朱娟娟，胡志軍，沈國棟，周東升，汪亞勤，唐吉斌

HER2 ECD和CA15-3聯(lián)合檢測對乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值

朱娟娟1，胡志軍1，沈國棟2，周東升1，汪亞勤1，唐吉斌1

選取86例乳腺癌術(shù)后病例（復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移34例，未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移52例），ELISA法檢測血清HER2胞外段（HER2 ECD）濃度，化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測糖類抗原15-3（CA15-3）濃度。復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組患者血清中HER2 ECD與CA15-3濃度顯著高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，二者聯(lián)合檢測可提高對乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移診斷的靈敏度和特異度，血中HER2 ECD的陽性率與患者組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及組織HER2狀態(tài)相關(guān)，CA15-3陽性率與組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

HER2 ECD；乳腺癌；復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移；CA15-3；聯(lián)合檢測

HER2屬于受體酪氨酸激酶中的生長因子受體家族，其過表達(dá)對乳腺癌是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因子，提示預(yù)后差，容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，目前主要通過免疫組織化學(xué)法（immunohistochemistry，IHC）和熒光原位雜交法（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）對組織進(jìn)行檢測。近年來研究［1］表明，HER2胞外段即HER2 ECD可以從細(xì)胞表面切割進(jìn)入血中循環(huán)，可導(dǎo)致與細(xì)胞膜關(guān)聯(lián)的胞內(nèi)區(qū)（p95蛋白）持續(xù)活化和下游MAPK及PI3K通路的增強(qiáng)，使細(xì)胞增殖失控更具侵襲性。加上其采集方便、可進(jìn)行準(zhǔn)確的定量檢測等優(yōu)勢，外周血中HER2 ECD檢測越來越得到人們的重視，有望成為IHC和FISH等檢測的有效補(bǔ)充手段［2］。糖類抗原15-3（carbohydrate antigen 15-3，CA15-3）是目前最常用的判斷乳腺癌預(yù)后及復(fù)發(fā)的獨(dú)立性因子。該研究通過檢測外周血血清中HER2 ECD與CA15-3在乳腺癌不同發(fā)展階段的濃度水平來探討其診斷價(jià)值，以期為臨床工作提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例資料 研究對象為2013年1月～2014年7月在銅陵市人民醫(yī)院術(shù)后進(jìn)行放化療治療的病歷資料完整的86例乳腺癌患者，女85例，男1例；年齡31～67歲，中位年齡51歲；浸潤性導(dǎo)管癌82例，大汗腺樣癌、導(dǎo)管原位癌、浸潤性小葉癌、黏液癌各1例。86例患者中34例發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，52例未發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。

1.2 標(biāo)本采集 住院患者早晨空腹采集靜脈血3 ml，靜置20 min，3 000 r/min離心10 min，取血清至于潔凈EP管中，于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測方法 HER2 ECD采用 ELISA法檢測，試劑盒由美國eBioscience公司提供，所有操作按說明書和實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后于450 nm波長依序測量各孔的吸光度（optical density，OD）值，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度和OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算樣本的濃度。CA15-3檢測采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（ARCHITECT i2000）和配套試劑進(jìn)行檢測，HER2 ECD以2003年美國FDA規(guī)定的15 g/L為臨界值，CA15-3以銅陵市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科采用的31.3 U/L為臨界值，高于臨界值即為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，組間資料比較采用 χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料比較用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman檢驗(yàn)，采用受試者工作特征曲線（ROC曲線）對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析與評價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組和未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組HER2 ECD及CA15-3濃度的比較 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組中的HER2 ECD及CA15-3的濃度均顯著高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2 相關(guān)性分析 乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組中HER2 ECD與CA15-3的濃度呈正相關(guān)性（rs=0.681，P＜0.05）。

2.3 HER2 ECD、CA15-3對乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值 應(yīng)用ROC曲線分析實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)（圖1）。HER2 ECD和CA15-3的曲線下面積（AUC）分別為0.850和0.900，對乳腺癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有中等診斷價(jià)值。以15 g/L為臨界值時(shí)，HER2 ECD對乳腺癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)診斷的靈敏度為 58.8%，特異度為98.1%，符合率為82.6%。以31.3 U/L為臨界值時(shí)，CA15-3的靈敏度為73.5%，特異度為98.1%，符合率為96.2%。將二者聯(lián)合分析，結(jié)果顯示并聯(lián)檢測對乳腺癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的靈敏度為94.1%，特異度為96.2%，符合率為83.7%，串聯(lián)檢測對乳腺癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的靈敏度為38.2%，特異度為100.0%，符合率為77.6%。見表2。

