羅飛亞，王鋼力，邢書霞，蘇哲，王佑春

化妝品安全性評(píng)價(jià)替代試驗(yàn)的研究進(jìn)展及思考

羅飛亞，王鋼力，邢書霞，蘇哲，王佑春

化妝品的安全性評(píng)價(jià)是保障化妝品質(zhì)量安全的重要環(huán)節(jié)。在我國(guó)，化妝品作為一種健康相關(guān)產(chǎn)品，實(shí)行上市前產(chǎn)品的許可備案管理制度［1-2］。我國(guó)的化妝品安全性評(píng)價(jià)體系包括：經(jīng)典的毒理學(xué)試驗(yàn)、體外遺傳毒性試驗(yàn)和人體安全性試驗(yàn)。像眼刺激性、皮膚刺激性、皮膚致敏性等化妝品安全性評(píng)價(jià)中關(guān)鍵的毒理學(xué)終點(diǎn)，以整體動(dòng)物試驗(yàn)為主［3］。

1959 年，英國(guó)科學(xué)家首先提出動(dòng)物福利和動(dòng)物保護(hù)的“3R”（reduction、refinement、replacement）原則，即在科學(xué)研究中不斷減少、優(yōu)化、替代動(dòng)物試驗(yàn)［4］。隨著科技的不斷進(jìn)步，細(xì)胞、分子等生物學(xué)手段被引入到現(xiàn)代毒理學(xué)研究中，新的體外研究方法如計(jì)算機(jī)模擬毒性當(dāng)量、體外重建的組織器官、人的永生化細(xì)胞系等檢測(cè)方法在逐步替代傳統(tǒng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)［5-6］。近年來，非動(dòng)物檢測(cè)方法的呼聲越來越高，尤其是在化妝品安全性評(píng)價(jià)中。從科學(xué)的角度來看，動(dòng)物皮膚及角膜無論在生物學(xué)構(gòu)造還是生理功能方面都與人的皮膚和角膜存在差異，以動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)M人實(shí)際使用化妝品的情況存在種屬間的偏差；某些局部毒性的經(jīng)典毒理學(xué)試驗(yàn)如眼刺激、皮膚刺激性（腐蝕性）的家兔試驗(yàn)，檢測(cè)方法的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)較為主觀，不如體外的人工角膜、人工皮膚模型的結(jié)果精準(zhǔn)客觀［7-9］。從法規(guī)要求來看，隨著歐盟化妝品動(dòng)物試驗(yàn)禁令的實(shí)施，使用非動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)行化妝品安全評(píng)估成為了越來越多的國(guó)家和地區(qū)努力實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)。

1 不同國(guó)家、地區(qū)的體外替代方法起源及管理現(xiàn)狀

2003 年 1 月，歐盟規(guī)定：自 2009 年 3 月 11 日起禁止使用動(dòng)物進(jìn)行化妝品急性毒性、眼刺激和過敏試驗(yàn)，自2013 年 3 月 11 日起全面禁止在動(dòng)物身上進(jìn)行化妝品和原料的安全性測(cè)試，不允許成員國(guó)從外國(guó)進(jìn)口和銷售違反上述禁令的化妝品，并列入 WTO 雙邊協(xié)議。這一動(dòng)物實(shí)驗(yàn)禁令的提出，加快了全世界在化妝品領(lǐng)域?qū)μ娲椒ㄑ芯康牟椒ァ?/p>

美國(guó)自 20 世紀(jì)開始的國(guó)家毒理計(jì)劃（national toxicology program，NTP）也一直致力于毒理檢測(cè)方法的改進(jìn)和研究。其“21 世紀(jì)毒性試驗(yàn)：遠(yuǎn)景與策略”報(bào)告中指出傳統(tǒng)的毒理學(xué)正經(jīng)歷著巨大的挑戰(zhàn)和改革，未來的毒性檢測(cè)策略將以研究毒性機(jī)制和靶向測(cè)試為核心，方法逐漸由當(dāng)前的體內(nèi)試驗(yàn)轉(zhuǎn)變?yōu)轶w外試驗(yàn)，重點(diǎn)發(fā)展以現(xiàn)代生物學(xué)為基礎(chǔ)、涵蓋廣泛量效關(guān)系的、高效的體外測(cè)試方法［10］。

