凌金鋒, 周 娟, 彭埃天*, 宋曉兵, 程保平, 陳 霞

(1. 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所, 廣東省植物保護(hù)新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州 510640; 2. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 廣州 510642)

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吡唑醚菌酯與代森錳鋅對(duì)兩種果樹病原菌的聯(lián)合毒力

凌金鋒1,2, 周 娟1, 彭埃天1*, 宋曉兵1, 程保平1, 陳 霞1

(1. 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所, 廣東省植物保護(hù)新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州 510640; 2. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 廣州 510642)

為了明確吡唑醚菌酯與代森錳鋅混配對(duì)荔枝霜疫霉病菌(Peronophythoralitchii)和香蕉尾孢葉斑病菌(Pseudocercosporamusae)的聯(lián)合毒力,分別采用菌絲生長(zhǎng)速率法、菌絲干重法測(cè)定了吡唑醚菌酯、代森錳鋅及其不同配比混劑對(duì)荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌的毒力。結(jié)果表明:吡唑醚菌酯與代森錳鋅質(zhì)量比為1.35∶35的混劑對(duì)荔枝霜疫霉病菌表現(xiàn)為相加作用,增效系數(shù)為1.286 3;吡唑醚菌酯與代森錳鋅質(zhì)量比為8∶66、6∶77和4∶88的混劑對(duì)香蕉尾孢葉斑病菌同樣表現(xiàn)出較好的相加作用,增效系數(shù)分別為1.299 9、1.378 0和1.390 7;綜合考慮混配經(jīng)濟(jì)效益和降低病原菌對(duì)吡唑醚菌酯產(chǎn)生抗性風(fēng)險(xiǎn)等因素,吡唑醚菌酯與代森錳鋅以質(zhì)量比1.35∶35～8∶66進(jìn)行混配較為合理。

吡唑醚菌酯; 代森錳鋅; 荔枝霜疫霉病菌; 香蕉尾孢葉斑病菌; 聯(lián)合毒力

荔枝霜疫霉病和香蕉尾孢葉斑病分別是我國(guó)南方特色水果荔枝和香蕉上的重要病害,在各產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生,給生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失[1-3]。目前,國(guó)內(nèi)主要還是依靠化學(xué)農(nóng)藥對(duì)這兩個(gè)病害進(jìn)行防控。然而,單一化學(xué)農(nóng)藥長(zhǎng)期大面積使用易導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性,而混配農(nóng)藥則具有擴(kuò)大防治譜、降低成本、提高防治效果及延緩抗藥性等特點(diǎn),因此利用現(xiàn)有農(nóng)藥進(jìn)行混配已成為目前農(nóng)藥開發(fā)應(yīng)用的一個(gè)重要方面。吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)是一種廣譜甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑,其作用機(jī)理是抑制線粒體呼吸作用,同時(shí)具有保護(hù)作用、治療作用、內(nèi)吸傳導(dǎo)性和耐雨水沖刷等性能[4],對(duì)荔枝霜疫霉病和香蕉尾孢葉斑病均具有良好防效[2-3],但目前該藥劑的使用成本較高;代森錳鋅(mancozeb)是一種廣譜硫代氨基甲酸酯類的保護(hù)性殺菌劑,其作用機(jī)理是抑制菌體內(nèi)丙酮酸的氧化[5],也是荔枝和香蕉生產(chǎn)上常規(guī)藥劑,而有關(guān)兩種殺菌劑混配對(duì)荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌的聯(lián)合毒力尚未見報(bào)道。為此,筆者測(cè)定了吡唑醚菌酯與代森錳鋅不同配比組合對(duì)荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌的聯(lián)合毒力,旨在篩選出混配的最佳配比,為研制防控荔枝霜疫霉病和香蕉尾孢葉斑病的混配藥劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

荔枝霜疫霉病菌(Peronophythoralitchii)和香蕉尾孢葉斑病菌(Pseudocercosporamusae)菌株由本研究室分離、保存。

1.2 供試藥劑

250 g/L吡唑醚菌酯乳油,巴斯夫歐洲公司;80%代森錳鋅可濕性粉劑,美國(guó)陶氏益農(nóng)公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 單劑EC50的測(cè)定

荔枝霜疫霉病菌的生測(cè)采用菌絲生長(zhǎng)速率法[6],下同。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,分別配制含吡唑醚菌酯0.002 5、0.005、0.007 5、0.01、0.02和0.03 μg/mL的PSA培養(yǎng)基平板,及含代森錳鋅2.5、5、7.5、10、15和20 μg/mL的PSA培養(yǎng)基平板,同時(shí)設(shè)不加藥劑的空白對(duì)照,每處理設(shè)4個(gè)重復(fù),在平板中央接入約1 mm×1 mm的新鮮菌絲方塊,再置于26.0℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。7 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑,取其平均值,按以下公式計(jì)算不同濃度處理的菌絲生長(zhǎng)抑制率。

