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        豆腐蛋白體外消化物抑制膠束轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇作用分析

        2016-11-09 01:44:16董毓玭趙大云
        食品科學(xué) 2016年19期
        關(guān)鍵詞:吸收率膽汁豆腐

        董毓玭,陳 責(zé),宣 佳,賈 慧,趙大云*

        (上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院,上海 200240)

        豆腐蛋白體外消化物抑制膠束轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇作用分析

        董毓玭,陳責(zé),宣佳,賈慧,趙大云*

        (上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院,上海 200240)

        大豆蛋白肽具有顯著的降血脂功效,但目前研究主要集中在小分子肽段,且對(duì)蛋白肽降血脂作用的分子機(jī)理探究較少。模擬豆腐蛋白的胃腸道消化,得到豆腐蛋白的體外消化物,按相對(duì)分子質(zhì)量(MR)分為3 個(gè)級(jí)別:>10 000、3 000~10 000和<3 000,利用膽固醇膠束實(shí)驗(yàn)(采用兩種實(shí)驗(yàn)基質(zhì)及兩種檢測(cè)方法)檢測(cè)其抑制膳食混合膠粒轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇的作用。結(jié)果表明,在分級(jí)的3 種豆腐消化物中,MR>10 000具有最強(qiáng)的抑制膳食混合膠粒轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇作用,其膽固醇膠束吸收率為62.40%,小于陽(yáng)性對(duì)照(Val-Ala-Trp-Met-Tyr,其膽固醇膠束吸收率為68.41%),且MR>10 000豆腐消化物的抑制膠束轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇作用隨著樣品質(zhì)量濃度增大呈先增強(qiáng)后減弱的趨勢(shì)。此外,膽固醇膠束實(shí)驗(yàn)中采用的兩種“膳食混合膠?!钡霓D(zhuǎn)運(yùn)效果及兩種檢測(cè)方法的結(jié)果均具有一致性,說(shuō)明豆腐蛋白消化物具有影響膳食混合膠粒轉(zhuǎn)運(yùn)和膽固醇吸收的作用。

        豆腐;消化肽;膳食混合膠粒;膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)與吸收

        人體內(nèi)膽固醇等脂類組分的吸收是通過(guò)小腸腸液中的“膳食混合膠?!保╠ietary mixed micelles,DMM)來(lái)轉(zhuǎn)運(yùn)吸收的。經(jīng)過(guò)胃腸道蛋白酶等消化的豆腐蛋白在被進(jìn)一步消化成小分子肽之前就已經(jīng)接觸到DMM從而影響膽固醇等脂類組分的轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)大豆蛋白對(duì)于高脂蛋白血癥的人群有明顯降血脂的作用[1-3]。González-Ortega等[4]的研究指出,大豆來(lái)源的多肽LPYPR具有降膽固醇作用;Inoue等[5]研究證明了3 種二肽的降甘油三酯作用;Nagaoka等[6]報(bào)道相對(duì)分子質(zhì)量(MR)<1 000的肽段Val-Ala-Trp-Met-Tyr具有降血脂作用。但目前對(duì)大豆蛋白消化物的研究主要集中在小分子肽,而對(duì)MR>3 000的大分子消化物的作用研究相對(duì)較少。且目前大豆蛋白及其酶解產(chǎn)物的降血脂作用研究主要通過(guò)細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)行功能性判斷[7],鮮見對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行深入的探討。本研究探索豆腐蛋白在消化吸收過(guò)程中的消化肽對(duì)于DMM轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收膽固醇等脂類組分的影響。