2009 年，美國(guó)、加拿大、日本和歐盟簽署了替代方法國(guó)際合作協(xié)議（International Cooperation on Alternative Test Methods，ICATM），2011 年韓國(guó)也加入了該協(xié)議。此后幾年內(nèi)，歐盟、美國(guó)、日本、韓國(guó)、巴西等國(guó)家和地區(qū)都紛紛成立了相應(yīng)的體外科學(xué)研究中心，如美國(guó)機(jī)構(gòu)間替代方法評(píng)價(jià)協(xié)調(diào)委員會(huì)（ICCVAM）、歐盟歐洲替代動(dòng)物方法核心實(shí)驗(yàn)室（EURL-ECVAM）以及日本替代試驗(yàn)驗(yàn)證中心（JaCVAM）等。經(jīng)過替代方法驗(yàn)證中心認(rèn)可的試驗(yàn)方法，可以申請(qǐng)納入世貿(mào)經(jīng)合組織（OECD）、人用藥物注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）、國(guó)際化妝品監(jiān)管合作組織（ICCR，主要參與成員包括美國(guó)、歐盟、日本和加拿大的相關(guān)職能機(jī)構(gòu)）或其他國(guó)家、地區(qū)的法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)，在世界范圍內(nèi)被廣泛認(rèn)可。迄今為止，世界上已經(jīng)明令禁止或正在討論禁止化妝品動(dòng)物試驗(yàn)的國(guó)家和地區(qū)有：歐盟、英國(guó)、挪威、巴西、土耳其、韓國(guó)、印度、新西蘭、以色列、瑞士、美國(guó)、俄羅斯、澳大利亞、加拿大、阿根廷、越南和中國(guó)臺(tái)灣等。有些國(guó)家雖未立法禁止動(dòng)物試驗(yàn)，但是設(shè)立了專門的替代方法研究中心，比如日本。有些國(guó)家雖未設(shè)立專門的替代方法研究中心，但其政府部門有專門的科研經(jīng)費(fèi)和基金用于替代試驗(yàn)相關(guān)的研究，或者通過跨國(guó)合作的方式與美國(guó)、歐盟的替代試驗(yàn)研究中心合作，進(jìn)行替代方法的驗(yàn)證和研究，或者通過網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)分享和交流替代方法，比如加拿大、德國(guó)、澳大利亞和新西蘭。

從化妝品禁令的模式來看，有像歐盟禁令這樣一刀切式的全面禁止化妝品及原料領(lǐng)域中所有動(dòng)物試驗(yàn)的模式，也有根據(jù)科學(xué)的發(fā)展，只在有其他優(yōu)選方案的情況下禁止動(dòng)物試驗(yàn)的模式。還有很多國(guó)家雖無法規(guī)要求禁止動(dòng)物試驗(yàn)，但在化妝品安全評(píng)價(jià)中可自由選擇是否采用替代方法。

2 體外替代方法的研究進(jìn)展及使用策略

需要指出的是，所謂的“替代方法”，是對(duì)英文“alternative methods”的直接翻譯，但其意義應(yīng)該是指“最優(yōu)選的方法”，而不僅僅是追求“替代”原有的動(dòng)物試驗(yàn)。研究“化妝品動(dòng)物體外替代試驗(yàn)”，是為了尋找更精確、一致性更高、更靈敏、更經(jīng)濟(jì)的優(yōu)選方法，并且這些“優(yōu)選方法”首先需要符合動(dòng)物“3R”的減少、優(yōu)化、替代原則。

歐盟的聯(lián)合研究中心（JRC）和美國(guó)的國(guó)家毒理計(jì)劃（NTP）均一直致力于替代試驗(yàn)的開發(fā)、驗(yàn)證和推廣工作。替代試驗(yàn)的研發(fā)思路由最開始的以離體器官、屠宰場(chǎng)廢料、雞胚等取代整體動(dòng)物的方法，發(fā)展至體外細(xì)胞系試驗(yàn)、重建人體組織（眼角膜、皮膚模型）為研究對(duì)象的方法，再發(fā)展至以微生理為基礎(chǔ)的“human-on-chips”或者稱為“l(fā)ab-on-chips”的芯片技術(shù)，以及以計(jì)算機(jī)技術(shù)為基礎(chǔ)的定量構(gòu)效關(guān)系（QSAR）。

