李 信，楊曉菲，馬 兵，陳志剛，王長(zhǎng)有，陳春環(huán)，田增榮，吉萬(wàn)全

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院/旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,陜西楊凌 712100;2.陜西省種子管理站,陜西西安 710021；3.陜西省興平市種子管理站，陜西興平 713100)

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抗條銹病小麥-濱麥衍生后代的分子細(xì)胞遺傳學(xué)鑒定

李 信1，楊曉菲1，馬 兵2，陳志剛3，王長(zhǎng)有1，陳春環(huán)1，田增榮1，吉萬(wàn)全1

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院/旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,陜西楊凌 712100;2.陜西省種子管理站,陜西西安 710021；3.陜西省興平市種子管理站，陜西興平 713100)

為了有效挖掘?yàn)I麥優(yōu)異的基因資源，利用形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、熒光原位雜交 (FISH)、基因組原位雜交(GISH) 和分子標(biāo)記等技術(shù)，對(duì)小麥-濱麥衍生后代M13063-3-3進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明，M13063-3-3的染色體構(gòu)型為2n=44=22Ⅱ。以濱麥基因組DNA為探針的原位雜交結(jié)果顯示，二條染色體有雜交信號(hào)，且能配對(duì)，表明兩條外源染色體是濱麥的一對(duì)同源染色體。SSR、EST和PLUG標(biāo)記分析表明，M13063-3-3附加的濱麥染色體歸屬于第6部分同源群染色體。A-PAGE電泳分析表明，M13063-3-3在α區(qū)具有濱麥染色體特征帶，進(jìn)一步驗(yàn)證了附加的濱麥染色體與小麥第6部分同源群染色體有部分同源關(guān)系。田間條銹病調(diào)查結(jié)果表明，M13063-3-3對(duì)條銹菌生理小種條中31號(hào)、條中32號(hào)和條中33號(hào)混合菌種表現(xiàn)高抗。因此，M13063-3-3是一個(gè)附加了一對(duì)濱麥第6部分同源群染色體的抗條銹病的普通小麥材料，為小麥抗病育種提供了新的種質(zhì)資源。

普通小麥；濱麥；衍生后代；條銹病；原位雜交；分子標(biāo)記

Molecular Cytogenetics Identification of a Wheat-LeymusmollisDerivative with Resistance to Stripe Rust

條銹病是由小麥條銹菌(Pucciniastriiformisf.sp.tritici)引起的一種世界性小麥氣傳病害，具有爆發(fā)強(qiáng)、流行快、發(fā)生范圍廣和危害性大等特點(diǎn)，對(duì)我國(guó)小麥生產(chǎn)有著嚴(yán)重影響[1]。通過(guò)抗病品種來(lái)防治條銹病是最經(jīng)濟(jì)、有效和環(huán)境可接受的措施[2]。然而由于病原菌毒性小種的變異和抗病品種抗源的單一化，導(dǎo)致許多品種很快就喪失了抗病性，因此，篩選和利用新的和有效的抗條銹病基因，是實(shí)現(xiàn)有效防治條銹病的當(dāng)務(wù)之急和長(zhǎng)遠(yuǎn)任務(wù)。

