劉一凡，宗良綱，史艷芙，孫明明，杜霞飛

（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，南京 210095）

混合菌群強(qiáng)化去除泥漿體系中菲、芘的效果及影響因素①

劉一凡，宗良綱*，史艷芙，孫明明，杜霞飛

（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，南京 210095）

通過室內(nèi)泥漿體系模擬試驗(yàn)，研究了混合微生物菌群（嗜熱菌和多環(huán)芳烴特異性降解菌），在40℃條件下（兩類微生物均能較快生長繁殖），對泥漿體系中代表性多環(huán)芳烴菲、芘的去除效果及其影響因素（水土比，葡萄糖、淀粉、水楊酸及其濃度）。結(jié)果表明：泥漿體系中混合微生物菌群對多環(huán)芳烴的去除效果顯著（P＜0.01），單日菲去除率最大可達(dá)20.0%，芘達(dá)15.3%。隨著反應(yīng)進(jìn)程的進(jìn)行，菲和芘的去除率提高，去除速率則逐步降低，菲的半衰期1.8 天小于芘4.9 天，因此菲的去除較芘更快。試驗(yàn)得到該泥漿體系中混合微生物菌群去除多環(huán)芳烴最合適的水土比為2∶1，碳源為葡萄糖，濃度TOC葡萄糖：TOCPAHs為2∶1。該研究結(jié)果可為泥漿體系中混合微生物菌群強(qiáng)化修復(fù)多環(huán)芳烴污染土壤的技術(shù)研發(fā)提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。

多環(huán)芳烴；泥漿體系；混合微生物；水土比；葡萄糖

多環(huán)芳烴（polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs）是分子中具有兩個(gè)或兩個(gè)以上苯環(huán)結(jié)構(gòu)的一類有機(jī)污染物，具有疏水性，容易被固體顆粒和腐殖質(zhì)所吸附［1］。PAHs在環(huán)境中廣泛存在，并且在土壤環(huán)境中會長期殘留，并不斷積累［3］，屬于難降解的有毒有機(jī)污染物，具有很強(qiáng)的“三致性”［4］。

修復(fù)PAHs污染土壤是當(dāng)下環(huán)境治理的熱點(diǎn)，目前所采用的方法包括物理法（如土壤蒸汽浸提、熱脫附）、化學(xué)法（如化學(xué)氧化、土壤淋洗）、以及生物法（如微生物修復(fù)、植物修復(fù)）。其中，微生物修復(fù)技術(shù)以利用微生物來降解污染物為技術(shù)核心，被認(rèn)為是一類費(fèi)用低、效率較高的修復(fù)方法。人們可以通過不同技術(shù)途徑來實(shí)施微生物修復(fù)，如生物泥漿反應(yīng)技術(shù)是將受污染的土壤挖掘出來與水混合攪拌成泥漿，在體系中接種微生物進(jìn)行處理，再將土壤經(jīng)脫水后運(yùn)回原地。生物泥漿反應(yīng)技術(shù)作為微生物修復(fù)技術(shù)之一，以水相為主要處理介質(zhì)，污染物、微生物、溶解氧和營養(yǎng)物的傳遞速度快，具有處理周期短、降解條件易于控制和處理效果好的特點(diǎn)［5］。因此在高濃度、難降解有機(jī)物污染土壤的快速修復(fù)工程中具有良好的開發(fā)價(jià)值和廣泛的應(yīng)用前景。在自然界中，一些微生物可以以PAHs作為碳源，快速高效降解土壤中的PAHs。還有一類在絕大多數(shù)微生物無法生存的極端環(huán)境中仍然能夠正常生長繁殖的微生物，稱為嗜極菌或極端微生物（extremophiles），其中嗜熱菌（thermophiles）是指在高溫環(huán)境中生長的微生物，具有高效降解環(huán)境有機(jī)污染物的潛力。嗜熱菌在高溫條件下降解有機(jī)污染物，代謝速度快，嗜溫雜菌的競爭減少，同時(shí)高溫環(huán)境下一些難降解有機(jī)物的溶解度和生物可利用性大大提高，有機(jī)污染物可得到快速、徹底降解［6］。