        因此,本實(shí)驗(yàn)采用一種常見的豆制品——豆腐來(lái)進(jìn)行體外消化模擬實(shí)驗(yàn),得到豆腐蛋白體外消化物(tofu protein hydrolysates,TPH),進(jìn)一步分為3 個(gè)不同MR級(jí)別的TPH:>10 000、3 000~10 000和<3 000。同時(shí)利用膽固醇膠束實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行研究對(duì)比,來(lái)探討TPH的抑制膠束轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇(disruption of the transportation of micellar cholesterols,DTMC)作用,從而基于膽固醇的小腸吸收機(jī)制來(lái)分析TPH的降膽固醇作用。在膽固醇膠束實(shí)驗(yàn)中,天然豬膽汁雖然成分復(fù)雜,但其具有更貼近人體膽汁狀況和更易獲取的優(yōu)點(diǎn);而人工膽固醇膠束溶液由于其成分簡(jiǎn)單,實(shí)驗(yàn)干擾小,亦是一種常用的實(shí)驗(yàn)基質(zhì)[8-9],所以本實(shí)驗(yàn)中采用了人工膠束和天然膽汁的對(duì)比實(shí)驗(yàn),可增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的可靠性。此外,采用試劑盒法和高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)聯(lián)用法對(duì)具有最強(qiáng)DTMC作用的TPH的量效關(guān)系進(jìn)行探究,嘗試建立更為精確的膽固醇檢測(cè)方法,以期為膽固醇膠束溶解度的檢測(cè)提供理論支持。

        1 材料與方法

        1.1材料與試劑

        老豆腐(蛋白質(zhì)含量8.5%;脂肪含量5.1%) 上海清美綠色食品有限公司;豬膽 取自上海郊區(qū)一屠宰場(chǎng)。

        胃蛋白酶、胰酶 美國(guó)Sigma公司;人工合成肽(Val-Ala-Trp-Met-Tyr,MR854.03) Synpeptide公司;膽固醇含量檢測(cè)試劑盒 日本和光純藥工業(yè)株式會(huì)社;離心過(guò)濾器、0.22 μm濾膜 美國(guó)Millipore公司;96 孔板 美國(guó)Corning公司。

        1.2儀器與設(shè)備

        旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 步琦實(shí)驗(yàn)室設(shè)備(上海)貿(mào)易有限公司;臺(tái)式離心機(jī) 德國(guó)艾本德(上海)貿(mào)易有限公司;高速臺(tái)式冷凍離心機(jī) 上海盧湘儀器有限公司;超聲波細(xì)胞粉碎機(jī) 上海比朗儀器有限公司;氮吹儀 上海安譜科學(xué)儀器有限公司;高效液相色譜系統(tǒng)(600 Controller 泵;717 Plus自動(dòng)進(jìn)樣器;2996紫外檢測(cè)器;Anpel LAG-5000G無(wú)油空氣發(fā)生器) 美國(guó)Waters公司;ELSD 2000蒸發(fā)光散射檢測(cè)儀 美國(guó)Alltech公司;冷凍干燥機(jī) 美國(guó)Labconco公司;酶標(biāo)儀 瑞士帝肯公司。

        1.3方法

        1.3.1樣品預(yù)處理

        豆腐與70%乙醇等體積混勻。超聲波萃取3~4 h,3 000 r/min離心15 min。棄去上清液,取下層沉淀于-18 ℃冷凍保藏。豆腐制品中除了蛋白質(zhì),還含有大豆異黃酮、植物甾醇等物質(zhì),它們?cè)谛∧c被吸收并且也具有一定的生物活性[10-11],所以需要預(yù)處理步驟去除干擾因素。

        1.3.2胃腸道消化模擬

        加入1 mg/mL酶解底物——乙醇處理過(guò)的老豆腐,并用1 mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)pH值至2.0。豬胃黏膜蛋白酶添加量為40 mg/g底物,于37 ℃酶解90 min。再用1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0,豬胃黏膜蛋白酶添加量為40 mg/g底物,37 ℃酶解150 min。把模擬消化完成后的消化液沸水浴10 min滅酶活,再快速冷卻至室溫,并用1 mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)pH值至4.6;待沉淀析出后,旋蒸去除多余的水溶液,6 000 r/min離心20 min。棄去下層沉淀,得到上清液,即胃腸道模擬酶解的消化液;取一半上清液冷凍干燥成粉末,為TPH;另一半上清液予以下面的超濾分級(jí)處理。

        1.3.3消化產(chǎn)物超濾分級(jí)

