唐富山，張曉慧，蘭 雪，孟 翠，王玉和（.遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院臨床藥學(xué)教研室，貴州遵義 563003；2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，貴州遵義 563003）

不同廠家小柴胡湯丸的溶出度研究Δ

唐富山1＊，張曉慧1，蘭 雪1，孟 翠1，王玉和2#（1.遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院臨床藥學(xué)教研室，貴州遵義 563003；2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，貴州遵義 563003）

目的：建立小柴胡湯丸溶出度的測定方法，并比較不同廠家制劑的差異。方法：以0.1 mol/L鹽酸為溶出介質(zhì)，采用轉(zhuǎn)籃法測定制劑的溶出度；采用高效液相色譜法測定制劑中黃芩苷的含量：色譜柱為TSKgel ODS C18，流動相為甲醇-水-磷酸（65∶35∶0.7，V/V/V），流速為1 ml/min，檢測波長為280 nm，柱溫為30℃，進樣量為5μl。結(jié)果：黃芩苷檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.488～124.8 mg/L（r=0.999 9）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗的RSD＜2.0%；加樣回收率試驗為100.14%～104.78%（RSD=1.58%，n=9）。小柴胡湯丸中黃芩苷50%溶出時間（t50）平均值為85.81 min。結(jié)論：該方法操作簡便，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性較好，可用于小柴胡湯丸溶出度的測定。不同廠家小柴胡湯丸溶出差異較大，制劑制備和臨床用藥中均需重視固體制劑的溶出狀況。

小柴胡湯丸；黃芩苷；溶出度

小柴胡湯始載于《傷寒雜病論》中，常為治療少陽病的主方［1-2］。現(xiàn)代藥理研究表明，小柴胡湯對細(xì)胞免疫有一定的調(diào)節(jié)機制，具有解熱、保肝、抗病毒等作用［3］。在現(xiàn)有的文獻(xiàn)報道中，對小柴胡湯［4-5］和顆粒［6-7］中黃芩苷等成分的分析研究較多，但只有少數(shù)學(xué)者對小柴胡湯丸中黃芩苷的含量進行研究［8］，而小柴胡湯丸的體外溶出度研究和不同產(chǎn)家制劑間溶出度的比較尚未見文獻(xiàn)報道。

溶出度系指藥物從片劑、膠囊或顆粒等固體制劑在規(guī)定條件下溶出的速率和程度［9］。目前，溶出度測定已被作為評價制劑質(zhì)量、生產(chǎn)工藝及生物利用度的參考依據(jù)。對市售小柴胡湯固體劑型的溶出度進行測定不僅可以反映其在體內(nèi)的吸收和藥效情況，還可以為不同廠家相同劑型之間或不同劑型之間的體內(nèi)生物利用度評價提供參考。

2015年版《中國藥典》（一部）規(guī)定，小柴胡片、小柴胡泡騰片、小柴胡膠囊和小柴胡顆粒均以黃芩苷含量為質(zhì)控指標(biāo)［10］，而對湯丸尚無含量測定的質(zhì)量控制項目。本試驗擬對市售不同廠家間小柴胡湯丸的體外溶出度進行研究，用Excel程序分析比較溶出參數(shù)，即50%溶出時間（t50）、63.2%溶出時間（td）、斜率或形狀參數(shù)（m）［11-13］，以期為小柴胡湯丸的質(zhì)量控制和內(nèi)在質(zhì)量評價提供一定借鑒，并可為小柴胡湯固體制劑臨床合理使用及基礎(chǔ)研究提供一定參考。

1 材料

1.1 儀器

1260型高效液相色譜（HPLC）儀，包括G1329B進樣器、G1311C四元泵、G1315C二極管陣列檢測器（美國Agilent公司）；ERS-8GD型智能溶出儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；FA2004N型電子分析天平（上海菁海儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

小柴胡湯丸（蘭州太寶制藥有限公司，批號：61150304；蘭州佛慈制藥股份有限公司，批號：12M18；甘肅天水岐黃藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：140506；甘肅省眾友藥業(yè)制藥有限責(zé)任公司，批號：142701；河南省宛西制藥有限公司，批號：150101，規(guī)格均為每8丸相當(dāng)于原藥材3 g）；黃芩苷對照品（貴州迪大生物科技有限責(zé)任公司，批號：GZDD-0037，純度：98.17%）；甲醇、鹽酸為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：TSKgel ODS C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇-水-磷酸（65∶35∶0.7，V/V/V），流速：1 ml/min；檢測波長：280 nm；柱溫：30℃；進樣量：5μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取黃芩苷對照品12 mg，置于10 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，用0.22μm微孔濾膜濾過，取中段濾液，即得。