2.4 乳腺癌患者血清中HER2 ECD、CA15-3陽性率與患者臨床特征關(guān)系 HER2 ECD和CA15-3的陽性率在不同年齡人群中分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在不同組織學(xué)分級以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)患者中HER2 ECD和CA15-3的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）：Ⅲ級的陽性率要明顯高于Ⅰ級和Ⅱ級，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽性率也明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。除此之外，組織HER2陽性患者的HER2 ECD陽性率明顯高于組織HER2陰性的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而CA15-3的陽性率在組織HER2陽性組和陰性組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

圖1 HER2 ECD和CA15-3的ROC曲線

表1 乳腺癌患者血清中HER2 ECD和CA15-3水平比較［M（P25，P75）］

表2 HER2 ECD和CA15-3對乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值（%）

表3 乳腺癌患者HER2 ECD、CA15-3表達(dá)情況與患者臨床特征關(guān)系［n（%）］

3 討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，目前的治療方法主要以手術(shù)為主，而術(shù)后監(jiān)測有無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移對降低死亡率至關(guān)重要。外周血中腫瘤指標(biāo)檢測憑著取材方便、可進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測的優(yōu)點(diǎn)已在臨床上廣泛應(yīng)用。

CA15-3是目前公認(rèn)的用于監(jiān)測乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的糖類抗原［3］，HER2 ECD作為組織HER2蛋白的切割產(chǎn)物不僅反映乳腺癌的腫瘤負(fù)荷，還反映腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)活性，已有研究［4-5］顯示升高的HER2 ECD不僅可提示腫瘤的預(yù)后復(fù)發(fā)，還有助于腫瘤的療效判斷［6-7］，本研究結(jié)果表明HER2 ECD 和CA15-3在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組中的濃度明顯高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，并且二者的濃度在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組中呈正相關(guān)性，提示這兩種因子聯(lián)合檢測有利于對乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷。研究還用了ROC曲線分析兩種因子對乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值，顯示HER2 ECD和CA15-3的AUC分別為0.850和0.900，具有中等診斷價(jià)值。本研究并未采用尤登指數(shù)（靈敏度+特異度-1）最大時(shí)的臨界值，而是采取在臨床接受程度更為廣泛的15 g/L和31.3 U/L作為HER2 ECD和CA15-3的臨界值，結(jié)果顯示單獨(dú)分析時(shí)HER2 ECD的靈敏度稍高于CA15-3，二者特異度相同，與文獻(xiàn)［5］報(bào)道略有偏差，可能與樣本數(shù)量以及是否限定組織HER2狀態(tài)等因素有關(guān)。但是二者并聯(lián)檢測時(shí)可提高診斷的靈敏度，串聯(lián)檢測時(shí)可提高診斷的特異度，符合文獻(xiàn)［8-9］報(bào)道。

本研究還顯示HER2 ECD的陽性率與年齡無關(guān)，與組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與文獻(xiàn)［10-11］報(bào)道一致。HER2 ECD水平與組織HER2表達(dá)之間的相關(guān)性尚存有爭議［12-13］，其原因可能與樣本來源、數(shù)量以及閾值界定不同有關(guān)［14］，本研究的對象是乳腺癌術(shù)后患者，排除了腫瘤負(fù)荷的影響，但仍可看出HER2 ECD的陽性率在組織HER2陽性組中明顯高于HER2陰性組，提示HER2 ECD水平的升高對判斷組織HER2陽性的患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有重要的臨床意義［2］，本研究中有2例組織HER2陰性的患者血中HER2 ECD為陽性，可能與技術(shù)誤差及腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)轉(zhuǎn)變有關(guān)。CA15-3在臨床已得到廣泛應(yīng)用，其水平變化與其局部淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況之間存在一致性，尤其是有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶者，本研究顯示CA15-3的陽性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)和組織學(xué)分級相關(guān)，而與年齡、組織HER2狀態(tài)無關(guān)。

綜上所述，HER2 ECD、CA15-3與乳腺癌的病程進(jìn)展相關(guān)，其檢測具有連續(xù)性、實(shí)時(shí)性和方便性的優(yōu)點(diǎn)，可對腫瘤進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測，二者聯(lián)合檢測可為乳腺癌的臨床診斷和治療提供思路和理論指導(dǎo)。

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1000-1492（2016）09-1378-04

時(shí)間：2016-8-1 14：07

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2016-04-14接收

安徽省銅陵市衛(wèi)生局科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：衛(wèi)科研［2012］05）；安徽省科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：1301042094）

1安徽醫(yī)科大學(xué)銅陵臨床學(xué)院、銅陵市人民醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，銅陵 2440022安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)科，合肥 230001

朱娟娟，女，主管檢驗(yàn)師；唐吉斌，男，副教授，副主任檢驗(yàn)師，責(zé)任作者，E-mail：13705628207@163.com