宋家樂(lè)，周燕園，趙超超，李雪梅，鄭妍菲

（1.桂林醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所，廣西桂林541100；2.韓國(guó)國(guó)立釜山大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)學(xué)科，釜山609-735；3.解放軍153中心醫(yī)院營(yíng)養(yǎng)科，河南鄭州450042）

六堡茶總黃酮對(duì)老齡小鼠抗氧化功能的影響

宋家樂(lè)1，2，周燕園1，趙超超1，李雪梅2，鄭妍菲3

（1.桂林醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所，廣西桂林541100；2.韓國(guó)國(guó)立釜山大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)學(xué)科，釜山609-735；3.解放軍153中心醫(yī)院營(yíng)養(yǎng)科，河南鄭州450042）

探討六堡茶總黃酮提取物對(duì)老齡ICR小鼠抗氧化功能的影響。分別給予老齡ICR小鼠不同劑量的六堡茶總黃酮提取物30d后。依試劑盒說(shuō)明書(shū)分別測(cè)定其血清中總抗氧化能力（T-AOC），主要臟器（腦、心臟和肝臟）和血清中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD），過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT），谷胱甘肽過(guò)氧化酶（glutathione peroxidase，GSHPx），以及氧化損傷標(biāo)志物丙二醛（malondiadehycle，MDA）的水平。六堡茶總黃酮提取物能顯著提高老齡小鼠血清TAOC能力，提高血清和臟器組織內(nèi)SOD、CAT和GSH-Px活性，同時(shí)降低血清和臟器組織內(nèi)MDA的水平（P＜0.05）并呈劑量依存效應(yīng)關(guān)系。本研究結(jié)果提示六堡茶總黃酮提取物能明顯提高老齡小鼠體內(nèi)的抗氧化狀態(tài)。

六堡茶；總黃酮；抗氧化功能；老齡小鼠

機(jī)體自身抗氧化能力的降低是伴隨衰老發(fā)生的重要事件，同時(shí)也是各種退行性疾病的主要誘因之一。機(jī)體在正常生理?xiàng)l件下能夠通過(guò)由過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT），超氧化物歧化酶（superoxide dismu－tase，SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）所構(gòu)筑的內(nèi)源性抗氧化酶防御系統(tǒng)來(lái)對(duì)抗氧化損傷導(dǎo)致的應(yīng)激損傷，延緩機(jī)體衰老，并預(yù)防各類慢病的發(fā)生發(fā)展［1-2］。

我國(guó)是茶葉種植大國(guó)，茶制品種類豐富，而傳統(tǒng)意義上茶葉又是一類健康保健食品［3］。其中，具有1 500多年歷史的六堡茶是原產(chǎn)于我國(guó)廣西梧州地區(qū)的一種傳統(tǒng)后發(fā)酵緊壓型黑茶制品［4］。因其獨(dú)具檳榔香味和“紅、濃、陳、醇”等特殊品性，深受兩廣、港澳臺(tái)地區(qū)和東南亞當(dāng)?shù)厝嗣裣矏?ài)［5］。研究表明六堡茶具有較好的體外抗氧化［6］和降血脂［7］能力，能提高小鼠免疫力［8-9］，降低3T3-L1脂肪細(xì)胞發(fā)生胰島素抵抗［10］，并具有改善小鼠高血脂癥及抗凝血能力［11］。此外，六堡茶還是一種富含礦物質(zhì)［12］的安全發(fā)酵茶制品［13］。因此，本文旨在通過(guò)給予老齡小鼠一定劑量的六堡茶總黃酮提取物，通過(guò)觀察其對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)抗氧化狀態(tài)的影響。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

1.1.1材料

六堡茶：購(gòu)自廣西梧州六堡茶廠（生產(chǎn)年份：2014年8月）。

1.1.2試劑

乙醇：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；商用總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒：美國(guó)Cayman公司；其他化學(xué)試劑均為分析純。

