許開云，馬友記

（1.甘肅省武威市畜牧獸醫(yī)科學研究院，武威 733000；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，蘭州 730070；3.甘肅省肉羊繁育生物技術(shù)工程實驗室，民勤 733300）

繁殖與生理

不同斷奶日齡與精料補飼量對舍飼母羊產(chǎn)后雌二醇與孕酮的影響

許開云1，馬友記2，3

（1.甘肅省武威市畜牧獸醫(yī)科學研究院，武威 733000；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，蘭州 730070；3.甘肅省肉羊繁育生物技術(shù)工程實驗室，民勤 733300）

采用不同精料補飼量（0.25 kg/d、0.50 kg/d、1.00 kg/d）飼喂不同斷奶日齡（42 d和63 d）的36只產(chǎn)后舍飼母羊，利用化學發(fā)光法和放射性免疫法分別對其0～91 d外周血液中雌二醇（17β-E）2和孕酮（P4）的變化規(guī)律進行研究。結(jié)果表明：母羊在產(chǎn)羔后當天17β-E2的濃度為175.22 pg/mL± 22.64 pg/mL，然后呈現(xiàn)下降趨勢，斷奶后呈現(xiàn)上升趨勢，之后出現(xiàn)不規(guī)則的波動；在產(chǎn)羔后當天P4的濃度為0.13 ng/mL±0.02 ng/mL，之后維持較低的水平，在斷奶前基本處于較低水平，之后出現(xiàn)波動，在斷奶后出現(xiàn)小范圍的升高之后降低。在斷奶日齡上，舍飼母羊17β-E2和P442 d斷奶出現(xiàn)峰值要早于63 d斷奶。在精料補飼水平上，0.50 kg/d的精料補飼情況下，17β-E2波動出現(xiàn)較早；對17β-E2與P4變化趨勢對比得出，在42 d斷奶與0.50 kg/d的精料補飼下有利于頻繁產(chǎn)羔技術(shù)體系，實現(xiàn)一年兩產(chǎn)或兩年三產(chǎn)模式。以上結(jié)果對產(chǎn)后母羊內(nèi)分泌恢復(fù)和發(fā)情機理探討提供了理論基礎(chǔ)。

斷奶日齡；補飼；母羊；雌二醇；孕酮

綿羊的生殖活動主要受體內(nèi)生殖激素的調(diào)控，生殖激素直接調(diào)控母畜的發(fā)情、排卵、生殖細胞在生殖道內(nèi)的運行、胚胎附植、懷孕和泌乳等生殖環(huán)節(jié)的某一方面或某些方面，特別是孕酮和雌激素倍受國內(nèi)外專家和學者的重視［1］。畢浩磊等［2］對舍飼母羊妊娠期各階段雌二醇（17β-E2）和孕酮（P4）的濃度變化規(guī)律進行了研究。王玉琴等［3］對超排綿羊血液中的激素水平與超排效果進行了研究。曾國慶等［4］對灘羊發(fā)情周期血液中促黃體素（LH）、P4和17β-E2的含量及其變化進行了研究。張振漢等［5］對產(chǎn)雙羔的灘羊母羊生殖周期中血清的性激素含量也進行了研究。郎俠［6］探討了不同斷奶日齡對母羊體況和雌激素分泌的影響。Plokta E D等［7］的研究發(fā)現(xiàn)，血漿E2與孕酮P4濃度比值能較準確地反映雌性歐洲白尾鹿血漿P4濃度波動。目前工廠化與集約化養(yǎng)羊普遍采用密集產(chǎn)羔技術(shù)，而母羊密集產(chǎn)羔技術(shù)的關(guān)鍵是在繁殖季節(jié)與非繁殖季節(jié)對母羊進行誘導發(fā)情或同期發(fā)情，打破母羊的繁殖季節(jié)性，縮短母羊產(chǎn)后發(fā)情時間，使母羊盡早產(chǎn)后發(fā)情，但由于在實際生產(chǎn)中沒有掌握泌乳期母羊生殖內(nèi)分泌的變化，導致泌乳期誘導發(fā)情效果并不理想［8］。為此，本試驗通過研究不同斷奶日齡和不同精料補飼后泌乳期舍飼母羊的生殖內(nèi)分泌變化，探討影響母羊產(chǎn)后發(fā)情的因素及發(fā)情機理，了解自然狀態(tài)下母羊產(chǎn)后激素變化規(guī)律及生長因子變化規(guī)律，從而為母羊產(chǎn)后盡早發(fā)情、配種，縮短產(chǎn)羔間隔，增加產(chǎn)羔頻率等更好地發(fā)揮母羊生產(chǎn)性能提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 試驗地概況

