孟 偉，余洲海

（上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海200021）

H型高血壓患者血管緊張素轉(zhuǎn)化酶基因多態(tài)性對(duì)其活性及血脂水平影響的探究

孟 偉，余洲海

（上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海200021）

目的 探究H型高血壓患者和普通高血壓患者中不同基因型的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性差異以及其對(duì)血脂水平的影響。方法 實(shí)驗(yàn)采用了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的方法，分別鑒定68例H型高血壓患者和64例普通型高血壓患者血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的基因型，并且對(duì)不同基因型的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性和對(duì)應(yīng)的血脂水平進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果 利用SPSS19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，H型高血壓和普通高血壓患者的不同基因型的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），但血管緊張素水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶基因多態(tài)性對(duì)血脂水平影響的研究表明，H型高血壓組中缺失型純合子（DD型）與插入型雜合子（ID型）和插入型純合子（II型）相比較，DD型血脂水平明顯偏高，其中膽固醇（TC）（P＜0.01），高密度脂蛋白（HDLD），低密度脂蛋白（LDLC）和載脂B的水平的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。普通高血壓組僅HDLC，LDLC和載脂B的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 在H型高血壓和普通型高血壓患者中，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的基因多態(tài)性與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性及血脂含量有關(guān)。H型高血壓患者的DD型的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性最高，并且血脂水平偏高，其中膽固醇含量增高最為明顯，更加容易患高血脂癥。

H型高血壓； 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶； 基因多態(tài)性； 血脂

H型高血壓是伴有同型半光氨酸（homocysteine，Hcy）水平增高的的原發(fā)性高血壓。美國(guó)疾病預(yù)防控制中心（CDC）疾控標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為當(dāng)Hcy水平≥10μmol/L者屬于高Hcy［1］?，F(xiàn)有研究表明，伴有Hcy水平增加的高血壓患者與心血管疾病的發(fā)生具有一定的聯(lián)系，較正常人高出25～30倍［2］。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（angiotensin converting enzyme，ACE）是1954年由Leonard TS［3］博士首次在馬血漿中發(fā)現(xiàn)，其基因位于染色體17q23，包括26個(gè)外顯子和23個(gè)內(nèi)含子，總長(zhǎng)為21kb，編碼區(qū)長(zhǎng)4.3kb，根據(jù)第16內(nèi)含子中287bp片段的存與否可分為缺失型純合子（DD），插入型純合子（II）和插入型雜合子（ID）［4］。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶對(duì)機(jī)體的血壓和心血管功能起著重要的調(diào)節(jié)作用，主要是通過(guò)腎素血管緊張素系統(tǒng)（rein-angiotensin system，RAS）和激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)（kallikrein-kinin system，KKS）發(fā)揮作用［5］。近年來(lái)不少研究證明了血管緊張素轉(zhuǎn)化酶對(duì)血脂具有一定影響［6］。本研究主要探究了H型高血壓患者和普通高血壓患者不同基因型的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性及其對(duì)血脂水平的影響。

對(duì)象與方法

1 研究對(duì)象

H型高血壓組68例，男性32例，女36例，平均年齡59.1±4.2歲；普通高血壓組64例，男性30例，女性34例，平均年齡60.0±3.2歲，均為曙光醫(yī)院的患者。兩組在年齡和性別上的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。高血壓診斷均按照J(rèn)NCⅦ標(biāo)準(zhǔn)，Hcy的檢測(cè)按照美國(guó)疾病預(yù)防控制中心（CDC）的標(biāo)準(zhǔn)，所有服藥者均停藥2周以后進(jìn)行檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 血清Hcy水平的檢測(cè) 血清Hcy水平檢測(cè)應(yīng)用酶法使用BECKMAN AU5800全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。Hcy試劑盒購(gòu)于由北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)YZB/京0575-2008?？崭寡錒cy水平校正標(biāo)準(zhǔn)值為4.17～13.18μmol/L。

2.2 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶基因型的鑒定 抽取高血壓組和正常人組的血液樣本5mL，利用基因組NDA提取試劑盒（購(gòu)于北京天根生化科技公司）對(duì)血液DNA進(jìn)行提取。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的方法進(jìn)行檢測(cè)。正向引物為：5-’-CTG GAG ACC AAC TCC CAT CCT TTC ATT-3’反向引物為：5’-GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA TTC-3’，引物由南京金斯瑞生物科技公司合成。PCR擴(kuò)增反應(yīng)完成后，產(chǎn)物經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，基因條帶為190pb的為缺失性純合子，490pb的為插入型純合子，190pb和490pb都有的為插入型雜合子。

2.3 不同基因型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶水平的檢測(cè) 采用放射免疫分析法，利用試劑盒對(duì)ACE的水平進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法完全按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作，試劑盒購(gòu)于上海生物工程有限公司。

2.4 不同基因型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性的檢測(cè) 使用 BECKMAN AU5800全自動(dòng)生化分析儀對(duì)血清中ACE的活性進(jìn)行檢測(cè)。血清中的ACE作用于ACE底物N-［3-（2-呋喃基）丙烯酰］-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸（FAPGG），F(xiàn)APGG被水解成苯丙氟酞基（FAP）和雙甘氨膚（GG），在波長(zhǎng)340nm下。吸光度呈卜降反應(yīng)均在一定范圍內(nèi)，吸光度下降的速率與標(biāo)本中ACE酶活性成正比。速率法嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明操作，試劑盒購(gòu)自北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司。