生物泥漿反應(yīng)技術(shù)作為一種重要的環(huán)境處理技術(shù)，在歐、美等發(fā)達(dá)國家受到廣泛重視，國內(nèi)外利用該技術(shù)進(jìn)行有機(jī)污染物的生物修復(fù)已有文獻(xiàn)報(bào)道［7-10］，而利用嗜熱菌與PAHs特異性降解菌的混合微生物菌群降解泥漿體系中PAHs的研究還相對較少。因而，本研究采用模擬泥漿體系，利用嗜熱菌群和PAHs特異性降解菌的混合微生物進(jìn)行PAHs的去除效果研究，探討工藝參數(shù)和優(yōu)化條件，為混合微生物菌群泥漿修復(fù)技術(shù)的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試土壤為黃棕壤，采自南京市下馬坊公園林下表層（0 ～ 20 cm）。土樣自然風(fēng)干后粉碎過2 mm篩，一部分經(jīng)高溫高壓（121.0℃，30 min）滅菌處理，作為供試滅菌土樣備用；另一部分作為供試自然土樣裝瓶備用。土壤的基本性質(zhì)見表1。

表1 供試土壤基本理化性質(zhì)Table1 Physical and chemical properties of the experimental soil

供試微生物為嗜熱菌和降解菌。嗜熱菌由江蘇宜興國豪生物環(huán)保有限公司提供，為該公司餐廚垃圾高溫快速堆肥化反應(yīng)器所用菌劑，分離菌種并鑒定其主要微生物為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）、短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）、巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）和嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus stearothermophilus）。降解菌由中國科學(xué)院南京土壤研究所土壤環(huán)境化學(xué)與環(huán)境保護(hù)研究室提供，為鞘氨醇單胞菌［11］（Sphingobium sp.）No. CCTCC AB 2010361。

化學(xué)試劑：菲、芘購自上海Aladdin公司，純度為97%；二氯甲烷、正己烷、丙酮、無水硫酸鈉和層析用硅膠（100目）均為分析純；甲醇為色譜純。

1.2 試驗(yàn)儀器

立式壓力蒸汽滅菌器（LDZX-30KBS），恒溫培養(yǎng)振蕩器（ZWY-240），高速冷凍離心機(jī)（CT14RD），超凈工作臺（SW-CJ-ID），冷凍干燥器（SIGMA），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE2000B），超聲波清洗器（KQ5200B）和高效液相色譜儀（Agilent 1200）。

1.3 試驗(yàn)方法

污染土壤的制備：配制菲、芘的丙酮溶液，均勻加入到供試自然土壤和滅菌土壤中，待丙酮揮發(fā)完全后混勻，用未污染土樣調(diào)節(jié)，使土壤中菲、芘含量均為5 mg/kg，制得的菲、芘污染土壤避光儲存?zhèn)溆谩?/p>

菌株的活化與菌懸液的制備：取出冰箱中保存的嗜熱菌和PAHs特異性降解菌，在無菌條件下，接入到牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，40℃ 150 r/min恒溫振蕩培養(yǎng)24 h后，8 000 r/min離心5 min，用經(jīng)過高溫高壓滅菌的無機(jī)鹽培養(yǎng)基沖洗菌體3次，收集菌體，用無機(jī)鹽培養(yǎng)基稀釋，使菌懸液在600 nm處OD值約為1.0。

