許文勝 張 濤 康文磊 陳永軍 楊增華

(包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨三科，內(nèi)蒙古 包頭 014010)

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石榴籽油對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)代謝的影響

許文勝 張 濤 康文磊 陳永軍 楊增華

(包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨三科，內(nèi)蒙古 包頭 014010)

目的 探討石榴籽油對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)代謝的影響。方法 50只3月齡SPF級(jí)雌性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、去卵巢組、己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組，每組10只。假手術(shù)組保留卵巢，其余組則將雙側(cè)卵巢去除，已烯雌酚組每天用100 μg/kg己烯雌酚灌胃，低石榴籽油組和高石榴籽油組每天分別給予石榴籽油0.95 g/kg和1.27 g/kg劑量灌胃。對(duì)大鼠血清鈣(Ca)、磷(P)含量以及堿性磷酸酶活性(ALP)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)下頜骨、股骨中段和遠(yuǎn)心端骨密度進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 與去卵巢組相比，己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠血清Ca、P含量及ALP活性均降低，低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠血清SOD水平升高，而MDA水平降低(P<0.05)；與己烯雌酚組相比，低石榴籽油組大鼠血清Ca、P和SOD含量升高，而MDA含量降低，高石榴籽油組大鼠血清SOD含量升高，而MDA降低(P<0.05)；與去卵巢組相比，己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠下頜骨、股骨中點(diǎn)和股骨遠(yuǎn)端骨密度均升高(P<0.05)。結(jié)論 補(bǔ)充石榴籽油可有效降低去卵巢大鼠骨質(zhì)轉(zhuǎn)化活性，抑制骨密度降低，而這種作用可能與石榴籽油雌激素作用及抗氧化作用有關(guān)。

石榴籽油；去卵巢；骨質(zhì)代謝

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松(PMOP)是好發(fā)于絕經(jīng)后婦女的常見(jiàn)代謝性骨病，臨床上以骨量減少、骨微結(jié)構(gòu)破壞為主要特征，是導(dǎo)致絕經(jīng)后婦女骨折及骨脆性增加的主要因素〔1〕。研究表明，PMOP的發(fā)生與更年期后卵巢功能減退有關(guān)，雌激素分泌減少可影響血鈣代謝，使骨組織中的鈣大量游離而導(dǎo)致骨量丟失引起骨質(zhì)疏松〔2〕。臨床上曾用雌激素替代療法治療及預(yù)防PMOP的發(fā)生，但雌激素具有一定的副作用〔3〕，限制了其應(yīng)用。石榴籽油是從石榴籽中提取的天然油脂，主要成分是多不飽和脂肪酸，有研究指出〔4〕，石榴籽的石榴醚提取物和非皂化物質(zhì)具有較強(qiáng)的雌激素活性，且能被黃體酮所拮抗。但關(guān)于石榴籽油在防治骨質(zhì)疏松方面的研究少有報(bào)道。本研究觀察石榴籽油對(duì)大鼠骨質(zhì)代謝的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑 選取3月齡SPF級(jí)雌性SD大鼠50只，河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供〔合格證號(hào)SCXK(豫)2012-0005〕，體重(210±10)g。石榴籽油由南海市華神花粉有限公司提供，其中含石榴酸69.7%；己烯雌酚片(0.5 mg/片)購(gòu)自江西南昌制藥有限公司。根據(jù)AIN93配方配制半成品飼料，為避免大豆異黃酮等植物雌激素的影響，將飼料中的大豆餅換成菜粕；AU5800全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司，AA-7020型原子吸收分光光度計(jì)購(gòu)自北京東西分析儀器有限公司，BH6012二維掃描單光子骨密度儀購(gòu)自中國(guó)核工業(yè)總公司北京核儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 建模分組及處理 所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為假手術(shù)組、去卵巢組、己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組，每組10只。利用0.8%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，假手術(shù)組采用背側(cè)切開(kāi)將卵巢周圍約3 g脂肪組織去除，保留卵巢，其余40只大鼠則將雙側(cè)卵巢組織去除。術(shù)后7 d以后，雌二醇組每天上午8時(shí)用100 μg/kg己烯雌酚灌胃，低石榴籽油組和高石榴籽油組每天上午8時(shí)分別給予石榴籽油0.95 g/kg和1.27 g/kg灌胃。各組大鼠均在相同條件下喂養(yǎng)，自由飲水和進(jìn)食，每7 d稱重一次，以調(diào)整用藥劑量。

1.2.2 血標(biāo)本收集及生化指標(biāo)檢測(cè) 連續(xù)喂養(yǎng)90 d后將大鼠股動(dòng)脈放血處死，取腹腔靜脈血6 ml，3 000 r/min離心10 min后取上清保存于-20℃冰箱以備檢。分別檢測(cè)大鼠血清鈣(Ca，鄰甲酚酞絡(luò)合銅酮直接比色法)和磷(P，紫外直接法)含量，以及堿性磷酸酶(ALP，比色法)活性、超氧化物歧化酶(SOD，比色法)和丙二醛(MDA，TAB法)水平。