化妝品安全性評(píng)價(jià)中，經(jīng)過驗(yàn)證的評(píng)價(jià)局部毒性替代方法較多，包括皮膚刺激（腐蝕）性、眼刺激（腐蝕）性、皮膚光毒性、皮膚致敏性等，可以實(shí)現(xiàn)通過單一方法或幾種替代方法組合的策略評(píng)價(jià)化妝品及其配方、原料的安全性，且在評(píng)價(jià)過程中完全不使用整體動(dòng)物試驗(yàn)。但是在全身毒性試驗(yàn)方面（遺傳毒性、致癌性、胚胎毒性等），至今還沒有可以完全取消動(dòng)物試驗(yàn)的策略，尤其是亞急性和長(zhǎng)期毒性的評(píng)估中，仍然依賴整體動(dòng)物試驗(yàn)來提供可靠的數(shù)據(jù)。根據(jù)替代方法的研究和使用經(jīng)驗(yàn)，科學(xué)界逐步形成了根據(jù)特定的毒理學(xué)終點(diǎn)，“自上而下”或“自下而上”地有序選擇一系列試驗(yàn)形成“組合策略”，達(dá)到有效篩選毒性的目的。例如評(píng)價(jià)一個(gè)受試物的眼刺激性，可以從評(píng)價(jià)腐蝕性的試驗(yàn)開始，一直測(cè)到評(píng)價(jià)刺激性的試驗(yàn)結(jié)束，或反過來檢測(cè)。組合策略可以高效快速地篩選出結(jié)果，也可以彌補(bǔ)單一試驗(yàn)的局限性問題。近一兩年的 OECD 化學(xué)品檢驗(yàn)指南中，每一個(gè)試驗(yàn)更新版的名稱由原來僅有方法名稱調(diào)整為增加試驗(yàn)?zāi)康募斑m用條件的形式［11］，更加方便進(jìn)行選擇。

3 體外替代方法的驗(yàn)證和使用情況

美國(guó) ICCVAM、歐盟 ECVAM、日本 JaCVAM 和OECD 化學(xué)品檢驗(yàn)指南的官方網(wǎng)站上收錄了一系列的體外方法，我們對(duì)其中適用于化妝品的安全評(píng)價(jià)的試驗(yàn)驗(yàn)證進(jìn)展進(jìn)行了總結(jié)，其具體內(nèi)容見表 1。

3.1 眼刺激（腐蝕）性試驗(yàn)

眼部毒性的試驗(yàn)方法研究的很多，可用的替代方法也很多。OECD 認(rèn)可的試驗(yàn)就有 5 個(gè)：牛眼角膜滲透性通透性試驗(yàn)（BCOP）［12］、離體雞眼試驗(yàn)（ICE）［13］、細(xì)胞培養(yǎng)型的熒光素滲漏試驗(yàn)（FL）［14］、體外短時(shí)間暴露試驗(yàn)［15］、重組人角膜組織試驗(yàn)［16］，還有一個(gè)正在驗(yàn)證中的細(xì)胞傳感器微生理儀試驗(yàn)（CM）。除 OECD 和美國(guó)已經(jīng)驗(yàn)證的方法外，歐盟 ECVAM 驗(yàn)證過的方法還有雞胚尿囊膜-絨毛膜試驗(yàn)（HET-CAM）、紅細(xì)胞溶血法（RBC）、中性紅釋放法和離體兔眼法。目前，國(guó)際上最常用的方法是 BCOP，但由于東方人的飲食習(xí)慣和宗教信仰等原因獲取牛角膜有一定難度，加上科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，豬眼角膜在生理及反應(yīng)結(jié)果方面與人角膜更為接近，因此也開始有利用豬眼角膜進(jìn)行滲透性通透性試驗(yàn)的研究［17-19］。

眼刺激（腐蝕）性試驗(yàn)中，單一的替代方法是無法完全涵蓋整體動(dòng)物試驗(yàn)所適合的所有刺激性等級(jí)范圍以及所有種類的物質(zhì)和產(chǎn)品的，也無法覆蓋動(dòng)物試驗(yàn)的損傷及炎癥的標(biāo)準(zhǔn)范圍。由于每一個(gè)替代方法均有其局限性，因此通常采用組合策略，來實(shí)現(xiàn)完全覆蓋動(dòng)物試驗(yàn)所顯示的刺激性范圍［6］。

