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        紅花黃色素對胃癌小鼠CD44、EGFR、nm23表達的影響

        2016-11-11 05:27:30張洲一
        光明中醫(yī) 2016年20期
        關(guān)鍵詞:胃癌小鼠劑量

        陳 晨 張洲一 康 寧

        ?

        【實驗研究】

        紅花黃色素對胃癌小鼠CD44、EGFR、nm23表達的影響

        陳晨張洲一△康寧

        目的探討紅花黃色素對胃癌小鼠CD44、EGFR、nm23表達的影響,觀察該藥物對胃癌轉(zhuǎn)移過程中三者表達變化,分析其抗癌作用的可能機制。方法50只615小鼠隨機分成5組即模型對照組、高紅花黃色素、中紅花黃色素、低紅花黃色素組、希羅達組,觀察各組CD44、EGFR、nm23的表達情況。結(jié)果紅花黃色素能夠抑制小鼠胃轉(zhuǎn)移瘤的形成與轉(zhuǎn)移,并抑制腫瘤組織中CD44、EGFR的表達,同時能夠降低小鼠血清CD44、EGFR上調(diào)nm23的表達水平。結(jié)論紅花黃色素對胃癌的發(fā)展及轉(zhuǎn)移有一定的抑制作用,其分子機制可能是通過調(diào)節(jié)以上研究因子而實現(xiàn)。

        紅花黃色素;胃癌;CD44;EGFR;nm23

        紅花黃色素(safflor yellow,SY)為菊科植物紅花的主要功能成分,歸屬于查爾酮類,是羥基紅花黃色素A經(jīng)過分離提純手段得到的藥物。其具有抑制血小板聚集、抗氧自由基、抗氧化、抑制腫瘤生長、激活免疫細胞、改善機體免疫功能,并且對免疫器官和固有免疫功能都有積極的促進作用[1]。

        胃癌是嚴重危害人類健康最常見的惡性腫瘤之一,在全世界惡性腫瘤發(fā)病率中,胃癌列居第4位,而死亡率排至第2位[2],即使采用了各種檢查手段以及不斷改進外科手術(shù)技巧和化療方案,胃癌的五年存活率仍然只有20%~30%[3]。因此,不少學者一直致力于從中藥角度治療癌癥尋找突破口,達到控制腫瘤轉(zhuǎn)移和遷徙,延長患者生命的效果。

        1 材料與方法

        1.1實驗動物及分組清潔級近交系6~7周615小鼠50只,雌雄各半,體質(zhì)量(20±2)g,由牡丹江醫(yī)學院實驗動物飼養(yǎng)中心提供。實驗分為5組,每組10只,即模型對照組、高紅花黃色素、中紅花黃色素、低紅花黃色素組、希羅達組。

        1.2紅花黃色素藥品批號(TYRG-2015)、希羅達由哈爾濱海霞試劑公司購進(產(chǎn)地:山西華輝凱德制藥)。

        1.3CD44、EGFR、nm23測定試劑盒西安瑞安試劑有限公司。

        1.4主要儀器電子天平;電熱恒溫水浴鍋(成都臺盟儀器廠);微量移液器(上海優(yōu)博器械廠);MNT5-WS型臺式低速離心機;全自動酶標儀-ER-7078A酶標儀;CRFTYHG214型石蠟切片機(湖北徠克醫(yī)療儀器有限公司);231-C型麥克奧迪顯微鏡攝像裝置(北京遠大醫(yī)療器械有限公司);BI-2000醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)(成都太盟軟件有限公司)。

        1.5造模及給藥方法①小鼠前胃癌MFC細胞移植并獲得經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移的胃轉(zhuǎn)移腫瘤模型[4]。②模擬臨床上在進展期手術(shù)切除小鼠的原發(fā)腫瘤。③通過灌胃方法給藥干預治療,分別為紅花黃色素高劑量組(100 g/kg)、紅花黃色素中劑量組(50 g/kg)、紅花黃色素低劑量組(25 g/kg)、希羅達組(0.2 g/kg)、模型組(0.9%氯化鈉溶液30mL/kg);各組給予常規(guī)飼養(yǎng),連續(xù)給藥3周,給藥結(jié)束后,眼內(nèi)眥靜脈取血,頸椎脫臼處死小鼠并取相關(guān)瘤組織置于液氮中保存。

        1.6檢測方法采用免疫組化檢測方法檢測癌組織中CD44、EGFR、nm23表達情況(平均光密度值= IOD sum/area);ELISA法檢測小鼠外周血三者含量變化;計算肺轉(zhuǎn)移抑制率及復發(fā)瘤抑制率[5]。

        2 結(jié)果

        2.1各組小鼠胃癌組織中CD44、EGFR、nm23蛋白表達情況比較SY高、SY中、SY低劑量組、希羅達組中胃癌組織CD44、EGFR與模型對照組比較明顯下調(diào),nm23表達明顯升高。見表1。

        2.2各組小鼠前胃癌術(shù)后局部復發(fā)及肺轉(zhuǎn)移情況相比較SY高、SY中、SY低劑量組、希羅達組局部復發(fā)率、肺轉(zhuǎn)移率與模型對照組比較明顯下降,且復發(fā)瘤的瘤重較小。見表2。