濱麥(Leymusmollis，2n=28)是禾本科(Poaceae)小麥族(Triticeae)大麥亞族(Hordinae)賴草屬(LeymusHochst.)的一個(gè)異花授粉異源四倍體多年生植物，對(duì)小麥條銹病、白粉病、葉銹病等多種真菌病害具有良好抗性，同時(shí)還具有耐鹽堿、莖稈粗壯、大穗多花等許多其他優(yōu)良性狀，是進(jìn)行小麥品種改良的三級(jí)基因源。早在20世紀(jì)50年代，蘇聯(lián)科學(xué)家開(kāi)始進(jìn)行小麥和賴草屬包括濱麥的雜交，經(jīng)胚拯救技術(shù)獲得了四倍體、六倍體小麥與濱麥的雜種。20世紀(jì)60年代獲得了雜種的雙二倍體。20世紀(jì)70年代獲得了硬粒小麥與濱麥的不完全雙二倍體。20世紀(jì)90年代，傅 杰等[3-5]通過(guò)秋水仙堿處理和回交的方法首次獲得了八倍體小濱麥(Octoploidtritileymus)，進(jìn)而利用八倍體小濱麥和缺體小麥雜交和回交，創(chuàng)造了大穗、多花、優(yōu)質(zhì)、抗多種病害的小麥-濱麥異代換系；利用八倍體小濱麥和普通小麥雜交和回交，創(chuàng)造了大穗、大粒、優(yōu)質(zhì)、抗病的小麥-濱麥異附加系。周兗晨等[6]從普通小麥和濱麥的雜交后代篩選到一個(gè)抗條銹病的小麥-濱麥異易位系93784，熒光原位雜交結(jié)果表明，易位的濱麥染色體片段位于一對(duì)小麥染色體的短臂端部。王獻(xiàn)平等[7]通過(guò)GISH技術(shù)在小麥-濱麥異代換系與離果山羊草異附加系的雜交后代中獲得3株小麥-濱麥異易位系，進(jìn)而利用C-分帶技術(shù)證明其中一個(gè)異易位系是整臂易位。趙繼新等[8]將八倍體小濱麥M842-12與硬粒小麥Trs372雜交，利用細(xì)胞學(xué)、GISH、SSR和PAGE的方法鑒定出一個(gè)普通小麥-濱麥的多重異代換系。王金平等[9]利用抗性接種鑒定、細(xì)胞學(xué)和SSR分子標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合的方法對(duì)兼抗白粉病和條銹病的小濱麥種質(zhì)系山農(nóng)6343進(jìn)行鑒定。陸文輝等[10]利用細(xì)胞學(xué)、RAPD分析和熒光原位雜交技術(shù)鑒定出一個(gè)抗條銹小濱麥易位系山農(nóng)0096。Yang等[11]通過(guò)細(xì)胞學(xué)、GISH、FISH-GISH、EST和PLUG分子標(biāo)記技術(shù)鑒定出一個(gè)抗條銹病的普通小麥-濱麥的二體異代換系M11003-3-1-15-8。

M13063-3-3是由普通小麥7182和濱麥雜交，用普通小麥山農(nóng)20回交了一次，然后連續(xù)自交所得的體細(xì)胞染色體數(shù)目為44的小麥-濱麥衍生后代。本研究應(yīng)用細(xì)胞學(xué)、原位雜交(FISH和GISH)、分子標(biāo)記和生化標(biāo)記等技術(shù)，結(jié)合形態(tài)學(xué)和條銹病抗性調(diào)查，對(duì)小麥-濱麥衍生后代M13063-3-3進(jìn)行鑒定，以期了解其遺傳行為和染色體構(gòu)成，明確其所攜帶的濱麥的染色體及其抗病特性，并對(duì)其外源染色體的同源群歸屬進(jìn)行確定，為小麥抗病育種和染色體工程育種提供新的種質(zhì)資源。

1　材料與方法

1.1材 料

供試材料包括八倍體小濱麥、濱麥、普通小麥-濱麥衍生后代M13063-3-3及普通小麥品種7182、山農(nóng)20、中國(guó)春和輝縣紅，均由西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院染色體工程實(shí)驗(yàn)室提供。條銹病抗性鑒定所用條銹菌生理小種條中31號(hào)、條中32號(hào)和條中33號(hào)混合小種由西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院提供。

1.2方 法

1.2.1形態(tài)學(xué)調(diào)查和條銹病抗性鑒定

在成熟期調(diào)查材料的株高、穗長(zhǎng)、小穗粒數(shù)、每穗小穗數(shù)、穗型和芒型等性狀，記載標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[12]。成株期條銹病抗性鑒定在西北農(nóng)林科技大學(xué)試驗(yàn)田進(jìn)行。10月初播種鑒定材料和感病對(duì)照輝縣紅，翌年3月中旬采用撒粉接種法接種條中31號(hào)、條中32號(hào)和條中33號(hào)混合小種，在輝縣紅充分發(fā)病時(shí)調(diào)查鑒定材料的反應(yīng)型，5 d后復(fù)查一次。反應(yīng)型記載標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[13]。

1.2.2DNA提取

采用CTAB法[14]提取供試材料的基因組DNA。

1.2.3細(xì)胞學(xué)觀察

(1)根尖細(xì)胞染色體數(shù)目鑒定

將M13063-3-3種子放入培養(yǎng)皿內(nèi)，室溫下浸泡至露白，4 ℃低溫處理24 h，然后將露白種子用鑷子轉(zhuǎn)移到墊有2層濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，放入23 ℃培養(yǎng)箱發(fā)芽，當(dāng)根長(zhǎng)為1.2～2.0 cm時(shí)切下根尖放入冰水中處理24 h，然后用卡諾氏Ⅰ固定液(乙醇∶冰乙酸=3∶1)固定，于-20 ℃冰箱保存。一周后，根尖轉(zhuǎn)入70%酒精中，45%醋酸洋紅染色后制片，鏡檢。