1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

老齡ICR小鼠（雄性，12月齡，體重43 g±3 g）由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，并置于桂林醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院動(dòng)物房飼養(yǎng)。

1.2儀器與設(shè)備

EYELA N-1001S真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：日本東京理化器械株式會(huì)社；Combi-514R冷凍離心機(jī)：韓國(guó)Hanil株式會(huì)社；Bio-Rad 680酶標(biāo)儀：美國(guó)Bio-Rad公司。

1.3方法

1.3.1六堡茶總黃酮的制備

參考羅艷等［14］報(bào)告的方法，取100 g經(jīng)冷凍干燥后的六堡茶粉碎品，依照料液比1∶25（g/mL）比例，以60%的乙醇溶液為提取試劑，混合提取3次，每次提取1.5 h。提取完畢后，合并所有提取液，以4 000 r/min的速度離心20 min以收集上清液。低溫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)制備得六堡茶總黃酮提取物，抽真空包裝并置于-80℃條件下保管待用。經(jīng)三氯化鋁比色法測(cè)定六堡茶提取物中總黃酮含量為3.57%。

1.3.2動(dòng)物分組

所有40只小鼠經(jīng)一周馴養(yǎng)后，稱量體重并按照每組10只隨機(jī)分為對(duì)照組和六堡茶總黃酮提取物低、中、高劑量組。

1.3.3給藥方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按照低劑量組10 mg/kg、中劑量組50 mg/kg和高劑量組100 mg/kg每日1次，連續(xù)灌胃30 d，對(duì)照組以等量生理鹽水代替。第31天用CO2安樂(lè)死處死所有實(shí)驗(yàn)小鼠。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)桂林醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查委員會(huì)審查通過(guò)，并嚴(yán)格按照美國(guó)國(guó)立健康研究院（NIH）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康管理規(guī)定執(zhí)行。

1.3.4血清和組織中抗氧化指標(biāo)的測(cè)定

所有安樂(lè)死后的實(shí)驗(yàn)小鼠自腹部中央靜脈處取血。血樣4℃過(guò)夜放置后，以3 500 r/min速度在4℃條件下離心15 min制備血清。取血后，摘取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腦，心臟和肝臟并用冷生理食鹽水洗去血污，以適量濃度為0.2 mol/L的磷酸緩沖溶液于冰上制備各組織的勻漿液。按試劑盒說(shuō)明分別測(cè)定血清和組織內(nèi)抗氧化酶的活性。

1.4數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。用單因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行多組之間均數(shù)的差異性檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著。

2　結(jié)果與討論

2.1六堡茶總黃酮提取物對(duì)老齡小鼠體重以及一般狀態(tài)的影響

整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，各組小鼠的發(fā)育狀況良好，未發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡。經(jīng)六堡茶總黃酮30 d給藥處理后的小鼠體重和主要臟器（腦、心臟和肝臟）的質(zhì)量與對(duì)照組小鼠相比變化差異不明顯，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2六堡茶總黃酮提取物對(duì)老齡小鼠血清抗氧化能力的影響

衰老與機(jī)體內(nèi)部各種物質(zhì)代謝功能的障礙和酶類或非酶類抗氧化物質(zhì)的逐步缺乏存在著極大的聯(lián)系。其中，自由基所引起的過(guò)氧化反應(yīng)是誘發(fā)機(jī)體氧化應(yīng)激損傷所致衰老的主要原因之一［14］。高活性的自由基能直接攻擊生物體細(xì)胞膜內(nèi)不飽和脂肪酸并引起其過(guò)氧化反應(yīng)，造成機(jī)體內(nèi)部丙二醛（MDA）和4-羥基壬烯醛（4-HNE）等毒性過(guò)氧化物產(chǎn)物的大量生成。MDA和4-HNE可通過(guò)改變細(xì)胞生物膜的組分，引起細(xì)胞自溶；通過(guò)影響細(xì)胞內(nèi)核糖體的正常機(jī)能造成細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成障礙；并能通過(guò)誘發(fā)DNA等遺傳物質(zhì)突變，造成細(xì)胞異常分裂和癌變，最后導(dǎo)致細(xì)胞衰老并引發(fā)疾病。因此，增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)源性抗氧化物酶系統(tǒng)的活性可助于機(jī)體對(duì)抗氧化應(yīng)激損傷并能延緩衰老進(jìn)程［15］。六堡茶總黃酮提取物對(duì)老齡小鼠血清抗氧化能力的影響見(jiàn)表1。

