻率最高的重復(fù)基元為二堿基重復(fù)AC/GT，其次為二堿基重復(fù)CA/TG，二者之和占SSR位點(diǎn)總數(shù)的36.64%(圖1)。3核苷酸重復(fù)中出現(xiàn)最多的重復(fù)基元是AAT/ATT，此外出現(xiàn)較多的還有ATA/TAT、ATC/GAT、AGC/GCT(圖2)等。4核苷酸重復(fù)中出現(xiàn)較多的重復(fù)基元有AAAT/ATTT、TAAA/TTTA、CATC/GATG、AATA/TATT等。5、6核苷酸重復(fù)的位點(diǎn)較少，每種重復(fù)基元類型只出現(xiàn)一次。

2.3 SSR引物的設(shè)計(jì)及有效性檢測(cè)

隨機(jī)選取了50個(gè)符合引物設(shè)計(jì)要求的EST-SSR位點(diǎn)進(jìn)行引物設(shè)計(jì)和合成，以雙須骨舌魚DNA為模板進(jìn)行PCR和聚丙烯酰氨凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果有25對(duì)引物出現(xiàn)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物且大小符合預(yù)期(圖3)。有效引物的信息見表4。這些引物的多態(tài)性有待進(jìn)一步試驗(yàn)評(píng)估。

圖1 二核苷酸重復(fù)基元及其數(shù)量

圖2 部分主要三核苷酸重復(fù)基元及其出現(xiàn)次數(shù)

名稱核心重復(fù)引物序列退火溫度/℃產(chǎn)物大小/bpOB1(GAT)6CGCATATCTGTGTTTGTACCCATCACAGACTACTGCTCTACACT5958244OB5(TG)9TGTGTCCAGCTGAGCTTCTGGCCGTTCCTAGCTGTTGTCT6060192OB6(CAT)6GCCCGTATGCCGATGTTAGACTACCCGCGACCCTGAAC6060170OB7(AC)8TCTGCAGTGTGTTCGGAACATCATGGGGCGGTAAATAGGC6060262OB9(GATT)5GGCAGTGGGACCAGTAGATGTCCTCTCCCACTGACCTTCT6060227OB10(ATG)5AGCCTTTCACTATGAACGACCACGACTGTAAAACTCCGGCCT6060198OB11(TAT)6ACCTCGTCTTACAGGACCGACTGCTACGCATTTGGAAGGC6060267OB12(AT)8CTGGAGTGAGGCAGTAGCTGCCCAGCGAGTTTGGTAGGTT6060165OB14(GCG)6CGGTGCCACTCGATCCTTAAGGTAAAGGCCAGGGAAGCAT6060244OB21(TC)8AGGAAAGAAGAGCGCCTCAGTGCGGGACCGAAGAAAAGAA6060173OB22(CA)8ATGGTATGCCCTACGCGAAGGGGCAAAGCTTGGGAACATG6060101OB23(TGA)6CTGGACCCTGCCATGGTTTATGGTACTTGAGCAAGGCATGA6060125OB25(CG)8GACATCTCTCTCGCCAGACGGATCACAGCGCATCACCATG6060146OB32(GCGT)5TAAACGTGCCTCGCTCAACTAGCAGTGTTCGCTAGACACC6060126OB34(TAAA)5TCTGTCCGTCTTCCCTGCTACGGGACCCAGAAAGAGAGGA6061107OB35(TC)8CAAATCGTCCACTGGGGTCAAGCTGGACTGCAAGCTAAGG6060121OB39(GACT)5GCTCCACTTTAGTGCTTCACCTTGTCTGCAACTGGGCTTCT5960192OB40(AGC)6GGGTTCAGGAGTGGAGTGTCCAGGCAGAAAGTTTGGCCAC6060211OB41(A)10…(TGA)6TGCCACCTGTAAGTGTCCACTTTGTGGACAGTCCTGGACT6058242

續(xù)表4

圖3 EST-SSR引物在雙須骨舌魚中的擴(kuò)增結(jié)果

用與雙須骨舌魚同科不同屬的美麗硬仆骨舌魚的三個(gè)亞種(金龍魚、紅龍魚、青龍魚)的DNA為模板對(duì)以上25對(duì)引物進(jìn)行通用性檢測(cè)，結(jié)果全部出現(xiàn)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。

