熊　火，蔡　欣，劉靜波，*，陳　亮，張宏福

(1．西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，綿陽(yáng) 621010； 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193)

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高脂飼糧對(duì)生長(zhǎng)育肥豬肉品質(zhì)和骨骼肌蛋白質(zhì)組的影響

熊火1，蔡欣1，劉靜波1，2*，陳亮2，張宏福2

(1．西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，綿陽(yáng) 621010； 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193)

本試驗(yàn)旨在研究高脂飼糧對(duì)生長(zhǎng)育肥豬肉品質(zhì)和骨骼肌蛋白質(zhì)組的影響。選擇20頭平均體重為(73.28±0.57) kg的生長(zhǎng)育肥豬，隨機(jī)分為對(duì)照組(對(duì)照飼糧，含10.0%玉米淀粉)和試驗(yàn)組(高脂飼糧，含10.0%豬油)，每個(gè)處理10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬，試驗(yàn)期42 d。研究飼糧脂肪含量對(duì)生長(zhǎng)育肥豬生長(zhǎng)性能、肉品質(zhì)和骨骼肌蛋白質(zhì)表達(dá)譜差異的影響。結(jié)果表明：高脂飼糧顯著提高了生長(zhǎng)育肥豬的平均日增重(P<0.05)，并降低了料重比(P<0.01)。骨骼肌pH45 min、pH24 h、肌內(nèi)脂肪含量、亮度、紅度、黃度、蒸煮損失、滴水損失和剪切力不受飼糧脂肪含量的影響(P>0.05)。蛋白質(zhì)組學(xué)分析表明，飼喂高脂飼糧上調(diào)了生長(zhǎng)育肥豬骨骼肌中鈣網(wǎng)蛋白、肌球蛋白重鏈、加帽蛋白、丙酮酸激酶、烯醇化酶、乳酸脫氫酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶、腺苷酸激酶、載脂蛋白A和B、脂肪酸結(jié)合蛋白、熱休克蛋白27 ku和70 ku等蛋白質(zhì)的表達(dá)量，但下調(diào)了肌球蛋白輕鏈和磷酸葡萄糖變位酶蛋白質(zhì)的表達(dá)量。由此可見(jiàn)，采食高脂飼糧可顯著改善生長(zhǎng)育肥豬的生長(zhǎng)性能，并上調(diào)骨骼肌中與脂質(zhì)代謝、葡萄糖和能量代謝等生物學(xué)功能相關(guān)的蛋白質(zhì)表達(dá)量。

高脂飼糧；肉品質(zhì)；蛋白質(zhì)組學(xué)；豬

能量攝入不足是限制生長(zhǎng)育肥豬后期生長(zhǎng)性能的主要因素，因此，養(yǎng)豬生產(chǎn)常通過(guò)增加飼糧脂肪含量的營(yíng)養(yǎng)途徑改善生長(zhǎng)育肥豬的生長(zhǎng)速度和飼料報(bào)酬[1]。與此同時(shí)，育肥豬脂質(zhì)沉積和肉品質(zhì)也在一定程度上受到飼糧脂肪含量和能量水平提高的影響[2]，但也有研究表明肌內(nèi)脂肪含量不受飼糧脂肪和能量水平的影響[3-4]。此外，前期研究還發(fā)現(xiàn)飼糧添加共軛亞油酸可增加肌內(nèi)脂肪沉積[5]，但也有研究發(fā)現(xiàn)共軛亞油酸對(duì)肌內(nèi)脂肪沉積無(wú)顯著影響或降低肌內(nèi)脂肪含量[6-7]。由此可見(jiàn)，前期關(guān)于飼糧添加脂肪對(duì)生長(zhǎng)育肥豬背膘沉積和肌內(nèi)脂肪沉積的研究結(jié)果并不一致。