如表1所示，給予不同劑量的六堡茶總黃酮提取物30 d后，各組小鼠血清中總抗氧化T-AOC水平與對(duì)照組相比呈顯著升高趨勢(shì)，并具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。特別是高劑量處理組小鼠血清SOD，CAT和GSH-Px的水平分別較對(duì)照組顯著上升。此外，六堡茶總黃酮還能顯著降低各組老齡小鼠血清MDA水準(zhǔn)。與對(duì)照組相比，經(jīng)高劑量六堡茶總黃酮（100 mg/kg）處理后的老齡小鼠血清中的MDA生成量降低約39%。

表1　六堡茶總黃酮對(duì)老齡小鼠血清中T-AOC，SOD，CAT，GSH-Px和MDA水平的影響Table 1Effect of Liubao tea total flavonoid on serum levels of T-AOC，SOD，CAT and GSH-Px in aged mice

2.3六堡茶總黃酮提取物對(duì)老齡小鼠腦組織中抗氧化能力的影響

六堡茶總黃酮提取物對(duì)老齡小鼠腦組織中抗氧化能力的影響見(jiàn)表2。

表2　六堡茶總黃酮對(duì)老齡小鼠腦組織中SOD，CAT，GSH-Px和MDA水平的影響Table 2Effect of Liubao tea total flavonoid on brain levels of SOD，CAT，GSH-Px and MDA in aged mice

如表2所示，在給予不同劑量六堡茶總黃酮提取物處理30 d后，各組小鼠腦中主要抗氧化酶的活性與對(duì)照組比較呈顯著升高趨勢(shì)，并具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。特別是高劑量處理組小鼠腦組織中SOD，CAT和GSH-Px的水平分別較對(duì)照組小鼠腦組織中SOD，CAT和GSH-Px的水平增加顯著。高劑量六堡茶總黃酮處理組小鼠腦內(nèi)的MDA的含量與對(duì)照組小鼠相比顯著降低41%（P＜0.05）。

2.4六堡茶總黃酮提取物對(duì)老齡小鼠心臟組織內(nèi)抗氧化能力的影響

六堡茶總黃酮提取物對(duì)老齡小鼠心臟組織內(nèi)抗氧化能力的影響見(jiàn)表3。

表3　六堡茶總黃酮對(duì)老齡小鼠心臟組織內(nèi)SOD，CAT，GSH-Px和MDA水平的影響Table 3Effect of Liubao tea total flavonoid on heart levels of SOD，CAT，GSH-Px and MDA in aged mice

如表3示，經(jīng)不同劑量六堡茶總黃酮提取物處理30 d后，各組老齡小鼠心臟組織內(nèi)3種主要抗氧化酶的活性與對(duì)照組比較呈顯著升高趨勢(shì)，并具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。與對(duì)照組小鼠相比，高劑量六堡茶總黃酮能較對(duì)照組分別提高小鼠心臟組織內(nèi)SOD，CAT和GSH-Px的活性水平增加顯著。此外，高劑量的六堡茶總黃酮還能顯著降低老齡小鼠心臟組織內(nèi)約29%的MDA生成量。

2.5六堡茶總黃酮提取物對(duì)老齡小鼠肝臟組織內(nèi)抗氧化能力的影響

六堡茶總黃酮提取物對(duì)老齡小鼠肝臟組織內(nèi)抗氧化能力的影響見(jiàn)表4。

表4　六堡茶總黃酮對(duì)老齡小鼠肝臟組織中SOD，CAT，GSH-Px和MDA水平的影響Table 4Effect of Liubao tea total flavonoid on liver levels of SOD，CAT，GSH-Px and MDA in aged mice