泥漿體系中混合微生物菌群去除PAHs試驗(yàn)：本研究對泥漿體系的強(qiáng)化調(diào)控因子有 3個(gè)，分別是微生物，水土比（2∶1、2.5∶1和3∶1）以及不同濃度的碳源（葡萄糖、淀粉和水楊酸）。取20.0 g人工制備的污染土壤于150 ml三角瓶中，依據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)置滅菌不添加混合微生物菌群的污染土壤和不滅菌添加混合微生物菌群的污染土壤，研究混合微生物菌群對PAHs的降解效果，并確定合適的修復(fù)時(shí)間；設(shè)置不同水土比的泥漿體系，選擇最合適的水土比；在體系中添加不同種類的碳源標(biāo)準(zhǔn)備用液，使體系中TOC外加碳源∶TOCPAHs為1∶1、2∶1、5∶1和10∶1。混合微生物按5%（v/v）的接種量接種，選擇嗜熱菌和常溫降解菌都能夠較快速生長繁殖的溫度40℃［6］，于150 r/min避光條件下模擬生物泥漿反應(yīng)器恒溫振蕩，定時(shí)取樣。試驗(yàn)所用的所有容器及培養(yǎng)液都經(jīng)過高溫高壓滅菌處理。

泥漿體系中PAHs的測定［13］：將樣品轉(zhuǎn)移至50 ml玻璃離心管中，3 000 r/min離心30 min，上清液和等體積甲醇混合，過0.22 μm孔徑濾膜，4℃ 保存供PAHs含量測定（經(jīng)過測定，上清液中PAHs的含量很少，無法測出）。土壤樣品經(jīng)冷凍干燥后過60目篩，取2.0 g上述制備的土壤樣品于50 ml玻璃離心管中，加入2.0 g無水硫酸鈉，充分混勻。然后加入10.0 ml二氯甲烷，蓋緊后超聲萃取l h，4 000 r/min離心5 min；取3.0 ml上清液過硅膠柱凈化，并用體積比為1∶l 的二氯甲烷和正己烷溶液洗脫；洗脫液收集至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶后，40℃下濃縮至干，用甲醇定容到2.0 ml，過0.22 μm孔徑濾膜后，-20℃ 保存供PAHs含量測定。經(jīng)檢測，該提取方法菲的回收率達(dá)到93.2%，芘的回收率達(dá)到90.7%。

HPLC分析條件：色譜柱為4.6 mm × 150 mm烷基C18反相柱；流動(dòng)相為甲醇∶水= 90∶10，流速1 ml/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣量20 μl；檢測波長菲為254 nm，芘為240 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 混合微生物菌群對泥漿體系中菲和芘的去除效果

圖1是滅菌不添加混合微生物菌群和不滅菌添加混合微生物菌群的兩種泥漿體系中菲和芘的去除率曲線，可見，經(jīng)過滅菌處理的泥漿體系經(jīng)過30 天恒溫振蕩培養(yǎng)，菲的去除率不足50.0%，芘的去除率也僅為31.7%，體系中菲和芘去除作用的原因是可能是土著微生物得到了一定程度的恢復(fù)促進(jìn)了菲、芘的降解，或是由于泥漿體系的升溫過程使得部分PAHs揮發(fā)所致；而未滅菌添加混合微生物菌群的泥漿體系經(jīng)過18天恒溫振蕩培養(yǎng)，菲的去除率達(dá)87.6%，芘的去除率為92.5%。結(jié)果表明，在未滅菌泥漿體系中混合微生物菌群處理對PAHs的去除效果顯著（P＜0.01）。根據(jù)單因素方差分析，培養(yǎng)12天和18天，菲的去除率已經(jīng)沒有顯著性差異（P＞0.05）；培養(yǎng)18天和24天，芘的去除率也沒有顯著性差異（P＞0.05）。因此在后續(xù)試驗(yàn)中，將體系運(yùn)行時(shí)間確定為18 天，既可以較為深度地修復(fù)菲和芘污染土壤，又可以有效節(jié)約處理成本。