        分別用3 000和10 000兩種截留相對(duì)分子質(zhì)量的離心過(guò)濾器,取胃腸道模擬酶解的消化上清液,分為3 個(gè)MR級(jí)別的TPH:>10 000、3 000~10 000、<3 000,分別冷凍干燥成粉末,備用。

        1.3.4分級(jí)產(chǎn)物的膽固醇膠束實(shí)驗(yàn)

        1.3.4.1天然豬膽汁預(yù)處理

        屠宰場(chǎng)取新鮮豬膽4 只,刺破膽囊取膽汁于燒杯中。6 000 r/min離心20 min后,去沉淀(主要是組織殘留細(xì)胞),取上清液用pH 7.4的緩沖溶液調(diào)節(jié)豬膽濃度至2 mmol/L,于-80 ℃冰箱凍藏備用。

        1.3.4.2膽固醇膠束實(shí)驗(yàn)

        分別準(zhǔn)確稱量TPH以及3 個(gè)MR級(jí)別>10 000、3 000~10 000 TPH和<3 000的TPH,用去離子水溶解至300 mg/mL。取200 μL,加入1 800 μL稀釋的膽汁膠束溶液,使得樣品質(zhì)量濃度為30 mg/mL,將得到的2 mL溶液常溫振蕩5 min混勻。37 ℃條件下,樣品與膽汁膠束反應(yīng)1 h。15 000 r/min離心20 min,取上清液1 mL用氯仿-甲醇溶液(2∶1,V/V)萃取。萃取物氮?dú)獯蹈珊?,于高效液相進(jìn)樣檢測(cè)其膽固醇含量。實(shí)驗(yàn)中取人工合成肽(Val-Ala-Trp-Met-Tyr)作為陽(yáng)性對(duì)照;以不加任何樣品的溶劑為空白組。

        1.3.4.3HPLC-ELSD法檢測(cè)膽固醇含量

        色譜條件:分析柱:Inertsil ODS-3(250 mm×4.6 mm,5 μm);柱溫:50 ℃;流動(dòng)相A:0.1%三氟乙酸水溶液;流動(dòng)相 B:0.1%三氟乙酸-甲醇溶液;洗脫梯度:0~5 min,20% A,80% B;5~15 min,0% A,100% B;15~18 min,20% A,80% B;18~25 min,20% A,80% B;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL;在線脫氣(氦氣)速率:30 mL/min;HPLC-ELSD法檢測(cè)條件:漂移管溫度:52 ℃;氦氣流速:1.6 mL/min;氦氣壓力:0.2 MPa;進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣。實(shí)驗(yàn)條件參照文獻(xiàn)[12-13]并結(jié)合實(shí)際檢測(cè)進(jìn)行了優(yōu)化。

        1.3.4.4膽固醇吸收率計(jì)算

        式中:S1為空白組(不加任何樣品的溶劑)膠束溶解度/(mg/mL);S2為樣品組膠束溶解度/(mg/mL)。

        1.3.5實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證

        1.3.5.1人工膽固醇膠束溶液對(duì)比天然膽汁驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

        按10 mmol/L?;悄懰徕c、2 mmol/L膽固醇、5 mmol/L油酸、132 mmol/L氯化鈉、15 mmol/L磷酸鈉緩沖液(pH 7.4),超聲波乳化20 min制備人工膽固醇膠束溶液,置于37 ℃、24 h過(guò)夜。稱取MR>10 000 TPH用去離子水溶解至300 mg/mL。取200 μL,加入1 800 μL人工膽固醇膠束溶液中,使得樣品質(zhì)量濃度為30 mg/mL,將得到的2 mL溶液常溫振蕩5 min混勻。37 ℃條件下,樣品與人工膽固醇膠束溶液反應(yīng)1 h。15 000 r/min離心20 min,取上清液1 mL用氯仿-甲醇溶液(2∶1,V/V)萃取。萃取物氮?dú)獯蹈珊?,于HPLC-ELSD進(jìn)樣檢測(cè)其膽固醇含量。HPLC-ELSD條件和計(jì)算方法同1.3.4節(jié)。