試驗羊場地處東經(jīng)102°22′07″～102°24′18″，北緯38°12′11″～38°13′20″，屬于典型的大陸性氣候，夏熱冬寒，年均氣溫6.5～7.4℃，年降水量138mm，年蒸發(fā)量200mm，無霜期150 d，海拔高度1 580 m左右。場內(nèi)飼料基地用水質(zhì)良好的地下水灌溉，種植牧草飼料以紫花苜蓿、青貯玉米為主，每公頃產(chǎn)量青紫花苜蓿干草13.5～15.0 t，青貯玉米150 t左右。

1.2 試驗設(shè)計

在保證母羊胎次一致的情況下選用產(chǎn)羔期相近（間隔在12～48 h）、膘情一致、身體健康的產(chǎn)羔母羊36只為試驗用羊，并將其隨機分為6組，每組6只，精料為泌乳羊全價配合飼料（永昌三洋飼料公司生產(chǎn)），羔羊出生后跟隨母羊自由吮乳，斷奶時，強制母羊與羔羊隔離，給羔羊補飼，母羊的飼養(yǎng)管理不變，具體試驗設(shè)計方案見表1，精料組成與營養(yǎng)水平見表2和表3。

表1 試驗設(shè)計

表2 試驗精料配方%

表3 混合日糧營養(yǎng)水平

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗羊入舍前和試驗期間，按常規(guī)消毒，并對母羊進行定期防疫注射。試驗羊分隔到6個單圈中飼養(yǎng)，除精料添加量和斷奶日齡不同外，其余管理措施完全相同。分別于每天7：00、11：30和18：00飼喂母羊3次，主要飼喂干玉米秸（2.5 kg/d）和泌乳羊全價配合飼料，并在飼槽內(nèi)放置舔磚、水槽，保持新鮮潔凈，供給充足，讓羊自由飲水、自由運動。

1.4 血樣采集

母羊產(chǎn)羔后當天記為試驗的第0天，進行第1次采血（母羊產(chǎn)后12～24 h），之后0、7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77、84、91 d各采血一次。采血在當天早上7：30—8：00，用10 mL離心管進行頸靜脈采血，并按檸檬酸鈉抗凝劑與血液1∶8比例進行抗凝處理，3 000 r/min離心5～10 min，分離上清液，并分裝于2 mL離心管中，標記后放置于-20℃冰箱中保存待測。

1.5 激素測定方法

雌二醇（17β-E2）、孕酮（P4）兩種激素測定試劑盒購自北京北方生物技術(shù)研究所，測定方法分別為放射性免疫法和化學發(fā)光法。

1.6 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)用SPSS20.0軟件進行單因素方差分析，差異顯著時用Tukey作多重比較。均以平均值±標準差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組母羊血漿中17β-E2含量變化

A、B、C三組17β-E2平均值分別為77.81 pg/mL± 43.20 pg/mL、138.44 pg/mL±84.72 pg/mL、147.63 pg/mL ±104.76 pg/mL，呈現(xiàn)隨著精料補飼量的增加而升高的趨勢，且各組17β-E2含量間無顯著差異（P＞0.05）；從圖1可看出，在產(chǎn)羔后0～7 d中各組17β-E2的水平都有所降低，A組下降趨勢明顯，B組和C組在產(chǎn)羔后14 d出現(xiàn)第一個峰值，且C組高于B組，各組在產(chǎn)羔后28～42 d以后趨于平穩(wěn)，84 d后B組和C組出現(xiàn)升高的波動趨勢。

D、E、F三組17β-E2平均值分別為53.34 pg/mL± 18.72 pg/mL、44.45 pg/mL±14.81 pg/mL、42.12 pg/mL± 19.29 pg/mL，呈現(xiàn)隨著精料補飼量的提高而降低的趨勢。從圖2可以看出，在產(chǎn)羔后0～7 d試驗各組17β-E2均在下降，63 d斷奶后各組的變化趨勢明顯。

圖1 A、B、C組母羊血漿17β-E2濃度的變化趨勢

圖2 D、E、F組母羊血漿17β-E2濃度的變化趨勢

從圖3可以看出，在0.25 kg/d精料添加水平上，A組42 d斷奶的17β-E2波動要早于D組63 d斷奶，42 d斷奶后17β-E2也出現(xiàn)上升的趨勢，第一個峰值（133.3 pg/mL ±122.25 pg/mL）出現(xiàn)于斷奶后12 d，63 d斷奶后的第一個峰值（89.07 pg/mL±35.25 pg/mL）出現(xiàn)于斷奶后14 d。