菲和芘的降解動(dòng)力學(xué)方程采用一級動(dòng)力學(xué)模型進(jìn)行擬合：C = C0e-λt，式中：C為t時(shí)間土壤中菲或芘的濃度；C0為土壤中菲或芘的初始濃度；λ為反應(yīng)速率常數(shù)。采用最小二乘法和擬牛頓法，對土壤中菲或芘降解的動(dòng)力學(xué)方程進(jìn)行擬合，可以得到降解動(dòng)力學(xué)模型中的各個(gè)參數(shù)值，結(jié)果見表2。

圖1 滅菌體系與不滅菌添加混合微生物菌群體系中菲（A）和芘（B）的去除曲線Fig. 1 Removal curves of phenanthrene （A） and pyrene （B） in soil slurry with time in sterilization system and mixed microbes system

表2 滅菌體系與不滅菌添加混合微生物菌群體系中菲和芘的降解動(dòng)力學(xué)方程和模型參數(shù)Table2 Degradation kinetic equations and parameters for phenanthrene and pyrene in sterilization system and mixed microbes system

在本實(shí)驗(yàn)條件下，滅菌的泥漿體系中菲和芘的半衰期分別為29.8天和55.6 天，而不滅菌添加混合微生物菌群的泥漿體系中菲和芘的半衰期分別為1.8天和4.9 天。這說明混合微生物菌群的存在大大加速了泥漿體系中菲和芘的去除速率，縮短了菲和芘的半衰期，證明了泥漿體系中利用混合微生物菌群降解PAHs的可行性。從表2中還可以看出菲的擬合相關(guān)性相對較弱（擬合R2＝0.72），這可能是由于土壤中的菲在6天之內(nèi)基本就被微生物降解，之后土壤中殘余的少量菲去除速率很小的緣故。

2.2 水土比對泥漿體系中菲和芘去除效果的影響

將污染土壤和水均勻地?cái)嚢璩赡酀{便于泥漿體系中PAHs與微生物、營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣等充分接觸，使生物降解更徹底。其中適宜的水土比是生物反應(yīng)器中的重要參數(shù)之一。本實(shí)驗(yàn)中設(shè)計(jì)了不同水土比研究其對泥漿體系中菲和芘去除效果的影響，見圖2。由圖2可見，相同時(shí)間不同的水土比，分析其對泥漿體系中菲和芘的去除效果略有不同，經(jīng)過2天培養(yǎng)，水土比為2∶1的泥漿體系菲的去除率明顯高于2.5∶1和3∶1的泥漿體系；經(jīng)過4天和6 天培養(yǎng)，水土比為2∶1的泥漿體系芘的去除率明顯高于2.5∶1和3∶1，造成這種現(xiàn)象的原因可能是由于水土比低的泥漿體系中微生物、營養(yǎng)物質(zhì)的濃度高而有利于微生物的快速生長繁殖，進(jìn)而加速了體系中菲和芘的去除。而在體系運(yùn)行至12天時(shí)，不同水土比的泥漿體系中菲和芘的去除率差別不大，這可能是由于試驗(yàn)進(jìn)行到后期，不同水土比的泥漿體系中菲和芘已經(jīng)得到較充分的去除。

利用18天內(nèi)土壤中菲和芘的含量數(shù)據(jù)對菲和芘的降解動(dòng)力學(xué)方程采用上述一級動(dòng)力學(xué)模型進(jìn)行擬合，可以得到降解動(dòng)力學(xué)模型中的各個(gè)參數(shù)值，結(jié)果見表3。

由表3可知，菲在2∶1水土比條件下的半衰期最短為3.1天，2.5∶1和3∶1水土比條件下的菲的半衰期分別為3.6天和3.9天，隨著水土比的增大，菲的半衰期稍有增長；芘在2∶1水土比條件下的半衰期最短為5.0 天，2.5∶1和3∶1水土比條件下的芘的半衰期分別為5.8 天和5.9天，隨著水土比的增大，芘的半衰期也稍有延長。