(2)花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂中期I(PMC MI)染色體構(gòu)型觀察

田間選取適齡幼穗，用卡諾氏Ⅱ固定液(乙醇∶氯仿∶冰乙酸=6∶3∶1)固定24 h，轉(zhuǎn)入70%酒精中，45%醋酸洋紅染色后制片，鏡檢。

1.2.4原位雜交

(1)材料處理

將M13063-3-3的根尖和幼穗固定2～5 d后分別用體積分?jǐn)?shù)45%的醋酸壓片，液氮冷凍揭片，氣干備用。

(2)探針標(biāo)記

采用切口平移法用Dig-Nick-Translation Mix(Roche Germany)標(biāo)記濱麥基因組DNA。

(3)原位雜交

參照Tang等[15]的方法，利用寡核苷酸探針Oligo-pTa535、Oligo-pSc119.2和濱麥基因組DNA探針先后對(duì)根尖體細(xì)胞進(jìn)行FISH和GISH分析。參照Cuadrado等[16]的方法，對(duì)花粉母細(xì)胞進(jìn)行分析。OLYMPUS BX53熒光顯微鏡觀察檢測(cè)，用CCD成像系統(tǒng)照相，并用軟件Adobe Photoshop CS6進(jìn)行圖像處理。

1.2.5SSR標(biāo)記和EST-STS標(biāo)記分析

根據(jù)R?der等[17]和Pestsova等[18]公布的小麥SSR標(biāo)記，選取定位于小麥7個(gè)部分同源群上的70對(duì)SSR引物進(jìn)行擴(kuò)增。根據(jù)網(wǎng)站http://wheat.pw.usda.gov/SNP/new /pcr_primers.shtml公布的STS引物信息，選取定位于小麥7個(gè)部分同源群上的70對(duì)引物進(jìn)行擴(kuò)增。所選引物均由北京奧科鼎盛生物技術(shù)有限公司合成。PCR反應(yīng)在擴(kuò)增儀ABI-9700上進(jìn)行。反應(yīng)體系(10 μL)：1.0 μL 10 × PCR Buffer(Mg2+)，1.0 μL 2.5 mmol·L-1dNTPs，每個(gè)引物(5 μmol·L-1)1.0 μL，0.1 μL 5 U·μL-1Taq酶，50～100 ng基因組DNA，加ddH2O補(bǔ)至10 μL。反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，50/55/60 ℃(根據(jù)引物選擇)退火45 s，72 ℃延伸50 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。PCR產(chǎn)物采用8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，具體參照吳金華等[19]的方法，經(jīng)硝酸銀染色后觀察并照相。

1.2.6PLUG標(biāo)記分析

根據(jù)Ishikawa等[20]發(fā)表的引物序列，選取分布于小麥7個(gè)部分同源群上的56對(duì)PLUG(PCR-based landmark unique gene)引物(由北京奧科鼎盛生物技術(shù)有限公司合成)進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)在擴(kuò)增儀ABI-9700上進(jìn)行。反應(yīng)體系(10 μL)：1.0 μL 10 × PCR Buffer(Mg2+)，1.0 μL 2.5 mmol·L-1dNTPs，每個(gè)引物(5 μmol·L-1)1.0 μL，0.1 μL 5 U·μL-1Taq酶，50～100 ng基因組DNA，加ddH2O補(bǔ)至10 μL。反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性45 s，60 ℃ 退火45 s，72 ℃延伸2 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。PCR產(chǎn)物用TaqⅠ酶進(jìn)行酶切后，采用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，110 V穩(wěn)壓電泳30 min，溴化乙錠(EB)染色觀察并拍照。

1.2.7A-PAGE分析

取單粒種子，研碎后按1 mg樣品加5 μL樣品提取液的比例加入樣品提取液，室溫浸提過(guò)夜，15 000 r·min-1離心10 min，取上清液，5 μL點(diǎn)樣電泳。凝膠溶液質(zhì)量濃度(T)為100 g·L-1，1倍體積的冰乙酸-甘氨酸電極緩沖液在500 V條件下恒壓電泳，電泳時(shí)間為甲基綠前沿指示劑遷移至板底所需時(shí)間的3倍。最后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%考馬斯亮藍(lán)和10%三氯乙酸染色過(guò)夜，經(jīng)7%乙酸脫色后觀察并照相。