        1.3.5.2試劑盒法驗(yàn)證HPLC-ELSD法檢測(cè)膽固醇含量以及抑制膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)量-效關(guān)系實(shí)驗(yàn)

        試劑盒法檢測(cè)MR>10 000 TPH的量效關(guān)系。稱取MR>10 000 TPH用去離子水分別溶解至100、300、600 mg/mL。分別取20 μL,加入180 μL人工膽固醇膠束溶液中,使得樣品質(zhì)量濃度為10、30、60 mg/mL,將得到的200 μL溶液常溫振蕩5 min混勻。37 ℃條件下,樣品與人工膽固醇膠束溶液反應(yīng)1 h。15 000 r/min離心20 min,取上清液2 μL,添加到每孔已有300 μL顯色劑(試劑盒自帶)的96 孔板上。37 ℃反應(yīng)5 min,于酶標(biāo)儀600 nm(700 nm輔波長(zhǎng))波長(zhǎng)處檢測(cè)其膽固醇含量。計(jì)算方法同1.3.4節(jié)。

        HPLC-ELSD法檢測(cè)MR>10 000 TPH的量效關(guān)系。稱取MR>10 000 TPH用去離子水分別溶解至100、300、600 mg/mL。分別取200 μL,加入1 800 μL人工膽固醇膠束溶液中,使得樣品質(zhì)量濃度為10、30、60 mg/mL,將得到的2 mL溶液常溫振蕩5 min混勻。37 ℃條件下,樣品與人工膽固醇膠束溶液反應(yīng)1 h。15 000 r/min離心20 min,取上清液1 mL用氯仿-甲醇溶液萃取。萃取物氮?dú)獯蹈珊?,于HPLC進(jìn)樣檢測(cè)其膽固醇含量。HPLC-ELSD條件和計(jì)算方法同1.3.4節(jié)。

        1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        2 結(jié)果與分析

        2.1HPLC-ELSD檢測(cè)膽固醇含量

        圖1 HPLC-ELSD法檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的膽固醇Fig.1 Detection of cholesterol by HPLC with ELSD detector

        從圖1 HPLC-ELSD法的檢測(cè)圖譜中發(fā)現(xiàn),1.0 mg/mL的膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液在22 min時(shí)有電信號(hào)輸出,可知膽固醇的保留時(shí)間為22 min。以光散射檢測(cè)的電信號(hào)積分值作為縱坐標(biāo),以0.05、0.10、0.50、1.0、2.0、5.0 mg/mL這一系列膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的膽固醇含量對(duì)數(shù)值作為橫坐標(biāo),得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y = 1.201 3x+5.835 1(R2= 0.998 1)。同時(shí)圖1B、C顯示人工膽固醇膠束溶液和天然膽汁在22 min時(shí)也均有電信號(hào)輸出,因此高效液相蒸發(fā)光散射檢測(cè)聯(lián)用法可用于膽固醇含量的檢測(cè),圖譜基線穩(wěn)定,峰形窄尖,檢測(cè)結(jié)果直觀可靠。

        2.2分級(jí)產(chǎn)物的抑制DTMC作用

        大豆蛋白肽的降膽固醇作用可由抑制DTMC作用的增強(qiáng)而得到增強(qiáng)[14-17],在人體小腸吸收時(shí),只有形成膠束的膽固醇才可以被轉(zhuǎn)運(yùn)至腸細(xì)胞表面被人體吸收利用。膽固醇膠束溶解度即為溶液中形成膠束的膽固醇的含量。所以當(dāng)添加樣品后,膽固醇膠束被破壞,溶液中的膠束減少,可被人體吸收的膽固醇的量減少。膽固醇膠束溶解度越小,則樣品的DTMC作用越強(qiáng)。膽固醇吸收率越低,則樣品的DTMC作用越強(qiáng)。故實(shí)驗(yàn)中圖表常以膽固醇膠束溶解度和膽固醇吸收率表征樣品的DTMC作用。又因?yàn)檠饕扇梭w血清中的膽固醇和甘油三酯構(gòu)成,所以DTMC作用也起到一定的降血脂的作用。