圖2 不同水土比對泥漿體系中菲（A）和芘（B）去除效果的影響Fig. 2 Influence of water/soil ratio on the degradation of phenanthrene （A） and pyrene （B）

表3 不同水土比體系中菲和芘的降解動(dòng)力學(xué)方程和模型參數(shù)Table3 Degradation kinetic equations and parameters for phenanthrene and pyrene in different water/soil ratios

根據(jù)上述結(jié)果分析，水土比對泥漿體系中菲和芘的去除效果有一定的影響，但是反應(yīng)后期，不同水土比條件下菲和芘的去除效果差異不顯著（P＞0.05），在有利于攪拌通氣的情況下，盡量采用最小的水土比，可以有效利用反應(yīng)器的容積，增加單位體積處理污染土壤的數(shù)量，因此本實(shí)驗(yàn)選擇最適宜的水土比是2∶1。

表4 添加不同碳源的泥漿體系中菲的去除率（%）Table4 Removal rate of phenanthrene from soil sully with different carbon sources

表5 添加不同碳源的泥漿體系中芘的去除率（%）Table5 Removal rate of pyrene from soil sully with different carbon sources

2.3 碳源對泥漿體系中菲和芘去除效果的影響

選擇3種常見易獲取的葡萄糖、淀粉和水楊酸作為碳源，對泥漿體系進(jìn)行強(qiáng)化，其添加量為TOC外加碳源∶TOCPAHs為1∶1、2∶1、5∶1和10∶1，即為5、10、25和50 mg/L。為了比較不同碳源對修復(fù)過程中菲和芘去除效果的影響，選擇對12天各體系中菲和芘的去除率進(jìn)行比較。根據(jù)表4和表5顯示結(jié)果，在體系中添加一定濃度的不同碳源，對菲的去除率均有不同程度的提高，其中向體系中添加10 mg/L的葡萄糖對菲的去除率的提高最有效；向體系中添加淀粉和低濃度的水楊酸（5 mg/L）作為碳源，對芘的去除率沒有顯著影響（P＞0.05），而向體系中添加高濃度的水楊酸，會對芘的去除產(chǎn)生抑制作用，且水楊酸的濃度越高，對芘去除的抑制作用越大，低濃度的葡萄糖（5、10 mg/L）對芘去除有促進(jìn)作用，而高濃度的葡萄糖對芘去除有抑制作用，這可能是由于PAHs降解菌較容易利用速效碳源物質(zhì)葡萄糖，抑制了微生物對芘的利用，從而造成了降解率的下降?？紤]到碳源種類和濃度對PAHs去除效果的影響，在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)該選擇向泥漿體系中添加適量的葡萄糖，使TOC葡萄糖∶TOCPAHs為2∶1。

3 討論

微生物降解是PAHs污染土壤最有效的修復(fù)技術(shù)之一。降解PAHs的微生物主要為細(xì)菌和真菌［14］。本研究中，未滅菌添加混合微生物體系與滅菌體系相比，PAHs的去除率顯著提高，這說明微生物降解是泥漿體系中PAHs去除的主要途徑。這與張巧巧［16］等和劉巍巍等［17］的研究結(jié)論一致。這表明，在有機(jī)污染土壤中人為投加適合降解該污染物的、與土著微生物有很好相容性的高效菌株，可以明顯促進(jìn)土壤中有機(jī)污染物的降解。

從圖1可以看出，隨著時(shí)間的延長，菲和芘的去除率逐漸提高，而去除速率則逐漸減小。在試驗(yàn)前期，混合微生物菌群對泥漿體系中PAHs的生物降解能力較強(qiáng)，隨著時(shí)間的延長去除率逐漸升高，但試驗(yàn)進(jìn)行到后期，去除速率逐漸降低，最終混合微生物菌群的去除率基本保持穩(wěn)定，說明降解過程基本停止。這一現(xiàn)象與陳海英等［18］以及李培軍等［5］的研究結(jié)果相似。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因是PAHs的生物有效性降低［19］以及養(yǎng)分含量減少［20］。泥漿體系中剩余較低濃度的菲和芘很難為微生物所利用，要去除這部分菲和芘，必須提供其他的降解條件。