2　結(jié)果與分析

2.1形態(tài)學(xué)分析

普通小麥7182、濱麥及二者的衍生后代M13063-3-3的農(nóng)藝性狀調(diào)查結(jié)果(表1)表明，M13063-3-3的株高、穗長(zhǎng)、小穗粒數(shù)、每穗小穗數(shù)、芒型與親本7182無(wú)顯著性差異，株高、穗長(zhǎng)與親本濱麥具有顯著性差異，每穗小穗數(shù)、穗型與親本濱麥無(wú)顯著性差異。整體來(lái)看，M13063-3-3農(nóng)藝性狀穩(wěn)定，是較好的遺傳材料。

2.2條銹病抗性分析

成株期條銹病抗性鑒定結(jié)果(圖1)表明，感病對(duì)照品種輝縣紅對(duì)條銹菌生理小種條中31號(hào)、條中32號(hào)和條中33號(hào)混合小種的反應(yīng)型為4級(jí)，表現(xiàn)高感條銹??；親本普通小麥7182的反應(yīng)型為3級(jí)，表現(xiàn)中感條銹??；濱麥的反應(yīng)型為0級(jí)，表現(xiàn)為對(duì)條銹病免疫；M13063-3-3的反應(yīng)型為1級(jí)，表現(xiàn)高抗條銹病。說(shuō)明M13063-3-3具有條銹病抗性基因，攜帶的抗性基因來(lái)自濱麥。

2.3細(xì)胞學(xué)分析

對(duì)M13063-3-3進(jìn)行根尖有絲分裂及花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂中期I染色體制片觀察，發(fā)現(xiàn)M13063-3-3根尖細(xì)胞染色體數(shù)目為2n=44(圖2a)；在觀察的59個(gè)細(xì)胞中，56個(gè)花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂中期I染色體具有22II構(gòu)型，其中環(huán)狀二價(jià)體平均為19.01個(gè)，棒狀二價(jià)體平均為1.86個(gè)，沒(méi)有三價(jià)體和四價(jià)體的出現(xiàn)(圖2b和表2)，表明M13063-3-3在細(xì)胞遺傳學(xué)上基本穩(wěn)定，可能是普通小麥附加一對(duì)濱麥染色體。

表1　M13063-3-3及其親本的農(nóng)藝性狀Table 1　Agronomic characters of M13063-3-3 and its parents

-代表沒(méi)有數(shù)據(jù)；同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示不同材料間差異在0.05水平上顯著

- represents no data; Values followed by different letters are significantly different at 0.05 level

1：輝縣紅；2：7182；3：濱麥；4：M13063-3-3　　1:Huixianhong; 2:7182; 3:Leymus mollis; 4:M13063-3-3圖1　M13063-3-3及其親本的條銹病抗性Fig.1　Stripe rust reactions of M13063-3-3 and its parents

圖2　M13063-3-3根尖細(xì)胞(a)和花粉母細(xì)胞(b)觀察Fig.2　Cytogenetic observation of root-tip cell (a) and pollen mother cell (b) of M13063-3-3

2.4原位雜交分析

以O(shè)ligo-pTa535、Oligo-pSc119.2、濱麥基因組DNA為探針，對(duì)M13063-3-3根尖體細(xì)胞進(jìn)行原位雜交鑒定，結(jié)果顯示，根尖體細(xì)胞中有42條完整的小麥染色體 (圖3a) 和2條帶有明顯藍(lán)綠色雜交信號(hào)的染色體 (圖3b)，表明該材料含有42條普通小麥染色體和2條濱麥染色體?；ǚ勰讣?xì)胞減數(shù)分裂中期I基因組原位雜交結(jié)果顯示，有1個(gè)二價(jià)體顯示黃色雜交信號(hào)，表明這2條外源染色體能夠完全配對(duì) (圖3c)，說(shuō)明M13063-3-3中的2條外源染色體是濱麥的一對(duì)染色體。

表2　M13063-3-3花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂中期 I (PMC MI)不同染色體結(jié)構(gòu)數(shù)目Table 2　Number of different chromosome configurations at metaphase I in pollen mother cells of M13063-3-3