        圖2 HPLC-ELSD法檢測(cè)不同分子質(zhì)量分級(jí)的TPH與人工合成肽的DTMC作用對(duì)比Fig.2 Comparison of micellar cholesterol transportation-disrupting activity of TPH with different MRand a synthetic peptide by HPLC-ELSD

        從圖2的不同分子質(zhì)量分級(jí)的酶解物(TPH)和TPH本身以及作為陽(yáng)性對(duì)照的人工合成肽Val-Ala-Trp-Met-Tyr的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看,TPH均具有DTMC作用。TPH、MR>10 000 TPH、MR3 000~10 000 TPH和MR<3 000 TPH這4 種樣品在添加量為30 mg/mL時(shí)其膽固醇膠束溶解度分別為(0.445±0.003)、(0.334±0.002)、(0.454±0.001)、(0.369±0.001) mg/mL(以空白膽固醇膠束溶解度(0.535±0.002) mg/mL計(jì))。按DTMC作用由強(qiáng)到弱排序依次為MR>10 000 TPH、MR<3 000 TPH、TPH、MR3 000~10 000 TPH;其中MR<3 000 TPH與人工合成肽Val-Ala-Trp-Met-Tyr的DTMC作用相當(dāng),膽固醇膠束吸收率分別為(68.90±0.45)% 和(68.41±0.63)%。MR>10 000 TPH膽固醇膠束吸收率為(62.40±0.61)%,其DTMC作用最強(qiáng)。

        在前人研究中也有類似發(fā)現(xiàn),Lule等[18]發(fā)現(xiàn)分子質(zhì)量為5.5 kD的肽 Lunasin 具有潛在的抗氧化、抗炎癥、抗癌變等多種生物活性,也在調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇生物合成方面有重要作用。Ishiguro等[19]發(fā)現(xiàn)Kori-Tofu豆腐蛋白的高分子質(zhì)量物質(zhì)(high-molecular-weight fraction,HMF)的含量比大豆分離蛋白更大,從而可以表現(xiàn)出更好的降低膽固醇作用,并且物質(zhì)的降膽固醇作用與其HMF含量這兩者之間有著密切的聯(lián)系。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖2)與前述[18-19]的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)具有一致性。這可能是由于隨著胃腸道消化的進(jìn)行,酶解大豆肽中具有破壞轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇膠束作用的氨基酸片段會(huì)被機(jī)體內(nèi)胃或胰蛋白酶降解,而分子質(zhì)量大的大豆肽較為完整地保留了這些特殊的片段。

        2.3實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證

        2.3.1人工膽固醇膠束溶液對(duì)比天然膽汁驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

        圖3 人工膠束和稀釋天然豬膽汁的HPLC-ELSD檢測(cè)MR>10 000 TPH的DTMC作用對(duì)比Fig.3 Comparison of micellar cholesterol transportation-disrupting activity of MR> 10 000 TPH with artificial micelles and swine bile by HPLC-ELSD

        從圖3人工膠束和稀釋的天然膽汁的HPLC-ELSD檢測(cè)對(duì)比來(lái)看,MR>10 000 TPH在添加量為30 mg/mL時(shí),無(wú)論是人工膠束基質(zhì),還是稀釋的天然豬膽汁均具有顯著DTMC作用。所以,人工膠束和天然膽汁這兩種基質(zhì)具有較好的檢測(cè)一致性,在方法上兩者可相互驗(yàn)證。

        2.3.2試劑盒法驗(yàn)證HPLC-ELSD法檢測(cè)膽固醇以及抑制膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的量-效關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        試劑盒檢測(cè)膽固醇含量是一種常見的檢測(cè)方法,但當(dāng)實(shí)驗(yàn)樣本較大,試劑盒使用成本高;HPLC-ELSD檢測(cè)雖然前期實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化困難,但是對(duì)于大量樣本較經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。為了進(jìn)一步保證HPLC檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性,本實(shí)驗(yàn)采用的膽固醇含量試劑盒檢測(cè)和HPLC-ELSD檢測(cè)兩種方法進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn),也進(jìn)而對(duì)MR>10 000 TPH的DTMC作用的量效關(guān)系進(jìn)行了探究。

