寧夏醫(yī)科大學臨床醫(yī)學院(銀川 750004)

鐘紅平 陳彥香▲ 劉世平△

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油酸致急性呼吸窘迫綜合征大鼠血清甲狀腺素的變化*

寧夏醫(yī)科大學臨床醫(yī)學院(銀川 750004)

鐘紅平陳彥香▲劉世平△

目的：探討油酸誘導的急性呼吸窘迫綜合征(RDS)大鼠血清甲狀腺素的變化規(guī)律。方法：SD大鼠50只,隨機分為4組,油酸組39只,再分為3 h、18 h和24 h組各13只,對照組11只不做任何處理。油酸組39只SD大鼠尾靜脈注射0.17 mg/kg油酸建立RDS大鼠模型,分別于注射后3 h、18 h、24 h檢測血清甲狀腺素水平。結果：油酸3 h組、18 h組中的FT4水平與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；油酸3 h組中T4與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；油酸18 h組中T4水平與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論：FT4、T4甲狀腺激素在RDS大鼠3 h、18 h有明顯下降趨勢，RDS與血清甲狀腺素水平有相關性。

新生兒呼吸窘迫綜合征(Neonatal respiratory distress syndrome,NRDS)是新生兒早期死亡的重要原因，本病由于早產(chǎn)兒肺結構不成熟、缺乏肺表面活性物質(PS)引起。研究證明[1-2]：I型肺泡細胞負責進行氣體交換，Ⅱ型肺泡細胞產(chǎn)生PS,降低肺表面張力,糖皮質激素及其同源受體可以促進Ⅱ型肺泡的成熟,協(xié)調PS的產(chǎn)生。Pei等[3]在小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)SMRT(甲狀腺受體中的蛋白)的突變從而導致I型肺泡細胞的早熟,出現(xiàn)一種新型的RDS,盡管對糖皮質激素反應不敏感，但是聯(lián)合應用抗甲狀腺激素類藥物完全可以減少SMRT引起的NRDS,表明甲狀腺激素受體(TR)在肺發(fā)育中有重要作用。本研究通過油酸所導致RDS大鼠,同時檢測不同時間段RDS大鼠的血清甲狀腺素水平,探討RDS大鼠血清甲狀腺素的變化規(guī)律,為早期給NRDS患兒甲狀腺素替代治療提供可能的理論依據(jù)。

材料和方法

1 材 料 健康雄性SD大鼠50只(購自西安交通大學實驗動物中心),平均體重193.53±8.79 g。油酸、大鼠固定器、微量進液器、手術剪刀、固釘木板、止血鉗、鑷子、紗布、一次性采血針、真空采血管、10%水合氯醛、玻璃分針。飼喂于延安大學醫(yī)學院動物房,自由飲食進水,適應喂養(yǎng)5 d。

2 方 法 ①動物分組及造模：將50只健康雄性SD大鼠按隨機數(shù)字法分為4組：正常對照組(11只)：體重220.47±11.64 g；實驗組SD大鼠注射0.17 mg/kg油酸,制造成RDS動物模型,分為注射油酸后3 h、18 h和24 h組各13只，3組平均體重分別為222.58±12.23 g,219.73±15.32 g,224.32±11.86 g。體重組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。②尾靜脈血采集方法：大鼠腹腔注射0.03 ml/kg,10%水合氯醛麻醉,仰臥位固定于木板上,消毒腹部,用剪刀沿腹正中線剪開腹腔(勿破壞胸腔),用鑷子將腹腔臟器翻轉到右側,分離腹主動脈和腹腔靜脈。用兩個血管鉗夾住一段長約1.5 cm的腹主動脈,右手持穿刺針,針尖斜面朝下,入針角度約30°左右,朝向心端方向刺入,見回血后另一端插入真空管之中,打開近心端血管鉗,待真空管中血液收集至3～5 ml時,用血管鉗夾住腹主動脈近心端,取出穿刺針。兩人配合,一人進針,另一人備采血管。將采取的動/靜脈血,3000 r/min,離心15 min,常規(guī)分離血清,于-80°冰箱保存,檢測 T4、T3、FT3、FT4、TSH水平。

結 果

各組檢測結果見附表。油酸3 h組、18 h組中的FT4水平與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；油酸3 h組中T4水平與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；油酸18 h組中T4水平與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

討 論

在本實驗中結果表明RDS大鼠與健康大鼠相比,血清甲狀腺素下降。黃烈華等[4]的研究亦表明NRDS患兒與健康早產(chǎn)兒比較血清T3、T4、FT3、FT4下降,血清IL-6升高,提示NRDS可對患兒甲狀腺功能產(chǎn)生影響,導致甲狀腺激素水平下降。結合在臨床上目前對NRDS的治療主要是采用補充外源性的PS聯(lián)合機械通氣治療,外源性的PS價格非常昂貴。但值得注意的是約20%～30%NRDS的患兒對表面活性劑替代療法不敏感[3],尤其是胎齡越小的早產(chǎn)兒由于肺泡結構發(fā)育不成熟,對外源性表面活性劑無反應。Pei等[3]在小鼠的研究中同樣發(fā)現(xiàn)甲狀腺激素與甲狀腺激素受體作用形成TR-SMRI復合物,激活下游Krüppel樣鋅指轉錄因子(KLFs)中的 KLF2因子,促進肺泡Ⅰ型細胞的分化和成熟,沒有KLF2的小鼠會缺乏成熟I型肺泡,最終導致小鼠在生后很短時間內死亡。結合在本實驗中,健康雄性SD大鼠油酸3 h組、18 h組中的FT4水平低于正常對照組(P<0.01)；油酸3 h組中T4水平低于與正常對照組(P<0.01),說明SD大鼠RDS與血清甲狀腺素水平下降有明顯的相關性。