括號(hào)中的數(shù)值為變化范圍

The values in the brackets are the ranges

a：以O(shè)ligo-pTa535(紅色)、Oligo-pSc119.2(綠色)為探針在根尖細(xì)胞進(jìn)行熒光原位雜交；b：以濱麥基因組DNA(藍(lán)綠色)為探針在根尖細(xì)胞進(jìn)行熒光原位雜交；c：以濱麥基因組DNA(黃色)為探針在花粉母細(xì)胞進(jìn)行基因組原位雜交

a:FISH analysis using Oligo-pTa535 (red) and Oligo-pSc119.2 (green) as probes on root tip cell chromosome; b:FISH analysis usingLeymusmollisgenomic DNA (blue-green) as probes on root tip cell chromosome; c:GISH analysis usingLeymusmollisgenomic DNA (yellow) as probes on pollen mother cell chromosome

圖3M13063-3-3熒光原位雜交和基因組原位雜交

Fig.3 Fluorescenceinsituhybridization and genomicinsituhybridization of M13063-3-3

2.5SSR、EST-STS和PLUG標(biāo)記分析

用分布在小麥7個(gè)部分同源群上的70對(duì)SSR引物、70對(duì)EST-STS引物和56對(duì)PLUG引物對(duì)M13063-3-3及其親本進(jìn)行分子標(biāo)記分析表明，3對(duì)定位于小麥第6部分同源群上的SSR標(biāo)記Xwmc417、Xwmc487和Xwmc748在M13063-3-3及濱麥基因組DNA均擴(kuò)增出特異條帶，分別約150 bp(圖4a)、175 bp(圖4b)和80 bp(圖4c)，而在普通小麥7182中無(wú)此條帶。3對(duì)定位于小麥第6部分同源群上的EST-STS標(biāo)記CD452568、BQ167013和BF483643在M13063-3-3及濱麥基因組DNA均擴(kuò)增出特異條帶，分別約248 bp和260 bp(圖4d)、400 bp(圖4e)和875 bp(圖4f)，而在普通小麥7182中無(wú)此條帶。2對(duì)定位于小麥第6部分同源群上的PLUG引物TNAC1677和TNAC1679在M13063-3-3及濱麥基因組DNA均擴(kuò)增出特異條帶，分別約850 bp(圖4g)和900 bp(圖4h)，而在普通小麥7182中無(wú)此條帶。這些結(jié)果表明，M13063-3-3附加的一對(duì)濱麥染色體歸屬于第6部分同源群染色體。

2.6A-PAGE分析

醇溶蛋白A-PAGE電泳圖譜分析結(jié)果表明，M13063-3-3除具有親本7182的帶型之外，在α區(qū)還具有來(lái)自濱麥的特異帶型，而在該位置親本7182沒(méi)有譜帶(圖5)。由于編碼α區(qū)蛋白的基因定位在第6部分同源染色體臂上，因此A-PAGE電泳分析進(jìn)一步證明附加的一對(duì)濱麥染色體屬于第6部分同源群。

M：DNA marker DL2000；1：7182；2：濱麥；3：M13063-3-3；箭頭所指為濱麥特異條帶

M:DNA marker DL2000; 1:7182; 2:Leymusmollis; 3:M13063-3-3; Arrows indicate the specific band ofLeymusmollis

圖4SSR、EST-STS和PLUG引物擴(kuò)增圖譜

Fig.4Amplification profile of SSR,EST-STS and PLUG markers

1：中國(guó)春；2:7182；3：八倍體小濱麥；4：M13063-3-3；箭頭為濱麥特異條帶

1:Chinese Spring; 2:7182; 3:Octoploidtritileymus; 4:M13063-3-3; Arrow indicates the specific band ofLeymusmollis

圖5A-PAGE電泳結(jié)果

Fig.5A-PAGE analysis

3　討 論

小麥近緣種屬遺傳物質(zhì)導(dǎo)入到普通小麥后，常用的檢測(cè)手段包括形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞學(xué)鑒定、原位雜交、生化和分子標(biāo)記技術(shù)等。與其他幾種檢測(cè)方法相比，分子標(biāo)記具有簡(jiǎn)便快捷、多態(tài)性高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于現(xiàn)代作物遺傳育種研究的各個(gè)方面。吳金華等[21]通過(guò)SSR標(biāo)記分析小麥-黑麥二體異附加系N9436-0-2-29-9附加的黑麥染色體來(lái)自第6部分同源群。韓顏超[22]等通過(guò)EST-STS標(biāo)記分析發(fā)現(xiàn)小麥-華山新麥草二體異附加系H1-1-3-1-9-8附加的華山新麥草染色體來(lái)自第1部分同源群。Hu等[23]通過(guò)PLUG引物分析發(fā)現(xiàn)小麥-中間偃麥草異代換系A(chǔ)S1677中代換的中間偃麥草染色體來(lái)自第1部分同源群。詹海仙等[24]通過(guò)PLUG引物成功鑒定出小麥品系CH5383中的滲入的中間偃麥草DNA片段來(lái)自第3部分同源群。本研究利用分布于小麥7個(gè)部分同源群的SSR、EST-STS和PLUG引物明確了抗條銹病小麥-濱麥衍生后代M13063-3-3的遺傳組成，并將其附加的一對(duì)濱麥染色體歸屬于第6部分同源群。