圖3 A、D組母羊血漿17β-E2濃度變化趨勢

從B和E組2個相同精料補飼量不同斷奶日齡變化趨勢對比可以看出（圖4），在0.50 kg/d的精料補飼量情況下，B組42 d斷奶后17β-E2出現(xiàn)明顯的上升，第一個峰值出現(xiàn)在斷奶后12 d（132.34 pg/mL±65.56 pg/mL）；B組和E組都在產(chǎn)羔后84 d上升。

從C組和F組2個相同精料補飼量不同斷奶日齡的變化趨勢對比可以看出（圖5），在1.00 kg/d精料補飼量情況下，C組42 d斷奶后17β-E2也呈現(xiàn)短暫上升之后下降的趨勢，也在產(chǎn)羔后84d開始增加；F組63d斷奶，在整個過程中17β-E2一直處于平穩(wěn)水平，波動不明顯。

2.2 各組母羊血漿中P4含量變化

A、B、C三組在42 d斷奶情況下的P4平均值分別為0.48 ng/mL±0.25 ng/mL、0.29 ng/mL±0.11 ng/mL、0.45 ng/mL ±0.28 ng/mL。從圖6可知，在產(chǎn)羔后28 d中各組P4濃度很低，28 d后出現(xiàn)上升趨勢，42 d斷奶時A組與C組上升明顯，且均高于B組（P＜0.05），之后有所降低，產(chǎn)羔后77 d時A組和C組分別出現(xiàn)高峰（1.35ng/mL±0.49ng/mL、1.74ng/mL±0.84 ng/mL），之后迅速降低，而B組在產(chǎn)羔后84 d才出現(xiàn)高峰，之后也出現(xiàn)降低。

D、E、F三組在63 d斷奶情況下，P4的平均值分別為0.49 ng/mL±0.27 ng/mL、0.28 ng/mL±0.22 ng/mL、0.33 ng/mL ±0.21 ng/mL。從圖7可知，在產(chǎn)羔后21 d中各組P4處于較低水平，21d后D組、F組出現(xiàn)波動，E組在21d后開始緩慢上升，在63 d達到峰值。

圖4 B、E組母羊血漿17β-E2濃度變化趨勢

圖5 C、F組母羊血漿17β-E2濃度變化趨勢

圖6 A、B、C組母羊血漿P4濃度變化趨勢

圖7 D、E、F組母羊血漿P4濃度變化趨勢

從A、D組相同精料補飼量不同斷奶日齡的變化趨勢對比可以看出（圖8），A、D組在產(chǎn)羔后21 d P4都處于較低水平，28 d后出現(xiàn)上升趨勢。A組在斷奶當天下降，之后緩慢上升，在產(chǎn)羔后77 d達到峰值后出現(xiàn)降低。D組在產(chǎn)后70～77 d范圍內(nèi)出現(xiàn)峰值，之后迅速下降。

從B、E組相同精料補飼量不同斷奶日齡的變化趨勢對比可以看出（圖9），在0.50 kg/d精料補飼的情況下，42 d和63 d斷奶P4的水平在產(chǎn)后56 d以前都處于較低水平。42 d斷奶組在42 d斷奶后P4有緩慢的上升趨勢，63 d斷奶組在斷奶14 d后也出現(xiàn)類似的升高，兩組斷奶日齡在產(chǎn)后84 d都出現(xiàn)波峰，且42 d斷奶組明顯高于64 d斷奶組。

從C、F組相同精料補飼量不同斷奶日齡的變化趨勢對比可以看出（圖10），P4在1.00 kg/d精料補飼的條件下，42 d斷奶C組與63 d斷奶F組在產(chǎn)羔后28 d內(nèi)均處于較低水平，之后有上升趨勢，C組斷奶后出現(xiàn)兩次波峰，F(xiàn)組則沒有出現(xiàn)此變化。