菌絲生長(zhǎng)抑制率(%)=(對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑-處理菌落增長(zhǎng)直徑)/對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑×100。

香蕉尾孢葉斑病菌的生測(cè)采用菌絲干重法[7],下同。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,分別配制含吡唑醚菌酯0.005、0.01、0.025、0.05、0.1和0.25 μg/mL的PS液體培養(yǎng)基,和含代森錳鋅0.1、0.3、0.5、0.7、0.9和1.1 μg/mL的PS液體培養(yǎng)基,同時(shí)設(shè)不加藥劑的空白對(duì)照,每處理設(shè)4個(gè)重復(fù)(每重復(fù)為1個(gè)150 mL三角瓶,內(nèi)裝50 mL PS液體培養(yǎng)基),再將預(yù)先在PSA上培養(yǎng)好的新鮮菌絲體切成約1 mm×1 mm×1 mm的菌絲方塊,每瓶接入6塊,在26.0℃、130 r/min條件下恒溫振蕩培養(yǎng)12 d后用濾紙真空抽濾收集菌絲體,并置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中60～70℃烘干至恒重,用電子天平稱量菌絲干重,按以下公式計(jì)算不同濃度處理的菌絲生長(zhǎng)抑制率。

菌絲生長(zhǎng)抑制率(%)=(對(duì)照菌絲干重-處理菌絲干重)/對(duì)照菌絲干重×100。

1.3.2 最佳配比篩選

采用交互測(cè)定法進(jìn)行最佳配比的篩選[8-9]。以單劑吡唑醚菌酯和代森錳鋅的EC50為基礎(chǔ),分別按其EC50值劑量百分比的比例設(shè)置設(shè)2個(gè)單劑、9個(gè)配比及空白對(duì)照共12個(gè)處理進(jìn)行測(cè)定,見表1(分別以單劑的EC50劑量為 100%,然后 10 等分,分別計(jì)算此兩藥劑在各配比中的質(zhì)量濃度,并以兩者之和作為該配比的測(cè)試濃度),每處理4個(gè)重復(fù),具體步驟見1.3.1,計(jì)算各配比的菌絲生長(zhǎng)抑制率,再根據(jù)以下公式計(jì)算各配比的毒性比率。

預(yù)期抑制率(%)=吡唑醚菌酯EC50值劑量實(shí)際抑制率×配比中吡唑醚菌酯EC50值劑量百分比+代森錳鋅EC50值劑量實(shí)際抑制率×配比中代森錳鋅EC50值劑量百分比;

毒性比率=實(shí)際抑制率/預(yù)期抑制率;

毒性比率大于1.25時(shí),表現(xiàn)為增效作用;毒性比率小于0.75時(shí),表現(xiàn)為拮抗作用;毒性比率在1左右時(shí),為相加作用;在此基礎(chǔ)上初步篩選出最佳配比。

表1 各處理吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50劑量百分比Table 1 Proportion of EC50 of pyraclostrobin and mancozeb in mixture

1.3.3 最佳配比聯(lián)合毒力測(cè)定

根據(jù)1.3.2試驗(yàn)結(jié)果,初步篩選出最佳配比,并對(duì)該最佳配比混劑進(jìn)行聯(lián)合毒力測(cè)定,采用Wadley法[10]計(jì)算混劑的增效系數(shù)(synergistic ratio,SR),評(píng)價(jià)藥劑混用的增效作用:SR>1.5表示具有增效作用,0.5≤SR≤1.5表示具有相加作用,SR<0.5表示具有拮抗作用。

EC50(th)=(a+b)/[a/EC50(ob) (A)+b/EC50(ob) (B)]

SR=EC50(th)/EC50(ob)

EC50(ob) (A)、EC50(ob) (B)分別代表混劑中吡唑醚菌酯和代森錳鋅的EC50實(shí)測(cè)值;EC50(ob)、EC50(th)分別代表混劑的EC50實(shí)測(cè)值和理論值;a、b分別代表吡唑醚菌酯和代森錳鋅在混劑中的百分含量,單位為百分率(%);SR代表增效系數(shù)。