將雙向電泳和質(zhì)譜鑒定相結(jié)合的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可有效分析豬骨骼肌中數(shù)以千計(jì)的蛋白質(zhì)表達(dá)量，該技術(shù)目前已被廣泛應(yīng)用于研究生長(zhǎng)模式、飼糧能量來(lái)源和脂肪酸組成對(duì)肉品質(zhì)相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響[8]。因此，為探究飼糧脂肪含量與生長(zhǎng)育肥豬骨骼肌能量代謝和脂質(zhì)代謝等過(guò)程中相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)量之間的關(guān)系，本試驗(yàn)通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究高脂飼糧對(duì)生長(zhǎng)育肥豬肉品質(zhì)和骨骼肌蛋白質(zhì)組的影響，為探索營(yíng)養(yǎng)途徑調(diào)控育肥豬骨骼肌能量代謝和脂質(zhì)代謝奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)和飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇20頭體重(平均體重(73.28±0.57) kg)相似的杜長(zhǎng)大三元雜交去勢(shì)公豬，隨機(jī)分到對(duì)照組(對(duì)照飼糧)和試驗(yàn)組(高脂飼糧)，每個(gè)處理10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬。對(duì)照組飼糧為含有10.0%玉米淀粉的玉米豆粕型飼糧，試驗(yàn)組通過(guò)在對(duì)照組飼糧中添加10.0%的豬油替代玉米淀粉構(gòu)成高脂飼糧，具體飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)期間動(dòng)物飼養(yǎng)于代謝籠內(nèi)，室內(nèi)溫度控制在18～22 ℃，自然光照，自由采食和飲水，試驗(yàn)期42 d。在試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)記錄每頭豬的體重，用于計(jì)算平均日增重。記錄試驗(yàn)期間每頭豬的飼料消耗總量，用于計(jì)算平均日采食量和料重比(平均日采食量/平均日增重)。

1.2樣本收集

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，動(dòng)物空腹8 h后麻醉放血處死，在胸椎與腰椎結(jié)合處收集背最長(zhǎng)肌樣本用于測(cè)定肉品質(zhì)，將蛋白質(zhì)組學(xué)分析的樣品置于液氮中保存。

1.3胴體品質(zhì)和肉品質(zhì)測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1屠宰率屠宰率由胴體重(去除頭、蹄、尾和內(nèi)臟組織后的重量)除以宰前活重計(jì)算得出。

1.3.2平均背膘厚分別測(cè)定左側(cè)胴體肩部最厚處、胸腰結(jié)合處和腰薦結(jié)合處3點(diǎn)的背膘厚度，取平均值作為平均背膘厚。

1.3.3剪切力將新鮮肌肉組織切片后置于水浴鍋中加熱使其中心溫度達(dá)到71 ℃，而后由剪切力測(cè)定儀(Texture Analyser，TA.XT.Plus.Stable Micro system)測(cè)定肌肉樣本的剪切力。1.3.4肌內(nèi)脂肪將5 g左右肌肉樣本冷凍干燥后采用索氏抽提法提取油脂后用于計(jì)算肌內(nèi)脂肪含量。1.3.5肉色采用CR-400(MINOLTA)色差計(jì)對(duì)肌肉樣本進(jìn)行肉色評(píng)分。

1.3.6pH試驗(yàn)動(dòng)物屠宰45 min和24 h后使用pH-STAR(SFK-Techbology，Denmark)測(cè)定肌肉樣本pH。

1.3.7滴水損失將新鮮肌肉組織剪成長(zhǎng)5 cm、寬2 cm、厚3 cm的肉柱后稱重，用鐵絲掛住樣本保持肌纖維垂直向下后置于氣體充盈的塑料薄膜口袋，扎緊袋口懸掛于4 ℃冰箱內(nèi)貯藏24 h后稱重，計(jì)算滴水損失。

1.3.8蒸煮損失將肌肉樣本剪成長(zhǎng)4 cm、寬4 cm、厚2.5 cm肉塊后置于蒸煮袋內(nèi)排盡空氣后密封，在75 ℃水浴鍋中加熱30 min后取出樣本冷卻至室溫稱重，計(jì)算蒸煮損失。

表1飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

Table 1Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis)

%

預(yù)混料為每千克日糧提供：Cu(CuSO4·5H2O) 10 mg，F(xiàn)e(FeSO4·7H2O)80 mg，Mn(MnSO4·H2O)20 mg，Zn(ZnSO4·H2O)80 mg，Se(Na2SeO3)0.5 mg，I(KI)0.5 mg，VA 8 000 IU，VD32 000 IU，VE 12 IU，VK31.2 mg，VB11.5 mg，VB24 mg，VB62 mg，VB120.02 mg，生物素0.08 mg，泛酸12 mg，煙酸20 mg