濱麥?zhǔn)切←溨匾臈l銹病抗性基因來(lái)源。本研究發(fā)現(xiàn)M13063-3-3在成株期對(duì)條銹菌條中31號(hào)、條中32號(hào)和條中33號(hào)混合菌種表現(xiàn)高抗，而親本普通小麥7182表現(xiàn)中感條銹病，表明附加的濱麥染色體攜帶抗條銹病基因。由于附加的濱麥染色體與小麥第6部分同源群染色體具有部分同源關(guān)系，因此在濱麥的第6部分同源群染色體上攜帶抗條銹病基因。Yang等[25]利用細(xì)胞學(xué)、GISH、SSR和EST分子標(biāo)記技術(shù)在普通小麥7182與濱麥雜交后代中鑒定了3個(gè)普通小麥-濱麥的衍生系M42、M47和M51，并發(fā)現(xiàn)M42和M47對(duì)條銹病均具有抗性。王金平等[26]通過(guò)微衛(wèi)星標(biāo)記分析將小濱麥易位系山農(nóng)0096的抗條銹基因定位在4A染色體上。宋曉賀等[27]將小麥-濱麥易位系M8657-1的抗條銹病基因進(jìn)行了遺傳分析和SSR分子標(biāo)記，并將其抗條銹基因定位在7DL染色體上。本實(shí)驗(yàn)小麥-濱麥衍生后代M13063-3-3攜帶的抗病基因所位于部分同源染色體與前面報(bào)道的均不同，可能是新的抗條銹病基因，有待進(jìn)一步研究明確。

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LI Xin1,YANG Xiaofei1,MA Bing2,CHEN Zhigang3,WANG Changyou1,

CHEN Chunhuan1,TIAN Zengrong1,JI Wanquan1

(1.College of Agronomy,Northwest A&F University/State Key Laboratory of Crop Stress Biology for Arid Areas,Yangling,Shaanxi 712100,China; 2.Seeds Management Station of Shaanxi Province,Xi’an,Shaanxi 710021,China;3.Xingping Seeds Management Station of Shaanxi Province,Xingping,Shaanxi 713100,China)

Exploiting and utilizing excellent gene(s) from wild species has become an essential strategy for wheat improvement.The derivative line M13063-3-3,which was developed from the progeny of common wheat (TriticumaestivumL.) cv.7182 andLeymusmollis,was characterized based on cytological observation,fluorescenceinsituhybridization (FISH),genomicinsituhybridization (GISH),simple sequence repeat (SSR),expressed sequence tag (EST),PCR-based landmark unique gene (PLUG) markers and morphological analysis.M13063-3-3 contained 22 bivalents during meiosis,while GISH results detected two alien chromosomes.Three SSR markers,three EST markers and two PLUG markers,which were located on the homoeologous group 6 chromosomes of wheat,amplified polymorphic bands in the derivative line M13063-3-3,which were unique toL.mollis.A-PAGE indicated that α region of M13063-3-3 had the specific band ofL.mollis.The results further showed that the additive chromosomes belong to the homoeologous group 6 chromosomes ofL.mollis.After inoculation using the mixed races of stripe rust (CYR31,CYR32 and CYR33) at the adult stage,M13063-3-3 exhibited high resistance to stripe rust,which was possibly derived fromL.mollis.The high levels of disease resistance make M13063-3-3 a promising germplasm for wheat breeding.

Triticumaestivum;Leymusmollis; Derivative; Strip rust; FISH; GISH; Molecular markers

時(shí)間：2016-05-10

2016-01-04

2016-02-14

國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2013BAD01B02-6)；陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目(2015KTZDNY01-01-02)；西北農(nóng)林科技大學(xué)唐仲英育種基金項(xiàng)目

E-mail:lixin4327@126.com(李 信); yangxiaofei2007@yeah.net(楊曉菲,與第一作者同等貢獻(xiàn))

吉萬(wàn)全(E-mail:jiwanquan2008@126.com)

S512.1；S332

A

1009-1041(2016)05-0556-08

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