菲和芘分別代表典型的3環(huán)和4環(huán)的PAHs類有機(jī)污染物，其分子結(jié)構(gòu)和物理化學(xué)性質(zhì)都有明顯不同，被微生物分解的難易程度也不同。從表2和表3可看出，菲的半衰期比芘短，這說明菲的去除較芘更快。有研究［21］表明，隨著分子量的增加，PAHs的生物降解率大體呈現(xiàn)出減小的趨勢。這主要是由于隨著分子量的增大，PAHs的憎水性增強(qiáng)，揮發(fā)性減小，PAHs的沉積物-水分配系數(shù)增大，容易被固體顆粒和腐殖質(zhì)表面吸附，PAHs從土壤中釋放的速度也越慢，且PAHs環(huán)狀結(jié)構(gòu)越復(fù)雜，越不易被微生物分解。但這種規(guī)律并非絕對，付登強(qiáng)等［23］人研究表明，酸性土壤中PAHs的去除率大小順序?yàn)榱h(huán)＞五環(huán)＞三環(huán)＞四環(huán)；而中性和堿性土壤中PAHs的去除率大小順序?yàn)榱h(huán)＞三環(huán)＞五環(huán)＞四環(huán)。

將污染土壤和水均勻地?cái)嚢璩赡酀{有利于微生物的深度降解過程，其中水土比是生物反應(yīng)器中的重要參數(shù)之一，可以顯著影響PAHs的生物有效性。土壤中PAHs的吸附-解吸過程是控制其生物有效性及其降解的主要過程之一［24］。在本研究中，試驗(yàn)初期2∶1的水土比對土壤中菲和芘的去除率較高，而在試驗(yàn)進(jìn)行至12 天，不同水土比的泥漿體系中混合微生物菌群對菲和芘的去除率差別不大。Doick和Semple［26］研究了泥漿反應(yīng)器的水土比對菲礦化的影響，發(fā)現(xiàn)在一定范圍內(nèi)增加水土比，菲礦化率增加，水土比在2∶1到5∶1之間菲的礦化率最高。鞏宗強(qiáng)等［27］、許華夏等［28］以菲和芘為供試污染物，以水土比為調(diào)控因子，進(jìn)行生物泥漿反應(yīng)器對PAHs微生物降解研究，發(fā)現(xiàn)不同水土比（2∶1、3∶1、4∶1和5∶1）對微生物數(shù)量及PAHs的降解率均影響不大。

特定土壤微生物能夠利用PAHs作為唯一碳源和能源或利用其他物質(zhì)作為共代謝底物對PAHs進(jìn)行深度降解，這是微生物強(qiáng)化降解去除土壤中PAHs的重要途徑之一。目前已有利用有機(jī)廢棄物、葡萄糖和淀粉等碳源物質(zhì)來提高PAHs降解效率的相關(guān)研究［29］。在本研究中，在泥漿體系中添加一定量的不同碳源，對菲的去除率均有不同程度的提高，而對芘的去除率既有促進(jìn)也有抑制。對菲和芘的去除率提高最有效的碳源是葡萄糖，濃度為TOC葡萄糖∶TOCPAHs＝2∶1。Zhang等［29］研究了有機(jī)廢棄物污泥和牛糞對紫花苜蓿-微生物去除土壤中PAHs的影響，發(fā)現(xiàn)加入污泥和牛糞可有效增加紫花苜蓿-微生物對土壤中PAHs的去除。鄒德勛等［30］以急性毒性較強(qiáng)的菲和遺傳毒性較強(qiáng)的苯并［a］芘為代表性PAHs污染物研究了PAHs長期污染土壤的微生物強(qiáng)化修復(fù)，結(jié)果表明，添加碳源（淀粉和葡萄糖）提高了土壤PAHs的降解率。王蕾等［31］研究也表明外源添加碳源——鄰苯二甲酸和葡萄糖對芘的降解效率有不同程度的提高。添加的碳源一方面改善了土壤微生物的營養(yǎng)條件，另一方面可以作為PAHs共代謝底物，因此對微生物降解PAHs有促進(jìn)作用。碳源與目標(biāo)污染物之間需要保持適當(dāng)?shù)臐舛缺壤?，否則高濃度的碳源會存在競爭而對PAHs的降解產(chǎn)生抑制。