Premix provided per kilogram of diet：Cu(CuSO4·5H2O) 10 mg，F(xiàn)e(FeSO4·7H2O)80 mg，Mn(MnSO4·H2O)20 mg，Zn(ZnSO4·H2O)80 mg，Se(Na2SeO3)0.5 mg，I(KI)0.5 mg，VA 8 000 IU，VD32 000 IU，VE 12 IU，VK31.2 mg，VB11.5 mg，VB24 mg，VB62 mg，VB120.02 mg，biotin 0.08 mg，pantothenic acid 12 mg，niacin 20 mg

1.4骨骼肌蛋白質(zhì)組學(xué)分析1.4.1蛋白質(zhì)提取和熒光標(biāo)記取少量骨骼肌(約0.2 g)樣本于研缽中加入液氮以及含蛋白酶抑制劑的緩沖液(7 mol·L-1脲，2 mol·L-1硫脲，4% 3-[(3-膽酰胺丙基)-二乙胺]-丙磺酸，50 mmol·L-1二硫蘇糖醇，1%蛋白酶抑制劑)，粉碎組織破碎細(xì)胞后離心取上清液于-80 ℃保存。Bradford法測(cè)定蛋白濃度后在各樣本中取200 μg蛋白質(zhì)在組內(nèi)隨機(jī)混合為5個(gè)樣本(每?jī)煞輼颖净旌铣梢环?用于蛋白質(zhì)組學(xué)分析。按照DIGE試劑盒(GE Healthcare)說(shuō)明進(jìn)行熒光標(biāo)記[9]。

1.4.2雙向電泳及圖象掃描分析第一向等電聚焦程序：1)線性升壓至250 V，持續(xù)時(shí)間 30 min；2)快速升壓至1 000 V，持續(xù)時(shí)間1 h；3)線性升壓至10 000 V，持續(xù)時(shí)間5 h；4)快速升壓至10 000 V，持續(xù)時(shí)間 60 000 Vh。二維電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳在Ettan DALT(GE Healthcare)上進(jìn)行，具體電泳過(guò)程如J.Liu等[9]所描述。電泳結(jié)束后使用Typhoon 9410TM熒光掃描儀(GE Healthcare)進(jìn)行凝膠掃描，不同染料激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)分別為Cy2 (488/520 nm)、Cy3(532/580 nm)和Cy5(633/670 nm)。使用DeCyderTMv 6.5(GE Healthcare)軟件對(duì)掃描圖像進(jìn)行比對(duì)分析，對(duì)掃描后凝膠上蛋白點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)分析，然后再將不同膠上的同一蛋白點(diǎn)與內(nèi)參匹配進(jìn)行膠間分析，最終根據(jù)每個(gè)蛋白點(diǎn)匹配后的相對(duì)表達(dá)量確定差異表達(dá)蛋白。飼糧處理間蛋白質(zhì)表達(dá)量差異比絕對(duì)值大于1.2，P<0.05的蛋白選定為目的蛋白，用于質(zhì)譜分析。

1.4.3目的蛋白的定性使用制備膠分離目的蛋白，電泳過(guò)程如臧長(zhǎng)江等[10]所描述，染色方法為考馬斯亮藍(lán)染色，蛋白質(zhì)上樣量為1 000 μg。凍干后的膠粒加入胰蛋白酶溶液，使用5%三氟乙酸溶解37 ℃條件下水解產(chǎn)生的肽混合物后，用0.5 μL肽溶液與1 μL基質(zhì)(4-羥基-α-氰基肉桂酸，50%乙脲，0.1%三氟乙酸)相混合。使用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜或串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)分析肽混合液(4800 Proteomics Analyzer，Applied Biosystems)，獲取肽的指紋圖譜。選擇MASCOT 搜索軟件與其他哺乳動(dòng)物數(shù)據(jù)庫(kù)(NCBI)蛋白質(zhì)進(jìn)行匹配，根據(jù)蛋白評(píng)分確定目的蛋白種類。分析過(guò)程使用GPS ExplorerTM軟件(3.6版本，Applied Biosystems)，軟件評(píng)分>67代表P<0.05。