圖8 A、D組母羊血漿P4濃度變化趨勢

圖9 B、E組母羊血漿P4濃度變化趨勢

圖10 C、F組母羊血漿P4濃度變化趨勢

2.3 各試驗組17β-E2與P4變化趨勢對比

通過圖11（A～F）可知，A組在產(chǎn)羔后42～56 d內(nèi)17β-E2表現(xiàn)上升趨勢，而P4表現(xiàn)下降趨勢；B組產(chǎn)羔后49～70 d 17β-E2呈現(xiàn)升高趨勢，而P4有所下降；C組在產(chǎn)羔后63～70 d 17β-E2有上升趨勢，P4處于下降趨勢；D組63 d斷奶后17β-E2與P4表現(xiàn)相同的升高與降低趨勢；E組在產(chǎn)羔后84～91 d出現(xiàn)17 β-E2上升、P4下降趨勢；F組在產(chǎn)羔后63 d斷奶，各段時間17β-E2與P4都出現(xiàn)相同的變化趨勢。從對比可知，在斷奶日齡相同的情況下，隨著精料補飼量的增加，出現(xiàn)17β-E2與P4發(fā)情變化的趨勢時間越來越晚，在42 d斷奶情況下，0.50 kg/d的精料補飼水平出現(xiàn)發(fā)情趨勢的時間較1.00 kg/d的要早；在63 d斷奶情況下，0.50 kg/d的精料補飼也比1.00 kg/d的早。從而得出0.50 kg/d的精料補飼水平有利于斷奶后的早期發(fā)情，同樣在精料補飼相同的情況下，42 d斷奶比63 d斷奶更有利于產(chǎn)后發(fā)情。

圖11 17β-E2與P4濃度變化趨勢對比圖

3 討論

3.1 斷奶時間對母羊17β-E2與P4的影響

母羊在孕激素與雌激素協(xié)同作用下，通過協(xié)同與拮抗途徑調(diào)節(jié)發(fā)情等生殖活動［9］。E2對啟動雌性哺乳動物的發(fā)情有重要作用，是雌性哺乳動物發(fā)情的基礎(chǔ)。少量孕酮與雌激素間有協(xié)同作用，可促進發(fā)情行為的表現(xiàn)。大量孕酮對下丘腦或垂體前葉有負反饋作用，抑制FSH和LH的釋放而抑制發(fā)情［10］。在發(fā)情間期，母羊血清中E2處于較低水平，在發(fā)情間期緩慢上升，進入發(fā)情期后突然升高，達到最高水平后迅速下降，母羊表現(xiàn)出發(fā)情癥狀。母羊分娩后處于泌乳性生理乏情的情況下，卵巢活動處于靜止狀態(tài)，卵泡即不發(fā)育，黃體生成也不表現(xiàn)周期性發(fā)情現(xiàn)象。泌乳期由于促乳素對促性腺激素的分泌有抑制作用，卵巢周期性活動受到抑制，卵泡不能發(fā)育，雖然在血液中能檢測到雌激素與孕酮，但卵巢無活動，只有當斷奶后才會很快發(fā)情，綿羊泌乳期乏情持續(xù)5～7周，在斷奶后20 d左右發(fā)情［11］。母羊斷奶后，機體主要將營養(yǎng)轉(zhuǎn)運使機體恢復(fù)體況，而無需將獲取的營養(yǎng)素轉(zhuǎn)換為乳汁，所以斷奶后比不斷奶的增重更明顯。

本試驗17β-E2與P4的水平與其他研究得出的結(jié)論相近［1］，試驗中兩組斷奶日齡母羊血清中的17β-E2均為42d斷奶組高于63d斷奶組，表明提早斷奶能夠提高母羊機體17β-E2水平。從趨勢圖可以看出，P4整體呈現(xiàn)上升趨勢。在斷奶對產(chǎn)后母羊體內(nèi)雌二醇與孕酮變化的研究中，喻世剛等［12］通過對巴音布魯克母羊產(chǎn)后40d和60d斷奶與正常斷奶的對比研究表明，早期斷奶組母羊17β-E2濃度高于正常斷奶組，說明早期斷奶有利于生殖機能恢復(fù)和生殖功能重建。

3.2 營養(yǎng)對泌乳期母羊17β-E2與P4的影響

營養(yǎng)因素對于泌乳期母羊體內(nèi)雌激素與孕激素的影響主要是指日糧中的蛋白質(zhì)、能量、微量元素等因素的影響，日糧中能量不足能夠延長母羊乏情期，使產(chǎn)羔間隔延長，降低母羊利用率，同時過高的能量水平增加了機體對雌激素與孕酮的清除幾率，使母體對胚胎的識別降低，不利于機體的發(fā)情和受孕。有研究表明，泌乳期提高日糧中蛋白質(zhì)水平可以提高機體尤其是乳汁中雌激素含量［13-14］。綿羊的發(fā)情表現(xiàn)呈季節(jié)性，同時受營養(yǎng)狀況、妊娠、分娩、泌乳、光照與品種等因素影響。正常發(fā)情是母羊正常繁殖的關(guān)鍵，綿羊機體內(nèi)的生殖激素是控制母羊周期性發(fā)情及表現(xiàn)的物質(zhì)［15］。