1.3.4 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2003軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì),計(jì)算各處理平均菌落直徑和平均抑制率;采用DPS 7.05軟件[11]對(duì)藥劑濃度對(duì)數(shù)值及對(duì)應(yīng)的菌絲生長(zhǎng)抑制率幾率值進(jìn)行回歸分析,求出各單劑及其不同配比混劑的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)r和EC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 吡唑醚菌酯和代森錳鋅對(duì)兩病原菌的毒力

毒力測(cè)定結(jié)果表明(表2),吡唑醚菌酯和代森錳鋅對(duì)荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌均表現(xiàn)出較好的毒力,吡唑醚菌酯對(duì)兩種病原菌的EC50分別為0.012 1 μg/mL和 0.017 0 μg/mL,代森錳鋅對(duì)兩種病原菌的EC50分別為3.359 0 μg/mL和0.107 0 μg/mL。

表2 吡唑醚菌酯和代森錳鋅對(duì)荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌的毒力Table 2 Toxicity of pyraclostrobin and mancozeb against Peronophythora litchii and Pseudocercospora musae

2.2 吡唑醚菌酯和代森錳鋅最佳配比的篩選

以單劑吡唑醚菌酯和代森錳鋅的近似EC50(對(duì)荔枝霜疫霉病菌,分別取0.015 μg/mL和3.5 μg/mL;對(duì)香蕉尾孢葉斑病菌,分別取0.02 μg/mL和0.11 μg/mL)為基礎(chǔ),采用交互測(cè)定法進(jìn)行最佳配比的篩選,試驗(yàn)結(jié)果表明(表3),在所選配比中,吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例90∶10、80∶20、70∶30、60∶40和50∶50對(duì)荔枝霜疫霉病菌的毒性比率分別為0.98、0.83、0.89、0.82、0.84,表現(xiàn)為相加作用;當(dāng)吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例為70∶30和20∶80時(shí),對(duì)香蕉尾孢葉斑病菌的毒性比率分別為1.51和1.37,表現(xiàn)為增效作用,當(dāng)比例為90∶10、80∶20、60∶40、50∶50、40∶60、30∶70和10∶90時(shí),均表現(xiàn)為相加作用。綜合以上結(jié)果,對(duì)荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌,分別取90∶10、80∶20、70∶30、60∶40和50∶50和70∶30、40∶60、30∶70、20∶80、10∶90各5個(gè)比例作下一步的聯(lián)合毒力驗(yàn)證。

續(xù)表3 Table 3(Continued)

吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量百分比的比例RatiosofproportionofEC50betweenpyraclostrobinandmancozebinmixture荔枝霜疫霉病菌 Pe.litchii實(shí)際抑制率/%Observedinhibitionrate預(yù)期抑制率/%Expectedinhibitionrate毒性比率Toxicityratios香蕉尾孢葉斑病菌 Ps.musae實(shí)際抑制率/%Observedinhibitionrate預(yù)期抑制率/%Expectedinhibitionrate毒性比率Toxicityratios30∶7045.1555.310.8238.8834.611.1220∶8031.4454.730.5746.0433.681.3710∶9048.4554.140.8940.2432.761.230∶10053.5653.561.0031.8331.831.00

2.3 最佳配比的聯(lián)合毒力測(cè)定

根據(jù)混劑最佳配比的初步篩選結(jié)果,分別選取5個(gè)配比對(duì)荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌進(jìn)行聯(lián)合毒力測(cè)定,求出各自的回歸方程和EC50。試驗(yàn)結(jié)果表明(表4),隨著混劑中吡唑醚菌酯實(shí)際含量的減少，吡唑醚菌酯與代森錳鋅的5個(gè)不同比例混劑對(duì)荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌的抑制毒力依次遞減。

結(jié)合兩單劑的EC50,根據(jù)Wadley法計(jì)算吡唑醚菌酯和代森錳鋅不同比例混劑理論上的EC50(th),并與實(shí)際觀察的EC50(ob)比較,計(jì)算增效系數(shù)(SR)。由表4可知,吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例90∶10、80∶20、70∶30、60∶40和50∶50 5個(gè)配比混劑對(duì)荔枝霜疫霉病菌的增效系數(shù)分別為1.286 3、0.728 6、0.721 3、0.680 7和0.669 2,均介于0.5～1.5之間,表現(xiàn)為相加作用,其中比例90∶10的增效系數(shù)明顯高于其他4個(gè)配比。吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例40∶60、30∶70、20∶80和10∶90 4個(gè)配比混劑對(duì)香蕉尾孢葉斑病菌的增效系數(shù)分別為1.299 9、1.378 0、1.390 7和1.233 5,表現(xiàn)為相加作用,但比例為90∶10的增效系數(shù)為1.632 4,表現(xiàn)為增效作用。