1.5統(tǒng)計(jì)分析

采用SAS統(tǒng)計(jì)軟件中的One-way ANOVA程序分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P<0.05認(rèn)為差異顯著。

2　結(jié)　果

從表2結(jié)果可以看出，生長(zhǎng)育肥豬采食高脂飼糧導(dǎo)致平均日增重(ADG)、試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的活體重和胴體重顯著增加(P<0.05)，并極顯著降低了料重比(P<0.01)。平均日采食量(ADFI)、屠宰率和平均背膘厚不受飼糧脂肪含量的影響(P>0.05)。從表3可知，生長(zhǎng)育肥豬背最長(zhǎng)肌的pH45 min、pH24 h、肌內(nèi)脂肪含量、亮度、紅度、黃度、蒸煮損失、滴水損失和剪切力等肉品質(zhì)相關(guān)指標(biāo)均不受飼糧脂肪含量因素的影響(P>0.05)。

通過(guò)使用雙向差異凝膠電泳技術(shù)，本試驗(yàn)共分離出約2 000個(gè)蛋白點(diǎn)(圖1)，其中16個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)量受飼糧脂肪含量的影響，這些蛋白質(zhì)的功能主要涉及到：(1)細(xì)胞凋亡；(2)細(xì)胞結(jié)構(gòu)；(3)葡萄糖和能量代謝；(4)脂質(zhì)代謝；(5)應(yīng)激反應(yīng)。由表4可以看出，采食高脂飼糧上調(diào)了生長(zhǎng)育肥豬骨骼肌中鈣網(wǎng)蛋白、肌球蛋白重鏈、加帽蛋白、丙酮酸激酶、烯醇化酶、乳酸脫氫酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶、腺苷酸激酶、載脂蛋白A和B、脂肪酸結(jié)合蛋白、熱休克蛋白27 ku和70 ku等蛋白質(zhì)的表達(dá)量，但下調(diào)了肌球蛋白輕鏈和磷酸葡萄糖變位酶的蛋白質(zhì)表達(dá)量。

表2高脂飼糧對(duì)生長(zhǎng)育肥豬生長(zhǎng)性能和胴體品質(zhì)的影響

Table 2Effect of high-fat diet on growth performance and carcass traits of growing-finishing pigs

項(xiàng)目Item對(duì)照飼糧Controldiet高脂飼糧High-fatdietP值P-value初始體重/kgInitialBW73.36±0.6173.19±0.530.837平均日采食量/(kg·d-1)Averagedailyfeedintake3.01±0.092.86±0.070.287平均日增重/(kg·d-1)Averagedailygain0.93±0.031.06±0.04<0.05料重比Feed/gain3.24±0.112.69±0.14<0.01活體重/kgLiveweight112.63±1.98117.7±1.34<0.05胴體重/kgCarcassweight73.92±1.3078.56±1.10<0.05屠宰率/%Dressingrate65.72±1.0466.74±0.950.506平均背膘厚/cmMeanbackfatthickness2.19±0.102.33±0.080.434

3　討　論

飼糧能量水平是影響育肥豬生長(zhǎng)性能的重要因素，本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加10.0%的豬油可顯著提高生長(zhǎng)育肥豬后期生長(zhǎng)速度并改善飼料報(bào)酬，但對(duì)胴體品質(zhì)和肉品質(zhì)無(wú)顯著影響，這與前期研究結(jié)果基本一致[1，4，11]。蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果表明，飼喂高脂飼糧顯著影響育肥豬骨骼肌中涉及葡萄糖和能量代謝、脂質(zhì)代謝以及應(yīng)激反應(yīng)的相關(guān)蛋白表達(dá)量。因此，本研究圍繞高脂飼糧對(duì)具有不同生物學(xué)功能蛋白表達(dá)量的調(diào)控，從分子水平上檢測(cè)其對(duì)生長(zhǎng)育肥豬骨骼肌脂質(zhì)代謝、葡萄糖和能量代謝的影響。