        試劑盒中膽固醇含量和吸光度存在線性關(guān)系,以吸光度作為縱坐標(biāo),膽固醇含量為橫坐標(biāo),得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y = 0.116 6x+0.011 6(R2 = 0.998 2)。

        圖4 試劑盒法和HPLC-ELSD法檢測(cè)不同質(zhì)量濃度下MR>10 000TPH的DTMC作用Fig.4 Comparison of micellar cholesterol transportation-disrupting activity of MR> 10 000 TPH with artificial micelles at different concentrations by kit and HPLC-ELSD

        對(duì)比圖4中試劑盒法和HPLC-ELSD法這兩種檢測(cè)方法的結(jié)果,可觀察到一致性,相互驗(yàn)證了樣品的DTMC作用。此外,可觀察到當(dāng)TPH添加量從10 mg/mL增加到30 mg/mL時(shí),膽固醇吸收率有顯著性下降。這可能是由于相同大小的空間內(nèi)有了更多的TPH,增加了TPH與膽固醇膠束的接觸機(jī)率,使得更多的膽固醇膠束被破壞[20]。當(dāng)以膽固醇吸收率表征時(shí),膽固醇吸收率隨著TPH質(zhì)量濃度增大而下降,說(shuō)明在實(shí)驗(yàn)中膽固醇膠束溶解度占空白組膽固醇膠束溶解度的比率越來(lái)越低,而空白組膽固醇膠束溶解度始終不變,所以溶液中膽固醇膠束減少,更少的膽固醇被人體小腸吸收利用,所以在一定范圍內(nèi),TPH的DTMC作用隨著TPH質(zhì)量濃度的增大呈增強(qiáng)的趨勢(shì)。然而,當(dāng)TPH質(zhì)量濃度從30 mg/mL增加到60 mg/mL時(shí),膽固醇吸收率略微上升,表示TPH的DTMC作用減弱。這可能是由于當(dāng)TPH質(zhì)量濃度持續(xù)增大時(shí),單位空間內(nèi)的TPH過(guò)于飽和,反而會(huì)影響TPH與膽固醇膠束的相互作用,并不能使得更多的膽固醇膠束被破壞,沒(méi)有增強(qiáng)DTMC的作用。

        3 結(jié) 論

        本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)豆腐消化產(chǎn)物TPH對(duì)DTMC具有抑制作用,表明豆腐經(jīng)體外模擬消化后的產(chǎn)物仍具有較好的降膽固醇作用。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)MR>10 000的大相對(duì)分子質(zhì)量的TPH在各級(jí)TPH中具有最強(qiáng)的DTMC抑制作用,其膽固醇膠束吸收率為62.40%,優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照(其膽固醇膠束吸收率為68.41%),且MR>10 000 TPH的DTMC作用隨著樣品質(zhì)量濃度增大呈先增強(qiáng)后減弱的趨勢(shì)。人工膠束和天然膽汁的轉(zhuǎn)運(yùn)效果均較好,試劑盒法與HPLC-ELSD這兩種檢測(cè)方法的結(jié)果也是高度一致的,可相互驗(yàn)證樣品的DTMC作用,也為膽固醇的精確定量檢測(cè)提供了理論依據(jù)和技術(shù)支持,這對(duì)大豆制品降膽固醇的研究工作具有指導(dǎo)意義。

        [1] WILCKE H L, HOPKINS D T, WAGGLE D H. Soy protein and human nutrition[M]. Amsterdam, Netherlands: Elsevier, 2012: 19-359.DOI:10.1016/B978-0-12-751450-5.50003-6.

        [2] HARTMANN R, MEISEL H. Food-derived peptides with biological activity: from research to food applications[J]. Current Opinion in Biotechnology, 2007, 18(2): 163-169. DOI:10.1016/ j.copbio.2007.01.013.