4 結(jié)論

1） 40℃的泥漿體系中，利用兩種優(yōu)勢微生物的混合接菌方式可有效改善PAHs的去除效果，顯著縮短菲和芘的半衰期。隨著反應(yīng)進(jìn)程進(jìn)行，菲和芘的去除率逐漸提高，而去除速率逐步降低，其中菲的去除較芘相對更快。確定該體系運(yùn)行時(shí)間為18 天，既可以充分修復(fù)菲和芘污染土壤，又可以節(jié)約處理成本。

2） 水土比對泥漿體系中PAHs的去除效果有影響，反應(yīng)初期2∶1的水土比對體系中菲和芘的去除率均較高，而在試驗(yàn)進(jìn)行至12天，不同水土比的泥漿體系中混合微生物菌群對菲和芘的去除效果差異不顯著，因此，確定該反應(yīng)體系最適宜的水土比為2∶1。

3） 在泥漿體系中添加一定量的不同碳源，對菲的去除率均有不同程度的提高，而對芘的去除率既有促進(jìn)也有抑制，其中對菲和芘的去除率提高最有效的碳源是葡萄糖，濃度為TOC葡萄糖∶TOCPAHs＝2∶1。

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Removal of Phenanthrene and Pyrene from Soil Slurry by Mixed Microbes and Its Influencing Factors

LIU Yifan， ZONG Lianggang*， SHI Yanfu， SUN Mingming， DU Xiafei
（College of Resources and Environmental Sciences， Nanjing Agricultural University， Nanjing 210095， China）

Phenanthrene and pyrene were used as representative polycyclic aromatic hydrocarbons （PAHs） to investigate their removal efficiencies from soil slurry by mixed microbes of thermophilic bacteria and PAHs degrading bacteria and their influencing factors of soil/water ratio， and the concentrations of glucose， starch and salicylic acid with indoor simulated experiments. The experiments were conducted at 40℃. At this temperature， the two kinds of microbes grow and reproduce quickly. The results showed that the removal rates of the two PAHs from soil slurry by the mixed microbes were significantly greater than those in control （P＜0.01）. The maximum removal rates of phenanthrene in a single day was 20%， and that of pyrene was 15.3%. With the progress of the reaction， the removal rates of phenanthrene and pyrener increased significantly， but the removal reaction rate gradually decreased. The half-life of phenanthrene was 1.8 d， and less than 4.9 d of pyrene. Therefore， the removal of phenanthrene was faster than that of pyrene. The most appropriate water/soil ratio for the removal of the PAHs by the mixed microbes in soil slurry was 2∶1， and the carbon source was glucose with TOCglucose/TOCPAHsratio of 2∶1. The results presented in this study can provide theoretical basis and technical support for remediation of PAHs contaminated soil by mixed microbes.

PAHs； Soil slurry； Mixed microbes； Soil water ratio； Glucose

X53

10.13758/j.cnki.tr.2016.05.018

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（41401345）資助。

*通訊作者（zonglg@njau.edu.cn）

劉一凡（1991—），女，河北衡水人，碩士研究生，主要研究方向?yàn)槲廴就寥郎镄迯?fù)。E-mail： 2013103043@njau.edu.cn