眼刺激（腐蝕）性的替代方法研究思路從最初的離體眼球類的試驗(yàn)（離體兔眼、離體雞眼）發(fā)展到利用屠宰場(chǎng)廢料的 BCOP 試驗(yàn)，從模擬眼睛毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)的雞胚尿囊膜-絨毛膜試驗(yàn)，發(fā)展到體外細(xì)胞系試驗(yàn)（熒光素滲漏試驗(yàn)、短時(shí)暴露試驗(yàn)、細(xì)胞傳感微生理試驗(yàn)）再到體外重組人體角膜試驗(yàn)，其發(fā)展歷程充分體現(xiàn)了減少、優(yōu)化、替代的“3R”原則。

3.2 皮膚刺激（腐蝕）性試驗(yàn)

目前，OECD 認(rèn)可的皮膚刺激（腐蝕）性的替代試驗(yàn)只有 3 類：大鼠經(jīng)皮電阻試驗(yàn)（TER）［20］、體外皮膚刺激性和腐蝕性的重組人表皮模型試驗(yàn)（RHE）［21-22］和體外皮膚腐蝕性膜屏障試驗(yàn)［23］。其中人工皮膚模型類的試驗(yàn)因其使用的試驗(yàn)材料為體外培養(yǎng)的人永生化細(xì)胞系，模擬表皮和真皮的生理結(jié)構(gòu)進(jìn)行培養(yǎng)，所以結(jié)果與人體結(jié)果的相關(guān)度較高，很多化妝品企業(yè)選擇皮膚模型進(jìn)行產(chǎn)品的研發(fā)和質(zhì)量控制，為了可以篩選到刺激性更小的產(chǎn)品，如嬰兒無淚沐浴產(chǎn)品等。但 OECD 的標(biāo)準(zhǔn)中認(rèn)可的皮膚模型僅有 4 種（Episkin、EpiDerm、SkinEthic 和 epiCS）［21-22］，均為國(guó)外生產(chǎn)的，如在我國(guó)使用，培養(yǎng)和運(yùn)輸成本將提高。由于皮膚模型屬于生物活性材料，運(yùn)輸和使用的日期將直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。體外皮膚腐蝕性膜屏障試驗(yàn)主要用于評(píng)價(jià)可透皮吸收的化妝品原料的腐蝕性。大鼠經(jīng)皮電阻試驗(yàn)方法（TER）可以滿足評(píng)價(jià)皮膚腐蝕性的需要，但因?yàn)槠湓囼?yàn)材料是實(shí)驗(yàn)大鼠的背部皮膚，因此該方法只能算對(duì)傳統(tǒng)動(dòng)物試驗(yàn)的優(yōu)化，不能滿足化妝品動(dòng)物試驗(yàn)禁令的法規(guī)要求。

3.3 皮膚致敏性試驗(yàn)

皮膚致敏性的替代試驗(yàn)主要有 OECD 于 2010 年發(fā)布的一系列小鼠局部淋巴結(jié)細(xì)胞試驗(yàn)（LLNA、LLNA：DA、LLNA：BrdU-ELISA）［24-25］，以及 2015 年新增加的兩個(gè)體外方法——致敏性化學(xué)測(cè)試方法（KeratinoSens）［26］和體外直接反應(yīng)肽試驗(yàn)（DPRA）［27］。在 2015 年以前，小鼠局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（LLNA）是最為普遍使用的致敏性試驗(yàn)，但其試驗(yàn)材料為試驗(yàn)小鼠的淋巴結(jié)細(xì)胞，因此該系列方法被認(rèn)為是對(duì)傳統(tǒng)動(dòng)物試驗(yàn)的優(yōu)化。在科學(xué)家的不斷努力下，已有很多過敏反應(yīng)毒性機(jī)制的研究，2015 年新增的化學(xué)法和直接反應(yīng)肽試驗(yàn)就是基于過敏反應(yīng)機(jī)制的方法，經(jīng)過多年驗(yàn)證后發(fā)布的體外試驗(yàn)方法。此外，LLNA：BrdU-Flow Cytometry的方法是對(duì) LLNA：BrdU-ELISA 方法中發(fā)光物質(zhì) BrdU檢測(cè)手段的改進(jìn)。人細(xì)胞系 h-CLAT 法、IL8 Luciferase法和 Myeloid U937 法，也都是基于過敏機(jī)制設(shè)計(jì)的體外方法。