3 討論

本研究著重分析了雙須骨舌魚EST序列中SSR位點(diǎn)的分布和重復(fù)特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)被篩選的EST序列中有6.32%的序列含有SSR位點(diǎn)，這個(gè)比例遠(yuǎn)低于翹嘴鱖(Sinipercachuatsi)(68.86%)[12]，也低于紅鰭東方鲀(Fugurubripes)(11.5%)[13]，斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)(11.2%)[14]，鯽(Carassiusauratus)(8.13%)[15]和牙鲆(Paralichthysolivaceus)(7.95%)[16]，但高于鯉(Cyprinuscarpio)(5.55%)[17]和真鯛(Chrysophrysmajor)(4%)[18]。這些差異可能在很大程度上是由于篩選SSR位點(diǎn)時(shí)設(shè)定的參數(shù)不同造成的，例如袁文成等[12]在對(duì)翹嘴鱖EST-SSR的研究中的篩選標(biāo)準(zhǔn)為單核苷酸重復(fù)次數(shù)不少于16次，二核苷酸重復(fù)次數(shù)不少于6次，三至六核苷酸重復(fù)的次數(shù)不少于5次，而本研究對(duì)雙須骨舌魚EST序列中SSR位點(diǎn)的篩選標(biāo)準(zhǔn)為二堿基重復(fù)次數(shù)不少于8次，三堿基重復(fù)次數(shù)不少于6次，四至六堿基重復(fù)次數(shù)不少于5次，單堿基重復(fù)不予統(tǒng)計(jì)。

大多數(shù)魚類的EST-SSR以二核苷酸重復(fù)和三核苷酸重復(fù)類型為主。本研究中雙須骨舌魚的二核苷酸重復(fù)位點(diǎn)有6 354個(gè)， 三核苷酸重復(fù)位點(diǎn)有3 839個(gè)，分別占SSR總數(shù)的50.52%和30.52%，該特點(diǎn)與其他魚類的研究結(jié)果相符。如鮸(Miichthysmiiuy)EST-SSR中二核苷酸重復(fù)位點(diǎn)和三核苷酸重復(fù)位點(diǎn)分別占總數(shù)的33%和37%[19]，牙鲆EST-SSR中二核苷酸重復(fù)位點(diǎn)和三核苷酸重復(fù)位點(diǎn)分別占總數(shù)的59.02%和26.33%[16]。

在魚類EST-SSR的二核苷酸重復(fù)位點(diǎn)中，重復(fù)基元為AC/GT的往往占多數(shù)，而重復(fù)基元為CG的位點(diǎn)卻很少。在本研究中，雙須骨舌魚以AC/GT為重復(fù)基元的SSR位點(diǎn)有2598個(gè)，占二核苷酸重復(fù)位點(diǎn)總數(shù)的40.89%，占SSR位點(diǎn)總數(shù)的20.66%，而以CG為重復(fù)基元的SSR位點(diǎn)只有37個(gè)，占二核苷酸重復(fù)位點(diǎn)總數(shù)的0.58%，占SSR位點(diǎn)總數(shù)的0.29%。團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)EST-SSR位點(diǎn)中AC/GT重復(fù)位點(diǎn)所占比例高達(dá)65.39%，而CG重復(fù)位點(diǎn)僅占0.55%[20]；斑點(diǎn)叉尾鮰AC/GT重復(fù)位點(diǎn)占二核苷酸重復(fù)位點(diǎn)總數(shù)的75.4%，卻未發(fā)現(xiàn)CG重復(fù)位點(diǎn)[14]；牙鲆AC/GT重復(fù)位點(diǎn)占二核苷酸重復(fù)位點(diǎn)總數(shù)的29.50%，但也未發(fā)現(xiàn)CG重復(fù)位點(diǎn)[16]。