表3高脂飼糧對(duì)生長(zhǎng)育肥豬肉品質(zhì)的影響

Table 3Effect of high-fat diet on meat quality traits of growing-finishing pigs

項(xiàng)目Item對(duì)照飼糧Controldiet高脂飼糧High-fatdietP值P-valuepH45min6.65±0.076.55±0.080.405pH24h5.60±0.055.54±0.040.374肌內(nèi)脂肪含量/%Intramuscularfatcontent3.86±0.153.98±0.170.570亮度Lightness45.27±1.7144.67±1.890.815紅度Redness6.64±0.787.33±0.860.556黃度Yellowness3.14±0.183.49±0.210.245蒸煮損失/%Cookingloss35.27±1.4033.43±1.520.365滴水損失/%Driploss3.79±0.153.67±0.180.642剪切力/kgShearforce4.97±0.194.79±0.220.545

圖1　生長(zhǎng)育肥豬骨骼肌熒光差異雙向電泳圖譜Fig.1　Two-dimensional different in-gel electrophoresis image of the skeletal muscle proteome map of growing-finishing pigs

表4高脂飼糧對(duì)生長(zhǎng)育肥豬骨骼肌蛋白質(zhì)組的影響

Table 4Effect of high-fat diet on skeletal muscle proteome of growing-finishing pigs

蛋白點(diǎn)Spot蛋白名稱Poteinname登錄號(hào)AccessionNo.評(píng)分Score分子量/uMolecularweight等電點(diǎn)Isoelectricpoint表達(dá)水平Expressionlevel細(xì)胞凋亡Cellularapoptosis1鈣網(wǎng)蛋白Calreticulingi|23742018846616.94.33+1.33細(xì)胞結(jié)構(gòu)Cellstructure2肌球蛋白重鏈Myosinheavychaingi|178056718152223097.35.60+1.353加帽蛋白Cappingproteingi|43330813632726.55.58+1.394肌球蛋白重鏈Myosinheavychaingi|157954424180222928.25.62+1.425肌球蛋白輕鏈Myosinlightchaingi|583468413916719.24.63-1.38葡萄糖和能量代謝Glucoseandenergymetabolism6丙酮酸激酶Pyruvatekinasegi|1675799435857780.96.63+1.547磷酸葡萄糖變位酶1Phosphoglucomutase1gi|374694419015077.74.88-1.568烯醇化酶3Enolase3gi|15326742718746902.37.59+1.489乳酸脫氫酶-ALactatedehydrogenase-Agi|21759021035560.78.17+1.9510磷酸丙糖異構(gòu)酶Triosephosphateisomerasegi|53842619426903.86.45+1.4511腺苷酸激酶1Adenylatekinase1gi|450201120721621.38.73+1.53脂質(zhì)代謝Lipidmetabolism12載脂蛋白BApolipoproteinBgi|19709885416025718.94.77+1.6713載脂蛋白AApolipoproteinAgi|16435918230311.75.38+1.5814脂肪酸結(jié)合蛋白Fattyacid-bindingproteingi|22799414714716.77.00+2.12應(yīng)激反應(yīng)Stressresponse15熱休克蛋白70kuHeatshockprotein70kugi|1650723724072288.45.07+1.5316熱休克蛋白27kuHeatshockprotein27kugi|5091634216014211.25.94+1.78