表4 吡唑醚菌酯與代森錳鋅不同比例混劑對(duì)兩種病原菌的聯(lián)合毒力Table 4 Synergic toxicity of mixtures containing different ratios of pyraclostrobin and mancozeb againstPeronophythora litchii and Pseudocercospora musae

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明,吡唑醚菌酯與代森錳鋅混配對(duì)荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢葉斑病菌均具有一定的增效或相加作用。從增效系數(shù)來看,針對(duì)荔枝霜疫霉病菌,吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例為90∶10(實(shí)際含量比為1.35∶35)的增效系數(shù)最大,可作為最佳配比;針對(duì)香蕉尾孢葉斑病菌,吡唑醚菌酯與代森錳鋅EC50值劑量比例為70∶30(實(shí)際含量比為14∶33)的增效系數(shù)同樣最大,且表現(xiàn)為增效作用,但該配比混劑中吡唑醚菌酯的實(shí)際含量明顯高于40∶60、30∶70、20∶80和10∶90 4個(gè)配比;由于混配藥劑的田間藥效與室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果之間還可能存在一定的差異,以及從降低農(nóng)藥使用成本和降低吡唑醚菌酯抗性風(fēng)險(xiǎn)等方面考慮,吡唑醚菌酯與代森錳鋅以質(zhì)量比1.35∶35～8∶66進(jìn)行混配較為合理。

吡唑醚菌酯殺菌譜廣,其防治對(duì)象包括由半知菌、子囊菌、擔(dān)子菌和卵菌等病原引起的植物病害,對(duì)植物還具有保健增產(chǎn)作用,已成為全球第二大殺菌劑,但由于其作用位點(diǎn)單一,被列為高抗性風(fēng)險(xiǎn)藥劑[4],同時(shí)單獨(dú)使用該藥劑的成本也較高。為降低病原菌對(duì)吡唑醚菌酯產(chǎn)生抗性的風(fēng)險(xiǎn)及其使用成本,復(fù)配用藥是有效途徑之一[12]。而代森錳鋅是一種典型的多作用位點(diǎn)保護(hù)性殺菌劑,與吡唑醚菌酯的作用機(jī)制不同,且其價(jià)格也相對(duì)較低,具有較好的復(fù)配利用基礎(chǔ)。本研究結(jié)果表明,吡唑醚菌酯與代森錳鋅按一定比例混配可達(dá)到增效或相加作用,以EC50計(jì),達(dá)到相同抑菌效果所需吡唑醚菌酯的量明顯減少,藥劑選擇壓力降低,從而有利于延緩病原菌對(duì)吡唑醚菌酯產(chǎn)生抗藥性,同時(shí)也有利于農(nóng)藥使用成本的降低,但上述配方在田間的實(shí)際應(yīng)用效果還有待進(jìn)一步的驗(yàn)證。

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(責(zé)任編輯：楊明麗)

Synergic toxicity of pyraclostrobin and mancozeb againstPeronophythoralitchiiandPseudocercosporamusae

Ling Jinfeng1,2, Zhou Juan1, Peng Aitian1, Song Xiaobing1, Cheng Baoping1, Chen Xia1

(1. Plant Protection Research Institute, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, Key Laboratory of High Technology for Plant Protection of Guangdong Province, Guangzhou 510640,China; 2. College of Agriculture, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

In order to clarify the synergistic toxicity of pyraclostrobin and mancozeb againstPeronophythoralitchiiandPseudocercosporamusae, which cause litchi downy blight and banana yellow sigatoka, respectively, the toxicity of pyraclostrobin, mancozeb and their mixtures at different ratios againstPe.litchiiandPs.musaewas determined by mycelial growth rate test and mycelial dry weight methods. The results showed that the mixture at the mass ratio of 1.35∶35 exhibited an additive effect onPe.litchii, with a synergistic ratio of 1.286 3. The mixtures with mass ratio of 8∶66, 6∶77 and 4∶88 also exhibited additive effects onPs.musae, with a synergistic ratio of 1.299 9, 1.378 0 and 1.390 7, respectively. Considering the economic benefit of the two fungicide mixtures and reduction in the resistance risk of pathogens to pyraclostrobin, the mass ratios between 1.35∶35 and 8∶66 are considered to be the best for pyraclostrobin and mancozeb mixture.

pyraclostrobin; mancozeb;Peronophythoralitchii;Pseudocercosporamusae; synergic toxicity

2015-10-12

2016-02-25

國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-33-07)；廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(粵財(cái)教[2014]371號(hào))

S 482.2+99

B

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.05.046

* 通信作者 E-mail: pengait@163.com