        2.3各組小鼠外周血血清中CD44、EGFR、nm23含量變化情況比較SY高、SY中、SY低劑量組、希羅達組小鼠血清中CD44、EGFR含量與模型對照組比較明顯降低,nm23含量明顯升高。見表3。

        組別樣本數(shù)CD44EGFRnm23模型對照組100.1124±0.01710.1012±0.01410.0132±0.0081SY低劑量組100.0612±0.00921)0.0542±0.00831)0.0257±0.00411)SY中劑量組100.0412±0.00781)2)0.0313±0.00461)2)0.0387±0.00591)2)SY高劑量組100.0421±0.00691)2)0.0389±0.00991)2)0.0372±0.00421)2)希羅達組100.0349±0.00641)3)0.0299±0.00871)0.0442±0.00311)

        注: 與模型對照組比較1)P<0.01;與SY低劑量組比較1)P<0.05;與SY中劑量組比較1)P<0.05

        表2 各組小鼠前胃癌術(shù)后局部復發(fā)及肺轉(zhuǎn)移情況相比較?! 纒)

        注:與模型對照組比較1)P<0.05;與模型對照組比較2)P<0.01

        組別樣本數(shù)CD44(ug/ml)EGFR(ug/ml)nm23(ug/ml)模型對照組1027.72±2.1512.12±1.138.64±0.83SY低劑量組1018.78±1.671)8.43±1.031)5.11±0.521)SY中劑量組1014.54±1.451)2)6.11±0.671)2)3.19±0.331)2)SY高劑量組1017.57±1.531)8.21±0.881)5.43±0.581)希羅達組1012.69±1.231)2)3)4.77±0.511)2)3)1.72±0.181)2)3)

        注:與模型對照組比較1)P<0.01;與SY低劑量組比較2)P<0.01;與SY中劑量組比較3)P<0.05

        3 討論

        中國人胃癌死亡率占惡性腫瘤比例很大,其原因和大部分惡性腫瘤死亡原因都不盡相同,即為腫瘤轉(zhuǎn)移和遷徙。CD44作為一種黏附分子主要存在于細胞外基質(zhì)中,與機體大多的生理過程和病理過程關(guān)系密切,包括白細胞的趨化和激活、組織損傷及修復、腫瘤細胞遷移和轉(zhuǎn)移。大量的研究資料表明[6]CD44參與和影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程,其結(jié)構(gòu)和功能出現(xiàn)變化時,影響腫瘤的轉(zhuǎn)移播散、凋亡、新生血管的形成。EGFR即為表皮生長因子受體,作為 ErbB 家族成員其具有酪氨酸蛋白激酶活性,在正常組織的生理過程中,起到調(diào)控細胞的生長、發(fā)育、趨化、衰老分裂、分化等作用,如果受到外界因素刺激或者基因結(jié)構(gòu)發(fā)生改變就會異常表達,進而促進癌細胞增殖、黏附、轉(zhuǎn)移等;并且有很強的誘導腫瘤新生血管形成的生物學作用[7]。nm23作為研究較多的抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的基因,存在于細胞和細胞之間以及細胞和基質(zhì)之間的黏附結(jié)構(gòu),對于不同組織之間的細胞正常結(jié)構(gòu)保持和與發(fā)展有關(guān)的遷移,起著十分重要作用。

        由實驗結(jié)果可得,紅花黃色素能夠抑制小鼠肺轉(zhuǎn)移瘤的形成與轉(zhuǎn)移,并抑制小鼠胃癌組織中CD44、EGFR的表達,促進nm23的表達;同時能夠降低小鼠血清CD44、EGFR含量,并能提高nm23血清含量水平。希望通過本研究能夠進一步論證紅花黃色素的抗癌機制,為解除廣大患者的病痛開發(fā)出新型無毒副作用的抗癌藥物。

        [1]Takahashi Y,Miyassaka N,Tasaka SH,et al.Constitution of two coloting matters in the flower petals of carthamus tinctorius L[J].Tetrahedron Letters,1982,23(49):5163-5166.

        [2]Kim D K, Oh S Y, Kwon H C, et al. Clinical significances of preoperative serum interleukin-6 and C-reactive protein level in operable gastric cancer[J]. Bmc Cancer, 2009, 9(1):1-9.

        [3]Jemal A, Bray F, Center M M, et al. Global cancer stat[J]. Ca A Cancer Journal for Clinicians, 2011, 61(2):69-90.

        [4]Wu J,Liu Y Q,Dong J H,et al.Effects of Jianpi Yishen Recipe on recurrence, metastasis and life span of mice transplanted with proventriculus squamous carcinoma after tumorectomy[J].Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao,2006,4(5):495-9

        [5]柴可群, 薛騫, 何徐軍,等. 益胃飲對小鼠移植性前胃癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移及MMP-9、BCL-2、VEGF的影響[J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2012,27(9):2444-2448.

        [7]Ariel L C, Carter C A, Giuseppe G. The role of KRAS mutations in resistance to EGFR inhibition in the treatment of cancer[J]. Current Opinion in Investigational Drugs, 2009, 10(12):1305-1314.

        黑龍江省牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院普外一科(牡丹江 157011)

        10.3969/j.issn.1003-8914.2016.20.019

        1003-8914(2016)-20-2949-03

        ?高臣

        2016-07-29)

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