張雪寧，張利敏，張　靜，周春華，張　乾，候志飛（.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥學(xué)部，石家莊　050000；.河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥工程系，石家莊　05006）

UPLC-MS/MS法測(cè)定注射用埃索美拉唑鈉的含量Δ

張雪寧1＊，張利敏2#，張靜2，周春華1，張乾1，候志飛2（1.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥學(xué)部，石家莊050000；2.河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥工程系，石家莊050026）

目的：采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）測(cè)定注射用埃索美拉唑鈉的含量。方法：UPLC色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18，流動(dòng)相為0.1%甲酸-甲醇（73∶27，V/V），流速為0.3 ml/min，柱溫為35℃，分析時(shí)間為5 min，進(jìn)樣量為2 μl；離子化模式為正離子模式，離子源溫度為150℃，毛細(xì)管電壓為3.0 kV，錐孔電壓為50 V，錐孔氣流量為150 L/Hr，脫溶劑氣溫度為450℃，脫溶劑氣流量為900 L/Hr，霧化氣壓力為7.0 Bar，母離子掃描范圍為100～800 mz/mz，工作模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式。結(jié)果：埃索美拉唑的檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.2～20.0 ng/ml（r=0.999 7）；定量限為50 pg/ml；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜2%；回收率為99.93%～100.05%（RSD=0.1%，n=9）。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測(cè)定注射用埃索美拉唑鈉的含量。

注射用埃索美拉唑鈉；含量測(cè)定；超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

埃索美拉唑?yàn)樾乱淮馁|(zhì)子泵抑制劑，是奧美拉唑的左旋異構(gòu)體，對(duì)胃食管反流和已愈合的腐蝕性食管炎的維持治療均有顯著療效［1-2］。該藥于2001年在美國(guó)和歐洲國(guó)家獲準(zhǔn)上市，2003年在我國(guó)獲準(zhǔn)上市。該藥是通過(guò)特異性抑制胃壁細(xì)胞質(zhì)子泵減少胃酸分泌來(lái)發(fā)揮作用［3-5］，由于其具有強(qiáng)烈而持久的酸抑制作用，同時(shí)對(duì)胃黏膜也有一定的保護(hù)作用，因此該藥是目前治療酸相關(guān)性疾病的首選藥物［6-11］。目前對(duì)埃索美拉唑鈉的含量測(cè)定有滴定法和高效液相色譜法［12］，但尚未見(jiàn)采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）測(cè)定該藥含量的報(bào)道，因此本課題組參考相關(guān)文獻(xiàn)［13］，采用UPLC-MS/MS法測(cè)定注射用埃索美拉唑鈉的含量，以建立專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高，操作簡(jiǎn)單、快速測(cè)定含量的方法。

1　材料

1.1儀器

ACQUITY UPLC I-Class型UPLC儀（美國(guó)Waters公司）；Xevo TQ-S型三重四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters公司）；PL203型萬(wàn)分之一電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；SD1500型超聲波清洗儀（北京中晟銘科技有限公司，功率：200 W，頻率：30 kHz）。

1.2藥品與試劑

注射用埃索美拉唑鈉（阿斯利康制藥有限公司，批號(hào)：1511145、1512192、1601016，規(guī)格：40 mg/支）；埃索美拉唑鈉對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：510060-201401，純度：100.0%）；甲醇、甲酸、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2　方法與結(jié)果

2.1試驗(yàn)條件

2.1.1UPLC色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相：0.1%甲酸-甲醇（73∶27，V/V）；柱溫：35℃；流速：0.3 ml/min；分析時(shí)間：5 min；進(jìn)樣量：2 μl。

2.1.2MS/MS離子化模式：正離子（ESI+）模式；離子源溫度：150℃；毛細(xì)管電壓：3.0 kV；錐孔電壓：50 V；錐孔氣流量：150 L/Hr；脫溶劑氣溫度：450℃；脫溶劑氣流量：900 L/Hr；霧化氣壓力：7.0 Bar；監(jiān)測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）；碰撞能量（CE）：10/15 eV；母離子掃描范圍：100～800 mz/mz；二級(jí)主要裂解碎片：198.2和168.2。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液精密稱(chēng)取埃索美拉唑鈉對(duì)照品10 mg，置于100 ml量瓶中，加甲醇-水（80∶20，V/V）溶解并定容，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液適量，加甲醇-水（80∶20，V/V）稀釋制成質(zhì)量濃度為0.5 ng/ml的對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液精密稱(chēng)取樣品適量，置于100 ml量瓶中，加甲醇-水（80∶20，V/V）溶解并定容，制成質(zhì)量濃度為0.5 ng/ ml的供試品溶液。