各組小鼠經(jīng)30 d不同劑量六堡茶總黃酮提取物處理后，其肝臟組織內(nèi)3種主要抗氧化酶的活性與對(duì)照組相比呈顯著升高趨勢(shì)，并具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。高劑量六堡茶總黃酮能顯著提高老齡小鼠肝臟組織內(nèi)SOD，CAT和GSH-Px的活性，并顯著降低老齡小鼠肝臟組織內(nèi)MDA的生成。而該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與陳雪等報(bào)道的六堡茶水提取物能提高D-半乳糖誘發(fā)的衰老小鼠肝組內(nèi)SOD和CAT抗氧化酶活性的結(jié)果較為一致［15］。此外，與六堡茶同屬于緊壓型后發(fā)酵黑茶的湖南茯磚茶能夠通過(guò)提高細(xì)胞內(nèi)SOD，CAT和GSH-Px等抗氧化酶系的活性，來(lái)抑制H2O2對(duì)豬腎上皮LLCPK1細(xì)胞造成的氧化應(yīng)激損傷［16］。

3　結(jié)論

本研究中，我們發(fā)現(xiàn)六堡茶總黃酮能有效地提高自然衰老小鼠體內(nèi)血清T-AOC能力，通過(guò)提高心、肝、腦等身體主要臟器中的SOD，CAT，GSH-Px 3種主要抗氧化物酶的活性，從而降低血清以及主要內(nèi)臟器官內(nèi)氧化損傷標(biāo)志物MDA的含量，抑制了衰老過(guò)程中氧化損傷的發(fā)生。結(jié)果提示六堡茶總黃酮可能主要通過(guò)提高老齡小鼠體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)活性來(lái)對(duì)抗自然衰老。而本研究為六堡茶作為具有抗氧化、抗衰老能力的保健食品提供了一定的科學(xué)研究依據(jù)。

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Effect of Liubao Tea Total Flavonoid on Antioxidant Function in Aged Mice

SONG Jia-le1，2，ZHOU Yan-yuan1，ZHAO Chao-chao1，LI Xue-mei2，ZHENG Yan-fei3
（1.School of Public Health，Institute of Preventive Medicine，Guilin Medical University，Guilin 541100，Guangxi，China；2.Department of Food Science and Nutrition，Pusan National University，Busan 609-735，South Korea；3.Department of Nutrition，the 153rd Central Hospital of People's Liberation Army，Zhengzhou 450042，Henan，China）

To investigate the effect of Liubao tea total flavonoid（LBTFE）on the antioxidant function in aged ICR mice.The aged ICR mice were administrated with various dose of LBTFE for 30 days.The levels of total antioxidant capacity（T-AOC）in serum，and levels of superoxide dismutase（SOD），catalase（CAT），glutathione peroxidase（GSH-Px），as well as malondiadehycle（MDA）in serum and multiple organs including brain，heart and liver were determined by commercial assay kits.LBTFE was significantly（P＜0.05）increased the serum T-ACO activity，and also increased the activity of SOD，CAT and GSH-Px in serum and multiple organs，respectively.In addition，LBTFE treatment was also dose-dependently decreased the serum levels of MDA，and reduced the lipid peroxidation in multiple organs（brain，heart and liver）of aged mice，significantly（P＜0.05）.The results from this study suggested the LBTFE was able to enhance the antioxidant activity in aged ICR mice.

Liubaotea；totalflavonoid；antioxidantfunction；agedmice

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.20.041

廣西教育廳高?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（LX2014257）；桂林醫(yī)學(xué)院引進(jìn)人才科研啟動(dòng)基金（04010150001）

宋家樂(lè)（1983—），男（漢），副教授，博士，研究方向：植物天然化學(xué)，分子營(yíng)養(yǎng)學(xué)。

2015-12-12