1.2.3 骨密度檢測(cè) 取處死大鼠一側(cè)下頜骨及股骨，將軟組織去除后，用10%中性甲醛溶液固定后備檢。利用二維掃描單光子骨密度儀分別對(duì)下頜骨最后磨牙后1 mm、股骨中段和遠(yuǎn)心端骨密度(g/cm2)進(jìn)行檢測(cè)，精密度2%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用SPSS21.0軟件，多組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 不同組大鼠血清生化指標(biāo)變化情況 與假手術(shù)組相比，去卵巢組大鼠血清Ca、P和MDA含量及ALP活性均升高，而SOD含量降低(P<0.05)；與去卵巢組相比，己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠血清Ca、P含量及ALP活性均降低，低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠血清SOD水平升高，而MDA水平降低(P<0.05)；與己烯雌酚組相比，低石榴籽油組大鼠血清Ca、P和SOD含量升高，而MDA含量降低，高石榴籽油組大鼠血清SOD含量升高，而MDA降低(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 不同組大鼠實(shí)驗(yàn)前后體重變化情況 建模前各組大鼠體重?zé)o差異(P>0.05)。與假手術(shù)組相比，去卵巢組大鼠處死前體重及體重增長(zhǎng)率均增加(P<0.05)，己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠體重及體重增長(zhǎng)率無(wú)差異(P>0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 不同組大鼠下頜骨和股骨中段和遠(yuǎn)心端骨密度情況 與假手術(shù)組相比，去卵巢組、己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠下頜骨、股骨中點(diǎn)和股骨遠(yuǎn)端骨密度均降低(P<0.05)；與去卵巢組相比，己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠下頜骨、股骨中點(diǎn)和股骨遠(yuǎn)端骨密度均升高(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表1 不同組大鼠血清生化指標(biāo)變化情況±s,n=10)

表2 不同組去卵巢大鼠體重變化情況±s,n=10)

與假手術(shù)組相比：1)P<0.05；與去卵巢組相比：2)P<0.05；與己烯雌酚組相比：3)P<0.05；下表同

表3 不同組大鼠下頜骨和股骨中段和遠(yuǎn)心端骨密度

3 討 論

骨質(zhì)疏松作為三大老年性疾病之一，具有較高的發(fā)病率，常給患者帶來(lái)疼痛等癥狀，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，同時(shí)，亦是發(fā)生骨折的重要危險(xiǎn)因素〔5〕。研究表明〔6〕，正常人體骨代謝過(guò)程中骨質(zhì)形成和吸收處于動(dòng)態(tài)平衡中，而骨質(zhì)疏松患者則表現(xiàn)出破骨細(xì)胞活性增加，骨質(zhì)吸收遠(yuǎn)高于骨質(zhì)形成，從而導(dǎo)致大量骨質(zhì)流失。有研究指出，雌激素可作用于成骨細(xì)胞，可對(duì)糖皮質(zhì)激素的抑制作用進(jìn)行拮抗，促使成骨細(xì)胞生長(zhǎng)，抑制了過(guò)多的Ca從骨骼中釋放〔7〕。本研究顯示，激素水平降低可導(dǎo)致大量的Ca、P從骨質(zhì)中游離進(jìn)入血液，從而使血清Ca、P濃度升高，骨密度降低。血清ALP是骨形成及轉(zhuǎn)換常用的評(píng)價(jià)指標(biāo)，可反映骨形成的活躍程度〔8〕，去除卵巢大鼠血清ALP活性增加，提示由于骨吸收亢進(jìn)而代償性骨形成增加。石榴籽油可與己烯雌酚發(fā)揮同樣的作用，減少了Ca和P從骨質(zhì)中釋放，提高了大鼠骨密度；同時(shí)，ALP活性得到有效抑制，提示石榴籽油可能具有雌激素活性，可抑制ALP活性升高而改善骨質(zhì)高轉(zhuǎn)化狀態(tài)〔9〕，從而抑制骨吸收。

有研究指出，氧化應(yīng)激與骨質(zhì)疏松的發(fā)生關(guān)系密切，每天攝入一定量的抗氧化劑將會(huì)顯著降低罹患骨質(zhì)疏松的風(fēng)險(xiǎn)〔10〕。本研究顯示，去除卵巢大鼠氧自由基清除能力下降，發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)；石榴籽油可對(duì)去除卵巢大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生抑制作用，對(duì)氧自由基產(chǎn)生淬滅作用。同時(shí)，本研究顯示，補(bǔ)充石榴籽油并不會(huì)使去卵巢大鼠體重顯著增加，這可能與石榴籽油中主要以多不飽和脂肪酸為主有關(guān)〔11〕。

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11 Saravani M，Kazemi Mehrjerdi H，Mirshahi A，etal.Protective effects of pomegranate seed oil on ovariectomized rats as a model of postmenopausal osteoporosis：A multi-detector computed tomography evaluation〔J〕.Vet Res Forum，2014，5(4)：263-7.

〔2016-11-19修回〕

(編輯 李相軍)

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014MS0812)；包頭市社會(huì)發(fā)展科技支撐項(xiàng)目(2014S2003-5-12)；內(nèi)蒙古醫(yī)療衛(wèi)生科研計(jì)劃項(xiàng)目(201302101)

許文勝(1972-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事創(chuàng)傷骨科研究。

R68

A

1005-9202(2016)20-4956-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.007