2.2.2 供試品溶液 取本品2粒溶解于500 ml 0.1 mol/L鹽酸中，用0.22μm微孔濾膜濾過，取中段濾液，即得。

2.3 專屬性試驗

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。在黃芩苷對照品色譜峰相應(yīng)的位置上，供試品色譜圖中顯示相同保留時間的色譜峰，色譜峰形狀幾乎一致；理論板數(shù)按黃芩苷峰計約為4 000。結(jié)果表明，供試品溶液中其他成分不干擾黃芩苷測定，方法專屬性良好。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；1.黃芩苷Fig 1 HPLC chromatograms A.reference substance；B.test sample；1.baicalin

2.4 線性關(guān)系考察

分別量取“2.2.1”項下對照品溶液適量，分別置于10 ml量瓶中，加流動相定容，制成質(zhì)量濃度分別為0.488、0.975、1.95、31.2、62.4、124.8 mg/L的系列對照品溶液。精密量取上述系列對照品溶液各10 μl，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以黃芩苷質(zhì)量濃度（x，mg/L）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得黃芩苷回歸方程為y=13 593x－23.922（r=0.999 9）。結(jié)果表明，黃芩苷檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.488～124.8 mg/L。

2.5 精密度試驗

②說到“互補”，我們可以借鑒與功能語言學(xué)同屬功能主義陣營的認(rèn)知語言學(xué)的研究（比如叢迎旭，王紅陽2013；楊波 2013；劉婷婷，張奕2014等），不妨將語法隱喻視為在共同的語義基礎(chǔ)（即相同的待識解和表征的世界圖景或經(jīng)驗）上從一致式向隱喻式的轉(zhuǎn)化過程，該過程的實質(zhì)是認(rèn)知識解方式的轉(zhuǎn)變和認(rèn)知域（這里的認(rèn)知域應(yīng)是及物系統(tǒng)的不同過程類、級階和性狀）之間的跨越或者映射。

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，黃芩苷峰面積的RSD= 0.65%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：140506）適量，分別于室溫下放置0、1、3、5、7、12、24 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，黃芩苷峰面積的RSD=1.98%（n=7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

精密稱取同一批樣品（批號：140506）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，黃芩苷峰面積的RSD=0.80%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量樣品（批號：140506）適量，共6份，每份1.0 g，分別加入低、中、高質(zhì)量的黃芩苷對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=9）Tab 1 Results of recovery test（n=9）

2.9.1 溶出介質(zhì)的制備 精密量取8.6 ml鹽酸，用已燒至沸騰并冷卻后的蒸餾水定容至1 000 ml，搖勻，即得濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液。

2.9.2 小柴胡湯丸的溶出度測定 取本品12粒，每2丸精密稱定質(zhì)量后分別置于智能溶出儀的6個轉(zhuǎn)籃內(nèi)，按2015年版《中國藥典》（四部）溶出度測定法（轉(zhuǎn)籃法）［9］項下操作。以500 ml 0.1 mol/L鹽酸為溶出介質(zhì)，溫度為（37.0±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為100 r/min。分別于20、40、60、90、120、150 min時用注射器抽出3 ml溶出液，并補充等量的溶出介質(zhì)，若150 min內(nèi)本品未溶解完全，延長取樣時間，直至溶解完全。

2.9.3 樣品溶出度計算 將不同時刻抽取的溶出液用0.22 μm的微孔濾膜濾過后，進樣檢測。以不同時間黃芩苷溶出量除以溶出樣品中黃芩苷含量得該時刻小柴胡湯丸中黃芩苷的累積溶出度。將溶出液的取樣時間（t）和溶出度F（t）（用小數(shù)表示）分別置于Excel表格中，分別用公式求出ln（t），ln［1/1-F（t）］，lnln［1/1-F（t）］，以lnln［1/1-F（t）］對ln（t）進行correl、slope、intercept函數(shù)計算，分別求出相關(guān)系數(shù)、m、截距，得出線性方程；反對數(shù)計算出不同廠家制劑相應(yīng)t50、td。結(jié)果表明，樣品t50平均為85.81 min，不同產(chǎn)家生產(chǎn)的小柴胡湯丸中黃芩苷的溶出時間差異明顯，詳見表2。

表2 樣品中黃芩苷溶出度檢測結(jié)果（±s，n=6）Tab 2 Results of dissolution detection of baicalin in samples（±s，n=6）

表2 樣品中黃芩苷溶出度檢測結(jié)果（±s，n=6）Tab 2 Results of dissolution detection of baicalin in samples（±s，n=6）