骨骼肌蛋白質(zhì)總量的80%由肌球蛋白、肌動(dòng)蛋白、肌聯(lián)蛋白和伴肌動(dòng)蛋白組成，其中肌球蛋白占肌纖維蛋白的45%。肌球蛋白重鏈和肌球蛋白輕鏈作為肌球蛋白的主要組成部分，對(duì)肌纖維結(jié)構(gòu)和肉的嫩度具有顯著影響。R.Lametsch等[12]研究表明，肌肉剪切力與動(dòng)物屠宰后肌球蛋白降解片段肌球蛋白重鏈顯著負(fù)相關(guān)，與肌球蛋白輕鏈的降解顯著正相關(guān)。在本試驗(yàn)條件下，高脂飼糧在不影響育肥豬骨骼肌剪切力的情況下，分別上調(diào)和下調(diào)了肌球蛋白重鏈和肌球蛋白輕鏈的表達(dá)量，這與R.Lametsch等[12]的研究結(jié)果相比存在一定的差異，導(dǎo)致上述差異的原因可能在于不同試驗(yàn)的剪切力測(cè)定時(shí)間有所不同，從而影響了肌肉的嫩化。加帽蛋白表達(dá)量與肌肉剪切力之間的相關(guān)性在前期研究中已有所報(bào)道[13]，雖然在本試驗(yàn)中高脂飼糧上調(diào)了加帽蛋白的表達(dá)量，但肌肉剪切力未受飼糧脂肪含量的影響，表明上述蛋白質(zhì)的表達(dá)量對(duì)肌肉嫩度影響較小。鈣網(wǎng)蛋白作為分子伴侶參與蛋白的折疊和轉(zhuǎn)運(yùn)，從而影響肌肉收縮等生物學(xué)功能[14]，飼糧脂肪含量對(duì)其表達(dá)量的影響表明骨骼肌收縮等基本功能可能受高脂飼糧的影響。

脂肪酸結(jié)合蛋白作為脂肪酸的轉(zhuǎn)運(yùn)載體，其表達(dá)量與肌內(nèi)脂肪細(xì)胞數(shù)量和脂肪含量顯著正相關(guān)，肌內(nèi)脂肪含量較高品種豬的脂肪酸結(jié)合蛋白表達(dá)量顯著高于肌內(nèi)脂肪含量較低的豬種[15-16]。運(yùn)載脂質(zhì)和穩(wěn)定脂蛋白結(jié)構(gòu)是載脂蛋白的主要生物學(xué)功能，肝是其主要合成部位。載脂蛋白作為高密度脂蛋白的重要組成部分，負(fù)責(zé)將脂類物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶器官[17]。與前期D.H.Kim等[18]的研究一致，本試驗(yàn)結(jié)果表明，高脂飼糧顯著上調(diào)骨骼肌中與脂質(zhì)代謝相關(guān)的脂肪酸結(jié)合蛋白和載脂蛋白表達(dá)量，但背膘沉積和肌內(nèi)脂肪含量不受飼糧脂肪含量的影響。對(duì)照組飼糧能量水平可能已滿足生長(zhǎng)育肥豬最大肌內(nèi)脂肪沉積的能量需要量，從而導(dǎo)致肌內(nèi)脂肪含量不受高脂飼糧的影響，這與陳德志等[3]和蔡傳江等[4]的研究結(jié)果基本一致。

流行病學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)，高脂飼糧誘導(dǎo)的能量代謝異常是導(dǎo)致發(fā)胖的主要原因。丙酮酸激酶作為糖酵解過(guò)程的三大限速酶之一，催化葡萄糖分解產(chǎn)生乙酰輔酶A用于氧化供能[19]。腺苷酸激酶催化ATP使AMP磷酸化形成兩分子的ADP[20]；烯醇化酶作為糖酵解的關(guān)鍵酶之一，催化2-磷酸甘油酸形成磷酸烯醇式丙酮酸[21]；磷酸丙糖異構(gòu)酶催化磷酸二羥丙酮轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油醛從而進(jìn)入糖酵解途徑[22]。采食高脂飼糧顯著上調(diào)上述4種蛋白質(zhì)的表達(dá)量，表明動(dòng)物機(jī)體需要提高能量消耗從而適應(yīng)攝入的過(guò)多能量，這與D.H.Kim等[18]的研究結(jié)果一致。此外，參與能量代謝的磷酸葡萄糖變位酶在采食高脂飼糧的生長(zhǎng)育肥豬骨骼肌中表達(dá)量卻顯著下降，與D.H.Kim等[18]的研究結(jié)果存在一定差異。乳酸脫氫酶活力是調(diào)控動(dòng)物屠宰后乳酸生成的主要因素，乳酸脫氫酶活力較高意味著較高的乳酸生成率以及宰后pH下降加快[23]。雖然本試驗(yàn)條件下不同處理組之間骨骼肌的pH45 min和pH24 h無(wú)顯著差異，但高脂飼糧對(duì)乳酸脫氫酶表達(dá)量的調(diào)控表明飼糧脂肪含量可能對(duì)動(dòng)物屠宰后肌肉的pH變化有所影響。