通常來說，由于EST-SSR位于相對(duì)保守的基因轉(zhuǎn)錄區(qū)，所以其種屬間通用性要高于基因組SSR。董迎輝等[21]報(bào)道泥蚶(Tegillarcagranosa)EST-SSR標(biāo)記對(duì)其同科不同屬的格粗飾蚶(Anadaraclathrata)的通用率為25.81%；Liao等[17]報(bào)道鯉魚EST-SSR標(biāo)記對(duì)其同科不同屬的鯽、鰱(Hypophthalmichthysmolitrix)的通用率分別為68.52%和66.67%；薛蕊等[22]報(bào)道許氏平鲉(Sebastodsschlegelii)EST-SSR標(biāo)記對(duì)其同屬的朝鮮平鲉(Sebasteskoreanus)的通用率為88.9%，對(duì)同科不同屬的褐菖鲉(Sebastiscusmarmoratus)的通用率為100%。甚至在親緣關(guān)系更遠(yuǎn)時(shí)，EST-SSR標(biāo)記也能表現(xiàn)很高的通用性，如Wang等[23]報(bào)道太平洋牡蠣(Crassostreagigas)EST-SSR標(biāo)記對(duì)其同綱不同目的三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)的通用率為31.25%；魏大為等[24]報(bào)道基于胡鲇科魚類EST設(shè)計(jì)的29對(duì)引物對(duì)鲇科的蘭州鲇(Siluruslanzhouensis)全部適用，通用率達(dá)100%。本研究中，研究對(duì)象雙須骨舌魚屬于骨舌魚科骨舌魚屬，原產(chǎn)于南美洲，而美麗硬仆骨舌魚屬于骨舌魚科硬骨舌魚屬，原產(chǎn)于亞洲，二者同科不同屬且產(chǎn)地距離遙遠(yuǎn)，歷史上分化時(shí)間較早，但其EST-SSR標(biāo)記的通用率很高(現(xiàn)有的標(biāo)記經(jīng)檢測(cè)都可通用)，可能在一定程度上顯示了骨舌魚科這類古老的魚類活化石在進(jìn)化上的高度保守性，也可能是由于檢測(cè)的標(biāo)記較少，存在一定的偶然性。

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(責(zé)任編輯：張瀟峮)

Development and primer selection of EST-SSR molecular markers based on transcriptome sequencing of Osteoglossum bicirrhosum

WANG Qie-lu1,2,LIU Yi1,SONG Hong-mei1,WANG Xue-jie1,LIU Chao1,MU Xi-dong1,HU Yin-chang1,LUO Jian-ren1

(1.KeyLaboratoryofTropical&SubtropicalFisheryResourceApplication&Cultivation,MinistryofAgriculture/PearlRiverFisheriesResearchInstitute,ChineseAcademyofFisherySciences,Guangzhou510380,China;2.ShanghaiOceanUniversity,Shanghai201306,China)

A total of 188 461 unigenes from gonad transcriptome ofOsteoglossumbicirrhosumwere screened using MISA software.12 578 EST-SST molecular markers were identified in 11 917 Unigenes,and the frequency of these SSRs was 6.32% and mean distance was 0.99 kb in the unigenes.Six hundred and thirty three unigenes contained more than one SSR.Dinucleotide,trinucleotide and tetranucleotide repeats were dominant motifs,and the most frequent repeat was dinucleotide which accounted for 50.52% of the total number of SSRs.A total of 216 types of motifs were detected and AC/GT was presented to be the most frequent motif,accounting for 20.66%.A total of 50 SSRs were selected for design primers by Primer Premier 5.0,and 25 pairs of which were effective，which could be transferable to three subspecies ofScleropagesformosus.This study indicated that EST sequences produced by transcriptome sequencing was an effective source to develop SSR markers.The 25 SSR markers developed in this study can be used in genetic analysis,linkage map construction and marker assisted breeding ofO.bicirrhosumand its closely related species.

Osteoglossumbicirrhosum;transcriptome;EST-SSR

2015-12-07；

2016-06-20

廣東省自然科學(xué)基金(2014A030310397);國家水產(chǎn)種質(zhì)資源平臺(tái)(2016DKA30470)

王且魯(1991- )，男，碩士研究生，專業(yè)方向?yàn)橛^賞魚遺傳育種。E-mail:18665571558@163.com

羅建仁。E-mail：olfishlo@163.com

S917.0

A

1000-6907-(2016)06-0008-06