3.4 皮膚光毒性

國(guó)際上普遍認(rèn)可的皮膚光毒性體外試驗(yàn)，僅 3T3 細(xì)胞中性紅攝取試驗(yàn)一種（3T3 NRU）［28］。日本動(dòng)物替代試驗(yàn)研究中心還發(fā)布了 2 個(gè)試驗(yàn)方法：活性氧試驗(yàn)（ROS）和酵母紅細(xì)胞試驗(yàn)（Yeast-RBC），但目前沒有其他國(guó)家和地區(qū)驗(yàn)證或發(fā)布這兩種方法。

表 1 化妝品相關(guān)替代方法的驗(yàn)證進(jìn)展

3.5 皮膚吸收試驗(yàn)

我國(guó)的化妝品安全技術(shù)規(guī)范中并沒有這類試驗(yàn)，但皮膚吸收率是化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中評(píng)價(jià)暴露量的重要參數(shù)之一，對(duì)化妝品原料或配方的安全性評(píng)價(jià)都有重要意義。無論是體外還是體內(nèi)的試驗(yàn)都是通過檢測(cè)放射性同位素的滲透量來評(píng)估被測(cè)物質(zhì)的吸收量，體外試驗(yàn)采取離體的人或動(dòng)物的皮膚來進(jìn)行［29］。

3.6 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

OECD 認(rèn)可的方法有：固定劑量程序法（FDP）、上下程序法（UDP）、急性毒性分類法（ATC）以及 Balb/c 3T3 細(xì)胞法和 NHK 細(xì)胞法［30-32］。前 3 個(gè)方法雖仍需要使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，但大大減少了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用量，而后 2 個(gè)試驗(yàn)是基于細(xì)胞毒性的體外試驗(yàn)方法。OECD 早在 2002 年就已刪除了傳統(tǒng)的以死亡為毒理學(xué)終點(diǎn)檢測(cè) LD50的方法。在化妝品安全性評(píng)價(jià)中，急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)的結(jié)果主要作為化妝品原料毒性分級(jí)、標(biāo)簽標(biāo)識(shí)以及確定亞慢性毒性試驗(yàn)和其他毒理學(xué)試驗(yàn)劑量的依據(jù)［3］。

3.7 遺傳毒性試驗(yàn)

遺傳毒性試驗(yàn)一般是用于評(píng)價(jià)化妝品原料及染發(fā)（不含涂染型暫時(shí)性產(chǎn)品，如可沖洗掉的染料）、育發(fā)、美乳、健美類化妝品產(chǎn)品的遺傳毒性的試驗(yàn)［3］。遺傳毒性的替代試驗(yàn)有 Ames 試驗(yàn)（微生物試驗(yàn)）、體外微核試驗(yàn)（OECD TG487、490）［33-34］、彗星試驗(yàn)（Comet Assay）。

4 我國(guó)體外替代方法的研究現(xiàn)狀及思考

4.1 相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)

雖然我國(guó)對(duì)于替代方法的研究起步較晚，但已有一些相關(guān)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)出臺(tái)。2009 年底，國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局參考 OECD 的《化學(xué)品測(cè)試方法指南》第四部分［11］，陸續(xù)發(fā)布了 12 個(gè)針對(duì)化學(xué)品和化妝品動(dòng)物替代試驗(yàn)及檢驗(yàn)相關(guān)規(guī)范的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）［35-46］。2012 年 2 月，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局對(duì)化妝品用化學(xué)原料體外 3T3 中性紅攝取光毒性試驗(yàn)方法面向社會(huì)公開征求意見［47］。

2013 年 12 月，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布了《關(guān)于調(diào)整化妝品注冊(cè)備案管理有關(guān)事宜的通告》（2013 年第10 號(hào)通告）［48］，明確國(guó)產(chǎn)非特殊用途化妝品“風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果能夠充分確認(rèn)產(chǎn)品安全性的，可免予產(chǎn)品的相關(guān)毒理學(xué)試驗(yàn)”。2015 年，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局起草了《化妝品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南》（征求意見稿），其中指出化妝品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估能有效地反映出化妝品的潛在風(fēng)險(xiǎn)，一定程度上可以替代終產(chǎn)品毒理學(xué)試驗(yàn)［49］。

4.2 我國(guó)替代方法研究遇到的問題及挑戰(zhàn)

在化妝品安全性評(píng)價(jià)方面，國(guó)際上已認(rèn)可的化妝品替代試驗(yàn)方法很多，但替代試驗(yàn)用于評(píng)價(jià)化妝品終產(chǎn)品的數(shù)據(jù)并不多。在我國(guó)，相對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)，替代試驗(yàn)存在原材料未規(guī)模化生產(chǎn)，試驗(yàn)材料成本高，必需的配套儀器未國(guó)產(chǎn)化，很難獲得等缺點(diǎn)。因此，替代試驗(yàn)在我國(guó)推廣實(shí)施存在一定的困難。