樣品批號61150304 12M18 140506 142701 150101 t50，min 35.28±13.53 65.24±7.99 197.51±30.21 102.65±60.94 28.37±23.38 td，min 50.26±12.62 97.43±30.41 291.42±53.47 154.17±106.54 38.66±32.66 m 1.47±0.80 1.42±0.55 0.97±0.13 1.05±0.29 1.41±0.84

3 討論

溶出過程可以反映藥物的體內(nèi)吸收狀況，由于劑型不同，藥物在體內(nèi)的吸收速度與程度也會存在差異。一般情況下，藥物的溶出越快，其在人體的吸收速度也相對較快，體內(nèi)的起效時間也相對較快；相同的溶出時間，藥物的溶出量越大，其作用強度也相對較大。因此，溶出度研究可為相同藥物的不同產(chǎn)品之間的臨床生物等效性評價提供參考［14］。

丸劑是粉體濃縮成丸后的劑型，口服后在胃腸道內(nèi)要經(jīng)歷崩解-溶解-吸收的過程，其中崩解過程與制劑過程加入的輔料類型和生產(chǎn)工藝有很大的關(guān)系，因而丸劑中藥效成分溶出相對其他固體劑型較慢。不同廠家生產(chǎn)的小柴胡湯丸中黃芩苷的溶出情況差異較大，這可能與處方、制備工藝差異有關(guān)。在藥物制備成型過程中，應(yīng)充分考慮賦形劑與主藥的關(guān)系，優(yōu)化處方設(shè)計及制備工藝，保證藥物效應(yīng)成分在人體中得到最大限度的吸收和利用［15-17］。源自不同廠家的相同藥品，藥物吸收并作用于機體的時間可能各異，因而其作用可能出現(xiàn)差異。臨床用藥中，若給患者更換不同產(chǎn)家的藥品時，應(yīng)注意藥物效應(yīng)和不良反應(yīng)的變化，防止療效的強烈波動或不良反應(yīng)發(fā)生率的增加。

本試驗參照2015年版《中國藥典》（一部）中小柴胡湯相關(guān)制劑含量測定方法［10］，以及黃芩苷含量測定的相關(guān)文獻(xiàn)［4，6，8］，對測定黃芩苷的色譜條件進行了改進，所建立的分析方法具有出峰時間較短的特點，測定簡便易行，不僅可用于小柴胡湯丸及類似制劑的溶出度研究，對其含量測定也是有益的參考。

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Study on the Dissolution of Xiaocaihu Pill from Different Manufacturers

TANG Fushan1，ZHANG Xiaohui1，LAN Xue1，MENG Cui1，WANG Yuhe（21.Dept.of Clinical Pharmacy，School of Pharmacy，Zunyi Medical University，Guizhou Zunyi 563003，China；2.Dept.of Pharmacy，the Affiliated Hospital of Zunyi Medical University，Guizhou Zunyi 563003，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the determination of dissolution of Xiaocaihu pill，and compare the difference of preparation from different manufacturers.METHODS：Using 0.1 mol/L HCl as dissolution medium，rotating basket method was used to determine the dissolution of preparations.HPLC was adopted to determine the content of baicalin：column was TSKgel ODS C18with mobile phase of methanol-water-phosphoric acid（65∶35∶0.7，V/V/V）at a flow rate of 1 ml/min，detection wavelength was 280 nm，column temperature was 30℃，and injection volume was 5 μl.RESULTS：The linear range of baicalin was 0.488-124.8 mg/L（r=0.999 9）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2.0%；recovery was 100.14%-104.78%（RSD=1.58%，n=9）.The average t50（50%dissolution time）of baicalin was 85.81 min.CONCLUSIONS：The method is simple with good precision，stability and reproducibility，and can be used for the dissolution determination of Xiaocaihu pill.Xiaocaihu pill from different manufacturers shows great differences，both preparation formulation and clinical use should attach importance to the dissolution of solid preparations.

Xiaochaihu pill；Baicalin；Dissolution

R945

A

1001-0408（2016）30-4272-03

2016-07-01

2016-08-11）

（編輯：張 靜）

貴州省科學(xué)技術(shù)基金項目（No.黔科合J字〔2013〕2323號）；貴州省科技合作專項資金項目（No.省市科合〔2015〕53號）；遵義醫(yī)學(xué)院臨床藥學(xué)新興扶持學(xué)科

＊副教授，碩士生導(dǎo)師，博士。研究方向：臨床藥學(xué)與藥劑學(xué)。電話：0851-28642337。E-mail：fushantang@qq.com

#通信作者：主任藥師，教授，碩士生導(dǎo)師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)、臨床藥學(xué)和藥物經(jīng)濟學(xué)。E-mail：wangyuhe11@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.30.31