本試驗表明，17β-E2和P4數(shù)值與李愛華等［1］在舍飼灘羊母羊生殖激素變化規(guī)律研究中的泌乳期所測得值基本一致，在變化規(guī)律上17β-E2在試驗各組分娩后0～7d都有下降趨勢，之后維持在較低的水平波動，A、B、C三組在42 d斷奶后第1次出現(xiàn)17β-E2峰值的時間大致相同，都在產(chǎn)羔后56～70 d之間，之后出現(xiàn)下降趨勢，第2次出現(xiàn)峰值的時間大致在84 d之后。在P4的變化趨勢上，A、B、C三組在42 d斷奶后下降趨勢均集中在產(chǎn)后49～63 d，之后緩慢上升，出現(xiàn)高峰大致在70～84 d；D、E、F三組P4在63 d斷奶后下降趨勢集中在70～77 d，之后有上升，出現(xiàn)高峰大致在產(chǎn)后84 d，晚于42 d斷奶各組。從P4變化曲線可以看出，產(chǎn)后母羊在28 d后均有卵巢活動，最早出現(xiàn)在產(chǎn)后21 d，最晚出現(xiàn)在產(chǎn)后35 d，產(chǎn)后羊P4濃度變化個體差異較大，變化不太規(guī)則，說明產(chǎn)后泌乳母羊卵巢均恢復(fù)活動。

4 小結(jié)

在本試驗條件下，依據(jù)17β-E2與P4變化規(guī)律可以得出，在42 d斷奶、0.50 kg/d的精料補飼下，有利于產(chǎn)后舍飼母羊繁殖機能的恢復(fù)，實現(xiàn)一年兩產(chǎn)或兩年三產(chǎn)的頻繁產(chǎn)羔技術(shù)體系。

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Effects of Weaning Ages and Concentrate Supplements on the Changes of 17β-E2and Progesterone in Postpartum Ewes

Xu Kaiyun1，Ma Youji2，3
（1.Wuwei AcademyofAnimal Husbandryand VeterinaryScience，Wuwei 733000，Gansu，China；2.College ofAnimal Science and Technology，Gansu Agricultural University，Lanzhou 730070，China；3.Sheep BreedingBiotechnologyEngineeringLaboratory，Minqin 737200，Gansu，China）

Thirty-six postpartum ewes were selected and divided into six groups to study the effects of weaning ages（42 d and 63 d）and concentrate supplements（0.25 kg/d，0.50 kg/d，1.00 kg/d）on the changes of 17β-E2and progesterone in postpartum ewes.The concentration of estradiol（17β-E2）and progesterone（P4）from 0 d to 91 d were determined by chemical luminescence method and radioimmunoassay respectively.The results showed that the concentration of 17β-E2in ewes was 175.22 pg/mL± 22.64 pg/mL on the 0th day after parturition，then downward，and upward after weaning；The concentration of P4in ewes，was 0.13 ng/mL±0.02 ng/mL on the 0th day after parturition and then kept on a low level，rose a little after weaning，then downward. The concentration peak of 17β-E2in the ewes weaning on 42 d appeared earlier than that on 63 d.The concentration peak of 17β-E2in the ewes on the 0.50 kg/d supplementing level appeared earlier than those in other two groups.So it was concluded that the mode of weaning on 42 d and supplementing on the 0.50 kg/d level would be more productive in high frequence lambing system.Meanwhile，the results would provide a the-oretical basis for understanding the mechanism of endocrine recovery and estrus mechanism.

weaning age；concentrate supplement；ewe；estrogen；progesterone

S826.3

A

2095-3887（2016）03-0024-07

10.3969/j.issn.2095-3887.2016.03.007

2016-03-29

甘肅省高校基本科研業(yè)務(wù)費（2014）；甘肅省農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究與應(yīng)用開發(fā)項目（GNSW-2012-19）；國家肉羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-39）

許開云（1963-），男，高級獸醫(yī)師，主要從事動物飼養(yǎng)與疫病防治工作。

馬友記（1976-），男，教授，主要從事綿山羊生產(chǎn)教學科研工作。