2.2.3空白樣品溶液按樣品的處方比例稱(chēng)取空白輔料適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備空白樣品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白樣品溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜和二級(jí)質(zhì)譜，詳見(jiàn)圖1。由圖1可知，理論板數(shù)以埃索美拉唑計(jì)≥5 000；峰形良好，分離度＞1.5。結(jié)果表明，輔料不干擾樣品的測(cè)定。

2.4線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，用甲醇-水（80∶20，V/V）稀釋制成質(zhì)量濃度分別為0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、20.0 ng/ml的溶液，搖勻，作為系列線性溶液。取上述溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度（x，ng/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y=169.08x+14.852 0（r=0.999 7）。結(jié)果表明，埃索美拉唑的檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.2～20.0 ng/ml。

2.5定量限考察

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，用甲醇-水（80∶20，V/V）逐級(jí)稀釋?zhuān)础?.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，計(jì)算定量限。結(jié)果，埃索美拉唑的定量限為50 pg/ml。

2.6精密度試驗(yàn)

圖1　提取離子流圖A.對(duì)照品總離子流；B.對(duì)照品特征離子流（198.2）；C.對(duì)照品特征離子流（168.2）；D.供試品總離子流；E.供試品特征離子流（198.2）；F.供試品特征離子流（168.2）；G.空白樣品溶液總離子流；H.空白樣品溶液特征離子流（198.2）；I.空白樣品溶液特征離子流（168.2）；J.對(duì)照品二級(jí)質(zhì)譜圖；K.供試品二級(jí)質(zhì)譜圖Fig 1　Extracted ion flow chromatogramsA.total ion flow of reference substance；B.characteristic ion flow of reference substance（198.2）；C.characteristic ion flow of reference substance（168.2）；D.total ion flow of test sample；E.characteristic ion flow of test sample（198.2）；F.characteristic ion flow of test sample（168.2）；G.total ion flow of blank sample solution；H.characteristic ion flow of blank sample solution（198.2）；I.characteristic ion flow of blank sample solution（168.2）；J.secondary mass chromatogram of reference substance；K.secondary mass chromatogram of test sample

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，埃索美拉唑峰面積的RSD=0.9%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、12 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，埃索美拉唑峰面積的RSD=0.7%（n=5），表明供試品溶液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取樣品（批號(hào)：1511145）適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，埃索美拉唑峰面積的RSD=0.8%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9回收率試驗(yàn)

按樣品的處方取空白輔料9份，分別置于100 ml量瓶中，每3份精密加入低、中、高質(zhì)量的對(duì)照品各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算回收率，結(jié)果詳見(jiàn)表1。

表1　回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab 1　Results of recovery test（n=9）

2.10樣品含量測(cè)定

取3批樣品各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，結(jié)果詳見(jiàn)表2。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3，%）Tab 2　Results of content determination of samples（n=3，%）

3　討論

3.1液相條件的優(yōu)化

本試驗(yàn)采用ZORBAX Eclipse Plus C18（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）作為色譜柱時(shí)，分別考察了乙腈-水、甲醇-水、0.1%甲酸-乙腈、0.1%甲酸-甲醇、2 mmol/L乙酸銨-甲醇和2 mmol/L乙酸銨-乙腈等6種流動(dòng)相體系對(duì)色譜行為的影響。結(jié)果，乙腈-水和甲醇-水作為流動(dòng)相時(shí)，色譜峰拖尾、峰形較差。將流動(dòng)相中的水分別更換為0.1%甲酸和2 mmol/L乙酸銨后，色譜峰拖尾現(xiàn)象和峰型均有很大改善，但采用2 mmol乙酸銨體系靈敏度較差。故選擇0.1%甲酸溶液體系。進(jìn)一步對(duì)0.1%甲酸-乙腈和0.1%甲酸-甲醇進(jìn)行比較，結(jié)果采用0.1%甲酸-甲醇作流動(dòng)相時(shí)色譜峰峰形更好，靈敏度更高。因此，選擇0.1%甲酸-甲醇作為本試驗(yàn)的流動(dòng)相。

3.2質(zhì)譜條件的優(yōu)化

進(jìn)行質(zhì)譜條件探索時(shí)，本試驗(yàn)首先采用較高濃度的埃索美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，在ESI+模式下進(jìn)行母離子全掃描，確定其準(zhǔn)分子離子，然后以準(zhǔn)分子離子為母離子，對(duì)其子離子進(jìn)行全掃描，獲得二級(jí)質(zhì)譜響應(yīng)較強(qiáng)的子離子，最后以MRM進(jìn)行采集。在對(duì)埃索美拉唑進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化時(shí)，采用0.1%甲酸-甲醇（73∶27，V/V）為流動(dòng)相，分別采用ESI+和ESI－離子模式進(jìn)行調(diào)節(jié)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ESI+模式下的靈敏度遠(yuǎn)高于ESI－模式，且在ESI+模式下離子對(duì)346.2/198.2的響應(yīng)值比離子對(duì)346.2/168.2高。因此，本試驗(yàn)最終選擇信噪比高的346.2/198.2作為定量離子對(duì)，346.2/168.2作為定性離子對(duì)。

綜上所述，本方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測(cè)定注射用埃索美拉唑鈉的含量。

［1］ Thomas CK，Vasileios A，Michel B，et al.Physical and chemical stability of esomeprazole sodium solutions［J］. The Annals of：Pharmacotherapy，2008，42（9）：1 247.