熱休克蛋白(HSP)具有維持細(xì)胞穩(wěn)恒、損傷修復(fù)、穩(wěn)定未折疊蛋白、避免蛋白聚集以及重塑變性蛋白等功能[24]。作為分子伴侶，HSP的表達(dá)量在應(yīng)激條件下顯著上調(diào)。在本試驗(yàn)中，高脂飼糧顯著上調(diào)了育肥豬骨骼肌中HSP 27 ku和HSP 70 ku的蛋白表達(dá)量，表明飼糧脂肪攝入過(guò)多對(duì)動(dòng)物造成一定程度的氧化應(yīng)激，從而需要較高的HSP表達(dá)量以維持機(jī)體能量代謝和氧化還原反應(yīng)的平衡，這與D.C.Henstridge等[25]的研究結(jié)果一致。

4　結(jié)　論

4.1飼喂高脂飼糧可改善生長(zhǎng)育肥豬生長(zhǎng)性能，但對(duì)肉品質(zhì)無(wú)顯著影響。

4.2飼喂高脂飼糧顯著改變生長(zhǎng)育肥豬骨骼肌中與脂質(zhì)代謝、葡萄糖和能量代謝以及應(yīng)激反應(yīng)等生物學(xué)功能相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)量。

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(編輯郭云雁)

Effects of High-fat Diet on Meat Quality Traits and Skeletal Muscle Proteome of Growing-finishing Pigs

XIONG Huo1，CAI Xin1，LIU Jing-bo1，2*，CHEN Liang2，ZHANG Hong-fu2

(1.SchoolofLifeScienceandEngineering，SouthwestUniversityofScienceandTechnology，Mianyang621010，China；2.InstituteofAnimalScience，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China)

The present study was conducted to investigate the effect of high-fat (HF) diet on meat quality traits and skeletal muscle proteome of growing-finishing pigs.Twenty growing-finishing pigs with an average initial BW of (73.28±0.57) kg were randomly allocated to control group (control diet，supplemented with 10.0% cornstarch) and treatment group (high-fat diet，supplemented with 10.0% lard) to study the effect of dietary fat content on growth performance，meat quality traits and skeletal muscle proteome of growing-finishing pigs.There were 10 replicates in each treatment group with 1 pig per replicate.The experiment lasted 42 d.The results showed that pigs fed the HF diet had a greater average daily gain (P<0.05)，but a lower ratio of feed to gain than pigs fed the control diet (P<0.01).The pH45 min，pH24 h，intramuscular fat content，lightness，redness，yellowness，cooking loss，drip loss and shear force in skeletal muscle of pigs were not affected by dietary fat content (P>0.05).Proteomic analysis revealed that pigs fed the HF diet had greater expression levels of calreticulin，myosin heavy chain，capping protein，pyruvate kinase，enolase，L-lactate dehydrogenase，triosephosphate isomerase，adenylate kinase，apolipoprotein A and B，fatty acid binding protein and heat shock protein 27 and 70 ku，but lower expression levels of myosin light chain and phosphoglucomutase than pigs fed the control diet.In conclusion，the HF feeding could improve the growth performance，and upregulate the expression levels of proteins related to lipid metabolism，glucose and energy metabolism in skeletal muscle of growing-finishing pigs.

high-fat diet；meat quality；proteome；pigs

10.11843/j.issn.0366-6964.2016.10.014

2015-10-08

動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題(2004DA125184F1424)；國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BDA39B01)；中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(ASTIP-IAS07)

熊火(1970-)，男，四川綿陽(yáng)人，講師，主要從事單胃動(dòng)物生理和營(yíng)養(yǎng)研究，E-mail：xiongjiumu@163.com

劉靜波，講師，博士，主要從事抗病營(yíng)養(yǎng)和單胃動(dòng)物磷營(yíng)養(yǎng)研究，E-mail：liuswust@163.com

S828；S816.71

A

0366-6964(2016)10-2052-08