        [3] 劉恩岐, 巫永華, 張建萍, 等. 黑豆肽的分離純化及其輔助降血脂作用[J]. 食品科學(xué), 2011, 32(19): 248-252.

        [4] GONZáLEZ-ORTEGA O, LóPEZ-LIMóN A R, MORALESDOMíNGUEZ J F, et al. Production and purifi cation of recombinant hypocholesterolemic peptides[J]. Biotechnology Letters, 2015, 37(1): 41-54. DOI:10.1007/s10529-014-1657-4.

        [5] INOUE N, NAGAO K, SAKATA K, et al. Screening of soy proteinderived hypotriglyceridemic di-peptides in vitro and in vivo[J]. Lipids Health Disease, 2011, 10: 85. DOI:10.1186/1476-511X-10-85.

        [6] NAGAOKA S, NAKAMURA A, SHIBATA H, et al. Soystatin(VAWWMY), a novel bile acid-binding peptide, decreased micellar solubility and inhibited cholesterol absorption in rats[J]. Bioscience,Biotechnology, and Biochemistry, 2010, 74(8): 1738-1741. DOI:10.1271/bbb.100338.

        [7] ZHANG H, BARTLEY G E, ZHANG H, et al. Peptides identified in soybean protein increase plasma cholesterol in mice on hypercholesterolemic diets[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2013, 61(35): 8389-8395. DOI:10.1021/jf4022288.

        [8] KIRANA C, ROGERS P F, BENNETT L E, et al. Naturally derived micelles for rapid in vitro screening of potential cholesterol-lowering bioactives[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2005,53(11): 4623-4627. DOI:10.1021/jf050447x.

        [9] KIRANA C, ROGERS P F, BENNETT L E, et al. Rapid screening for potential cholesterol-lowering peptides using naturally derived micelle preparation[J]. Australian Journal of Dairy Technology, 2005, 60(2): 163-166.

        [10] SMET E D, MENSINK R P, PLAT J. Effects of plant sterols and stanols on intestinal cholesterol metabolism: suggested mechanisms from past to present[J]. Molecular Nutrition & Food Research, 2012,56(7): 1058-1072. DOI:10.1002/mnfr.201100722.

        [11] CHáVEZ-SANTOSCOY R A, TOVAR A R, SERNA-SALDIVAR S O,et al. Conjugated and free sterols from black bean (Phaseolus vulgaris L.) seed coats as cholesterol micelle disruptors and their effect on lipid metabolism and cholesterol transport in rat primary hepatocytes[J]. Genes & Nutrition, 2014, 9(1): 1-9. DOI:10.1007/s12263-013-0367-1.

        [12] HSIEH Y, MERKLE K, WANG G, et al. High-performance liquid chromatography-atmospheric pressure photoionization/tandem mass spectrometric analysis for small molecules in plasma[J]. Analytical Chemistry, 2003, 75(13): 3122-3127. DOI:10.1021/ac0300082.

        [13] OSADA K, RAVANDI A, KUKSIS A. Rapid analysis of oxidized cholesterol derivatives by high-performance liquid chromatography combined with diode-array ultraviolet and evaporative laser lightscattering detection[J]. Journal of the American Oil Chemists’ Society,1999, 76(7): 863-871. DOI:10.1007/s11746-999-0078-3.

        [14] RUIZ J C R, ANCONA D A B, CAMPOS M R S. Bioactive vegetable proteins and peptides in lipid-lowering; nutraceutical potential[J]. Nutrición Hospitalaria, 2014, 4(29): 776-784. DOI:10.3305/ nh.2014.29.4.7208.

        [15] UDENIGWE C C. Bioinformatics approaches, prospects and challenges of food bioactive peptide research[J]. Trends in Food Science & Technology, 2014, 36(2): 137-143. DOI:10.1016/ j.tifs.2014.02.004.

        [16] IKEDA K, KITAGAWA S, TADA T, et al. Modification of yeast characteristics by soy peptides: cultivation with soy peptides represses the formation of lipid bodies[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2011, 89(6): 1971-1977. DOI:10.1007/s00253-010-3001-9.