附表 各組實驗動物血清指標比較

注：與對照組比較,*P<0.05,△P<0.01

Dilli等[5]在新生兒研究中表明甲狀腺激素的水平變化可以反映疾病的嚴重程度,在早產(chǎn)兒非甲狀腺疾病中,血清T3水平和感染新生兒的病死率密切相關,血清T3水平越低,病死率越高,需要機械通氣的NRDS 患兒其血清T4水平較低,可能是疾病的反應，而非甲狀腺疾病。另外的研究表明[6]：胎齡<32周的早產(chǎn)兒出生時有高的TSH水平，即高TSH血癥,無論這些早產(chǎn)兒時適于胎齡兒(AGA)還是小于胎齡兒(SGA),和正常出生的足月兒相比,追蹤至成年期他們的甲狀腺功能均正常。Srinivasan等[7]近期對10 652個非甲狀腺疾病的早產(chǎn)兒的研究資料中顯示，早產(chǎn)兒存在甲狀腺功能暫時性紊亂,主要表現(xiàn)為暫時性甲狀腺功能低下,部分發(fā)展成永久性甲低。應用血濾紙篩查甲狀腺功能(用T4,而不是TSH),發(fā)現(xiàn)嚴重的甲狀腺功能減退癥增加了圍產(chǎn)兒的發(fā)病率和病死率,同時會增加吸氧時間、延長機械通氣混雜因素的情況下,也會發(fā)生智力低下甚至腦癱。近年來對NRDS的認識逐步發(fā)展到對肺泡整體細胞功能的調控上,尤其是肺泡Ⅰ型細胞的功能調控越來越受到重視。因此本研究以RDS大白鼠模型和健康大白鼠通過檢測RDS大鼠血清甲狀腺素水平的變化,發(fā)現(xiàn)甲狀腺素在Ⅰ型細胞功能調控以及在RDS發(fā)病中所起的作用和機制,提出了在對肺表面活性物質治療不敏感的NRDS中一種新型的治療選擇,而在本實驗中T3、TSH、FT3與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義,可能與樣本量小有關。需進一步擴大實驗數(shù)據(jù)及用RDS大鼠行肺組織進行HE染色和免疫組化實驗等來進一步證明KLF2、KLF2 mRNA以及甲狀腺素在NRDS的發(fā)病機制中起到關鍵的作用，甚至給RDS大鼠補充一定量的甲狀腺素，觀察大鼠活動情況,為臨床提高新生兒RDS的治愈率提供可能的理論及實踐依據(jù)。

[1] Dobbs LG, Johnson MD, Vanderbilt J,etal. The great bigalveolar TI cell: evolvingconcepts and paradigms[J]. Cell Physiol Biochem,2010,25(1)：55-62.

[2] Herzog EL, Brody AR, Colby TV,etal. Knowns and unknowns of the alveolus[J].Proc Am Thorac Soc,2008,5:778-782.

[3] Pei LM,Leblanc M,Barish G,etal.Thyroid Hormone Receptor Repression Linked to Type IPneumocyte Associated Respiratory Distress Syndrome[J].Nat Med,2011,17(11)：1466-1472.

[4] 黃烈華,吳慧蓮.新生兒呼吸窘迫綜合征、感染性肺炎患兒甲狀腺激素、IL-6、TNF-α的變化及其相關性分析[J].中國婦幼保健,2015,3(5)：716-718.

[5] Dilli D,Dilmen U.The Role of Interleukin-6 and C-Reactive Protein inNon-Thyroidal Illness in Premature InfantsFollowed in Neonatal Intensive Care Unit[J].J Clin Res Pediatr Endocrinol,2012,4(2)：66-71.

[6] Mollee TS, Finken MJ, van Weissenbruch MM,etal. Normal thyroid function in young adults who were born very preterm[J]. J Pediatr Endocrinol Metab,2011,24(11-12):887-891.

[7] Srinivasan R, Harigopal S, Turner S,etal.Permanent and transient congenital hypothyroidism in preterm infants[J]. Acta Paediatr,2012,101(4)：179-182 .

(收稿：2016-05-26)

*寧夏回族自治區(qū)自然科學基金項目(NZ13205)

△延安大學附屬醫(yī)院兒科

▲通訊作者：銀川市第一人民醫(yī)院

油酸 呼吸窘迫綜合征,新生兒 大鼠 甲狀腺素 因果律

R722.19

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10.3969/j.issn.1000-7377.2016.10.003