如前所述的化妝品眼刺激替代試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法中，歐美國(guó)家普遍認(rèn)可 BCOP，對(duì)我國(guó)很多地區(qū)甚至化妝品產(chǎn)地集中的廣東省、江浙滬地區(qū)來說，獲取大量新鮮的牛角膜有一定困難。又比如化妝品皮膚刺激（腐蝕）性評(píng)價(jià)的方法，國(guó)際上公認(rèn)的人工三維皮膚模型可以節(jié)約試驗(yàn)成本，但皮膚模型屬于生物材料，保質(zhì)期短，若使用 OECD 認(rèn)可的模型，運(yùn)輸周期長(zhǎng)、運(yùn)輸成本高，會(huì)造成測(cè)試結(jié)果的偏差，因此我國(guó)要想發(fā)展體外模型類的替代試驗(yàn)，需要有自主研發(fā)的產(chǎn)品。

OECD 認(rèn)可的替代方法很多針對(duì)的是“化學(xué)品”或“混合物”，可用于評(píng)價(jià)化妝品原料和配方的安全性。而目前我國(guó)采取的許可管理制度，主要是對(duì)化妝品終產(chǎn)品進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，原料和終產(chǎn)品的安全性評(píng)價(jià)結(jié)果和方法存在差異。因此，對(duì)國(guó)際上已認(rèn)可的動(dòng)物替代方法，是否適合中國(guó)的需求，需要進(jìn)一步的評(píng)估確認(rèn)和驗(yàn)證，不能只是簡(jiǎn)單的方法轉(zhuǎn)移。

4.3 我國(guó)替代方法的前景和思考

替代試驗(yàn)是毒理學(xué)評(píng)價(jià)技術(shù)的進(jìn)步，替代試驗(yàn)方法的研究是國(guó)際化妝品監(jiān)管趨勢(shì)所向。我國(guó)作為全球第二大經(jīng)濟(jì)體，在技術(shù)上應(yīng)該有話語權(quán)，因此，我國(guó)應(yīng)積極推動(dòng)化妝品替代毒理學(xué)方法研究與驗(yàn)證體系的建設(shè)，建立一套適應(yīng)我國(guó)國(guó)情的化妝品動(dòng)物體外試驗(yàn)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，完善化妝品質(zhì)量監(jiān)管的技術(shù)支撐體系，以保障化妝品質(zhì)量安全，促進(jìn)化妝品行業(yè)發(fā)展。

替代方法在開發(fā)研究、驗(yàn)證（validation）或轉(zhuǎn)移確認(rèn)（verification）時(shí)，應(yīng)充分考慮方法的可操作性、在中國(guó)的適用性及方法本身的使用條件等因素。很多國(guó)際上已驗(yàn)證過的方法，如 OECD 的化學(xué)品指南，針對(duì)的是“化學(xué)品”或“混合物”。中國(guó)化妝品中，有一些植物提取物或根據(jù)中藥配方改良的產(chǎn)品，是否包含在 OECD 方法描述的“混合物”范圍內(nèi)，有待進(jìn)一步的考證。另外，在選擇替代試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，也要考慮到化妝品產(chǎn)品的形狀和顏色的影響，有些細(xì)胞毒性的方法，不適合檢測(cè)膏霜狀物質(zhì)或難溶的粉狀樣品，有些利用 MTT 染色或通過吸光度值來計(jì)算毒性結(jié)果的替代方法，被測(cè)化妝品的顏色和形狀也可能影響結(jié)果。

5 小結(jié)

綜上所述，雖然成熟的替代方法還有待于進(jìn)一步研究和驗(yàn)證，但是其發(fā)展方向毋庸置疑。對(duì)我國(guó)來說，替代方法的研究、驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移確認(rèn)、法規(guī)認(rèn)可非常迫切，應(yīng)盡快建立起一套新的適應(yīng)國(guó)際要求的標(biāo)準(zhǔn)體系。

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10.3969/j.issn.1673-713X.2016.05.016

100050 北京，中國(guó)食品藥品檢定研究院食品化妝品檢定所

王鋼力，Email：wanggl@nifdc.org.cn

2016-07-19