        [17] ABETE I, GOYENECHEA E, ZULET M A, et al. Obesity and metabolic syndrome: potential benefit from specific nutritional components[J]. Nutrition, Metabolism and Cardiovascular Diseases,2011, 21: B1-B15. DOI:10.1016/j.numecd.2011.05.001.

        [18] LULE V K, GARG S, POPHALY S D, et al. Potential health benefi ts of lunasin: a multifaceted soy-derived bioactive peptide[J]. Journal of Food Science, 2015, 80(3): R485-R494. DOI:10.1111/1750-3841.12786.

        [19] ISHIGURO T, TATSUNOKUCHI S, MITSUI N, et al. Cholesterollowering effect of kori-tofu protein and its high-molecular-weight fraction content[J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry,2011, 75(3): 575-577. DOI:10.1271/bbb.100634.

        [20] ZHANG H, YOKOYAMA W H, ZHANG H. Concentrationdependent displacement of cholesterol in micelles by hydrophobic rice bran protein hydrolysates[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2012, 92(7): 1395-1401. DOI:10.1002/jsfa.4713.

        Disrupting Effect of Peptides Derived from in Vitro Digestion of Tofu Protein on the Transportation of Micellar Cholesterol

        DONG Yupin, CHEN Ze, XUAN Jia, JIA Hui, ZHAO Dayun*
        (School of Agriculture and Biology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China)

        Soy protein peptides have signifi cant hypocholesterolemic activity. But at present most studies are focused on small molecular peptides, and few explorations have been made on their hypolipidemic mechanism. In the present study, an in vitro gastrointestinal digestion model was applied to simulate the gastrointestinal digestion of tofu protein. The digested products were classifi ed into three levels: > 10 000, 3 000-10 000, and < 1 000, according to their molecular weights (MR). The effect of these digested products on disrupting the transportation of micellar cholesterol was explored based on dietary mixed micelles (DMM) experiments with two experimental matrixes and two test methods. The results indicated that the products with MR> 10 000 had the strongest suppressing effect on transportation of micellar cholesterol. The absorption rate of micellar cholesterol in their presence was 62.40%, which was superior to the positive control, VAWWMY (Val-Ala-Trp-Met-Tyr) with an absorption rate of micellar cholesterol of 68.41%. The effect of the products with MR> 10 000 was enhanced fi rst and then reduced with the increase in its concentration. In addition, the results of two cholesterol detection methods and the transportation effi ciencies of two cholesterol micelles were consistent. Peptides derived from in vitro digestion of tofu protein exerted a signifi cant inhibitory effect on the micellar solubility of cholesterol. The current work has provided the fi rst approach to exploring the potential effect of tofu protein hydrolysates (TPH) on reducing cholesterol absorption in the intestine.

        tofu; digested peptides; dietary mixed micelles (DMM); cholesterol transport and absorption

        10.7506/spkx1002-6630-201619039

        TS214.2

        A

        1002-6630(2016)19-0232-05

        董毓玭, 陳責(zé), 宣佳, 等. 豆腐蛋白體外消化物抑制膠束轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇作用分析[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(19): 232-236.

        DOI:10.7506/spkx1002-6630-201619039. http://www.spkx.net.cn

        DONG Yupin, CHEN Ze, XUAN Jia, et al. Disrupting effect of peptides derived from in vitro digestion of tofu protein on the transportation of micellar cholesterol[J]. Food Science, 2016, 37(19): 232-236. (in Chinese with English abstract)

        DOI:10.7506/spkx1002-6630-201619039. http://www.spkx.net.cn

        2015-12-06

        國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)項(xiàng)目(2013AA102207-6)

        董毓玭(1991—),女,碩士研究生,研究方向?yàn)楣δ苄允称?。E-mail:pennydong@qq.com

        趙大云(1966—),男,副教授,博士,研究方向?yàn)楣δ苄允称?。E-mail:dyzhao@sjtu.edu.cn

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