羅潤波，王剛，云旦平措，益西旺扎，索朗斯珠

（西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，西藏林芝860000）

西藏林芝地區(qū)豬瘟流行的抗原及免疫抗體檢測

羅潤波，王剛，云旦平措，益西旺扎，索朗斯珠

（西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，西藏林芝860000）

豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）感染引起的豬的急性、熱性、高度致死性傳染病，是嚴重影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類16種傳染病之一，我國亦將其列為一類傳染病，是發(fā)生最多、危害最大、流行最廣的動物傳染病之一。

按照農(nóng)業(yè)部國家動物疫病強制免疫計劃和省屬要求，豬瘟免疫抗體檢測采用正向間接血凝試驗（IHA）或者酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）2種方法［1-3］，其中，ELISA應(yīng)用最廣。針對我國目前豬瘟的流行現(xiàn)狀及特點做好免疫監(jiān)測，保持豬群處于較高的群體免疫水平，堅決淘汰CSFV隱性感染種豬，是豬場有效防控豬瘟的重要手段［4-7］。為了解林芝地區(qū)豬場豬群的豬瘟病毒感染情況和疫苗免疫狀況，筆者分別采用PCR技術(shù)和ELISA方法對豬場300頭份豬的組織樣品和800頭份血清樣品進行了豬瘟病毒和豬瘟抗體的檢測，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1試驗材料血清：隨機采集西藏林芝地區(qū)米林縣、墨脫縣、朗縣、察隅縣、工布江達縣5個縣的豬場和散養(yǎng)豬血清800頭份。

組織：隨機采集西藏林芝地區(qū)米林縣、墨脫縣、朗縣、察隅縣、工布江達縣5個縣的豬場和散養(yǎng)豬組織300頭份。

1.2試劑豬瘟病毒抗體（IgG）診斷試劑盒和豬瘟病毒抗原（CSFV-Ag）檢測試劑盒，購自深圳市綠詩源生物技術(shù)有限公司，批號：20140601。

1.3主要儀器隔水式恒溫培養(yǎng)箱，購自上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司，型號為為GNP-9050；酶標分析儀，購自深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司，型號為RT6100；高速離心機centrifuge5804由德國

Eppendorf生產(chǎn)；PCR儀my cycleTM、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)均由美國Bio-Rad生產(chǎn)；移液器由德國Eppendorf生產(chǎn)。均由西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院高原動物疫病檢測中心實驗室提供。

1.4方法

1.4.1ELISA法檢測豬瘟抗體對采集的全血樣本分離血清后，按照ELISA試劑盒診斷說明書中的方法規(guī)范操作。

1.4.2PCR法檢測豬瘟對采集的組織病料進行處理后，按照豬瘟病毒抗原（CSFV Ag）定量檢測試劑盒說明書的要求規(guī)范操作。

1.5判定標準

1.5.1ELISA法判定標準臨界值=0.4，在酶標儀上測各孔的OD值，試驗成立的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.7，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.1；樣品OD值≥0.4判斷為陽性；樣品OD值＜0.35時判斷為陰性；0.35到0.4之間為可疑。

1.5.2PCR法判定標準進行PCR檢測，電泳檢測結(jié)果在271 bp處出現(xiàn)條帶判斷為陽性，反之判斷為陰性。

2結(jié)果與分析

2.1豬瘟ELISA抗體檢測結(jié)果西藏林芝地區(qū)豬場和散養(yǎng)豬隨機采集的800份血清中CSF抗體陽性率達86%，其中米林縣陽性率為76%，墨脫縣陽性率為97%，朗縣陽性率88%，察隅縣陽性率為78%，工布江達縣為91%。結(jié)果表明，林芝地區(qū)5個縣抗體水平較高，免疫效果較好。

2.2豬瘟PCR檢測結(jié)果從林芝地區(qū)5個縣中隨機采集300份組織病料，按照說明書要求處理后進行豬瘟病毒PCR檢測，300份樣品中只有2份樣品在271 bp處出現(xiàn)條帶（見圖1）。

3討論

3.1本次試驗應(yīng)用ELISA法對西藏林芝地區(qū)米林、工布江達等5個縣的800頭份豬進行了豬瘟抗體檢測，結(jié)果顯示，林芝地區(qū)豬場和散養(yǎng)豬中CSFV血清抗體陽性率達86%，其中米林縣為76%，墨脫縣為97%，朗縣為88%，察隅縣為78%，工布江達縣為91%。說明豬群抗體水平較高，免疫效果好，免疫工作做得較好。

圖1豬瘟PCR電泳圖

3.2利用PCR技術(shù)對西藏林芝地區(qū)米林、工布江達等5個縣的300頭份豬進行了豬瘟病毒檢測，結(jié)果顯示，林芝地區(qū)豬場和散養(yǎng)豬中豬瘟抗原陽性率達0.7%，說明西藏林芝地區(qū)豬群中有少許豬瘟病例，存在暴發(fā)和擴散風(fēng)險，要引起高度重視，加強日常檢疫與預(yù)防工作十分必要。

3.3定期開展免疫監(jiān)測，評價豬瘟免疫效果，建立適合本場的免疫程序，抗體不合格及時補免。淘汰帶毒種豬，培育健康的無豬瘟帶毒豬的種豬和后備種豬群。

3.4堅持自繁自養(yǎng)、全進全出、減少應(yīng)激；加強飼養(yǎng)管理，改善生態(tài)環(huán)境，搞好綜合防疫，提高豬群的抵抗力。

［1］龐然，張小敏，周斌，等.4種商品化試劑盒檢測豬瘟病毒抗體的比較分析［J］.中國獸醫(yī)雜志，2011，47（9）：40-42.

［2］涂長春.我國豬瘟的流行原因與防制對策［J］.動物保健，2004（4）：20-21.

［3］楊艷芹，樊福好.豬健康性能監(jiān)測與檢測數(shù)據(jù)的分析利用［J］.今日養(yǎng)豬，2006（6）：12-14.

［4］丘惠深.凈化是有效控制我國豬瘟的重要手段［J］.豬業(yè)科學(xué)，2010（3）：119.

［5］寧宜寶，王琴，趙耘.豬瘟病毒持續(xù)感染與豬瘟預(yù)防控制［J］.中國獸藥雜志，2005（5）：31-35.

［6］胡杰，磨龍春，黃夏，等.豬瘟間接血凝抗體與豬瘟病毒感染的相關(guān)性分析［J］.中國動物檢驗，2008，25（8）：40-41.

［7］王治方，郭成留，張清華，等.某規(guī)模化豬場豬瘟普查報告［J］.養(yǎng)豬，2007（1）：56.

S858.28

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0529-6005（2016）08-0054-02

2015-05-26

西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院“動物醫(yī)學(xué)學(xué)科建設(shè)”項目、“預(yù)防獸醫(yī)重點建設(shè)”項目

羅潤波（1991-），男，碩士生，從事動物疫病防治方面的研究工作，E-mail：626652016@qq.com

索朗斯珠，E-mail：xzslsz@163.com