［2］Lou HY，Chang CC，Sheu MT，et al.Optimal dose regimens of esomeprazole for gastric acid suppression with minimal influence of the CYP2C19 polymorphism［J］.Eur J Clin Pharmacol，2008，65（1）：55.

［3］王健苗.埃索美拉唑鎂聯(lián)合鹽酸依托必利分散片治療反流性食管炎40例［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29（10）：1 311.

［4］錢(qián)曉宏，劉琳娜，張琰.消化內(nèi)科常見(jiàn)不合理用藥問(wèn)題［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，30（2）：262.

［5］楊麗，嚴(yán)寶霞.埃索美拉唑的藥動(dòng)學(xué)［J］.中國(guó)新藥雜志，2004，13（5）：398.

［6］張暉敏，繆應(yīng)雷.埃索美拉唑的臨床應(yīng)用新進(jìn)展［J］.世界華人消化雜志，2009，20（17）：2 064.

［7］樓永軍，王峰，李會(huì)林.HPLC-MS測(cè)定人血漿中奧美拉唑濃度及藥動(dòng)學(xué)［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2010，45（4）：292.

［8］肖冬媛.埃索美拉唑與奧美拉唑治療胃潰瘍的臨床對(duì)比分析［J］.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2016，10（1）：136.

［9］王芳.埃索美拉唑與奧美拉唑治療胃潰瘍的臨床療效對(duì)比［J］.世界臨床醫(yī)學(xué)，2015，9（33）：84.

［10］張凌燕.奧美拉唑與埃索美拉唑臨床使用注意與配伍禁忌［J］.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2016，10（9）：269.

［11］龔愛(ài)琴，扈田進(jìn)，連亞紅，等.埃索美拉唑鈉含量的RPHPLC法測(cè)定［J］.江西化工，2013，3（1）：123.

［12］韓淑芹，白曉燕.嗎多明片的含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法改進(jìn)［J］.中國(guó)藥房，2016，27（12）：1 674.

［13］丁素玲，戴艷.HPLC-MS法測(cè)定甲磺酸多拉司瓊原料藥中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體含量［J］.中國(guó)藥房，2011，22（41）：3 901.

（編輯：劉柳）

Content Determination of Esomeprazole Sodium for Injection by UPLC-MS/MS

ZHANG Xuening1，ZHANG Limin2，ZHANG Jing2，ZHOU Chunhua1，ZHANG Qian1，HOU Zhifei2（1.Dept.of Pharmacy，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China；2.Dept.of Pharmaceutical Engineering，Hebei Chemical and Pharmaceutical College，Shijiazhuang 050026，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of Esomeprazole sodium for injection.METHODS：UPLC-MS/MS was performed.The column of ZORBAX Eclipse Plus C18with 0.1%formic acid-methanol（73∶27，V/V）at a flow rate of 0.3 ml/min，column temperature was 35℃，analysis time was 5 min，injection volume was 2 μl；ionization mode was positive ion mode，ion source temperature was 150℃，capillary voltage was 3.0 kV，cone voltage was 50 V，cone flow was 150 L/Hr，desolvation temperature was 450℃，desolvation gas flow was 900 L/Hr，nebuliser pressure was 7.0 Bar，parent ion scan range was 100-800 mz/mz，working mode was multiple reaction monitoring mode.RESULTS：The linear range of esomeprazole was 0.2-20.0 ng/ml（r=0.999 7）；the limit of quantitation was 50 pg/ml；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2%；recovery was 99.93%-100.05%（RSD=0.1%，n=9）.CONCLUSIONS：The method is simple and accurate，and can be used for content determination of Esomeprazole sodium for injection.

Esomeprazole sodium for injection；Content determination；UPLC-MS/MS

R917

A

1001-0408（2016）27-3852-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.36

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃（No.20150261）

＊主管藥師。研究方向：臨床藥學(xué)和藥物分析。電話：0311-66007385。E-mail：Zxn20160101@sina.com

副教授，碩士。研究方向：藥學(xué)教學(xué)及新藥研發(fā)。電話：0311-85110165。E-mail：Zhanglimin201601@sina.com

（2016-04-20

2016-07-19）