2.5 血脂水平的測(cè)定 空腹采血4mL，2h內(nèi)分離血清。各指標(biāo)檢測(cè)儀器使用BECKMAN AU5800全自動(dòng)生化分析儀。載脂蛋白AI、載脂蛋白B、脂蛋白（a）采用免疫透射比色法，購(gòu)自上海申峰生物有限公司；血清甘油三酯（triglycerides，TG）為 GPO-PAP法，購(gòu)自上海執(zhí)誠(chéng)生物有限公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）為膽固醇氧化酶法，購(gòu)自上海世諾生物有限公司；高密度脂蛋白，低密度脂蛋白為表面活性劑消除法，購(gòu)自日本積水生物有限公司。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

全部數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有計(jì)數(shù)資料均以±s表示，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，三樣本（不同基因型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的表達(dá)水平，酶活性以及各血脂指標(biāo)）均數(shù)比較采用方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 血清Hcy水平的檢測(cè)

利用酶法檢測(cè)了132例高血壓患者血清Hcy的水平，其中68例 Hcy的水平偏高，64例 Hcy的水平正常，依據(jù)美國(guó)疾病預(yù)防控制中心（CDC）疾控標(biāo)準(zhǔn)即血清Hcy水平≥10μmol/L進(jìn)行劃分。

2 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶基因型的鑒定

利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)鑒定了高血壓患者和正常人的基因型，三種基因型分布頻率在高血壓患者和正常人中的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1和圖1。

表1 H高血壓組和普通高血壓組血管緊張素轉(zhuǎn)化酶基因型的分布頻率

3 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶水平的檢測(cè)

利用試劑盒檢測(cè)H型高血壓患者和一般原發(fā)性高血壓患者不同基因型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的表達(dá)水平。結(jié)果顯示兩組患者不同基因型的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶表達(dá)水平差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2和圖2。

表2 H型高血壓患者和普通型高血壓患者中三種基因型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性的比較

4 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性檢測(cè)以及活性對(duì)比

利用血清酶試劑盒檢測(cè)高血壓和正常人中不同基因型的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性，并利用SPSS 19.0對(duì)數(shù)據(jù)三種基因型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果顯示，高血壓組和正常人組中 DD型的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性明顯高于ID型和11型，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。ID型和II型的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3和圖3。

表3 H型高血壓患者和普通型高血壓患者中三種基因型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性的比較

5 不同基因型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶血脂水平的比較

采用免疫比色法和雙試劑酶法檢測(cè)了高血壓組和正常人組中不同基因型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶對(duì)應(yīng)的血脂中各個(gè)組分的含量，并且采用SPSS19.0分別對(duì)普通高血壓組和H型高血壓組3種不同基因型的血脂水平進(jìn)行q檢驗(yàn)。結(jié)果顯示，高血壓患者中DDTC，HDLC和載脂B的含量較ID型和II型偏高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。正常人中DD型HDLC和載脂B較ID型和DD型偏高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 H型高血壓患者和普通型高血壓患者中不同基因型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶對(duì)應(yīng)血脂水平的比較

討 論

近年來(lái)，研究者們對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的基因多態(tài)性對(duì)某些疾病的影響進(jìn)行了一系列的研究［7］。Tiret等［8］的研究表明，ACE基因等位基因D與較高血清ACE活性相關(guān)，等位基因I與較低血清ACE活性相關(guān)。張賽丹等［6］在高血壓患者中也發(fā)現(xiàn)了這一現(xiàn)象。本研究主要探究了ACE基因?qū)型高血壓患者ACE活性，水平以及血脂的影響。H型高血壓屬于原發(fā)性高血壓，相對(duì)于普通原發(fā)性高血壓而言具有更多的危害［2］。Liu等［9］研究發(fā)現(xiàn)Hcy水平的增高是AS等心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，同時(shí)腦卒的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較一般人群高12倍。臨床醫(yī)學(xué)者有發(fā)現(xiàn)，血漿中Hcy的水平降低3μmol/L時(shí)，可使高血脂，心臟病等心血管疾病的風(fēng)向明顯降低［10］。本研究證明，不同基因型ACE在H型高血壓患者和普通型高血壓患者中具有不同的活性，DD型＞DI型＞II型，這基本與Gu等［11］的研究結(jié)果相似。同時(shí)對(duì)血脂水平影響的研究表明，H型高血壓中DD型ACE對(duì)應(yīng)的血脂各指標(biāo)中，膽固醇的含量明顯偏高，具有更高的患高血脂癥的風(fēng)險(xiǎn)。

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（檀葉青編輯）

A Study the Effect of Angiotensin Converting Enzyme Gene Polymorphism on Activity of Angiotenisin Converting Enzyme and Blood Lipid Among the H-hypertension Patients

MENGWei，YU Zhou-hai
（Clinical Laboratory，Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai200021，China）

Objective To explore the effect of Angiotensin Concerting Enzyme gene polymorphism on the activity of Angiotensin Concerting Enzyme and blood lipid levels in H-hypertension patients and common hypertension patients.M ethods Genotypes of angiotensin converting enzyme，using the polymerase chain reaction method，were identified in 68 cases of H-hypertensive patients and 64 cases common hypertension patients，and the activities of different genotypes of angiotensin-converting enzyme and corresponding lipid levels were detected.Results Data analysis with SPSS19.0 showed that the activity of different genotypes angiotensin in between H-hypertension patients and common hypertension patients were statistically different（P＜0.01），but there were no statistical differences in the levels of angiotensin.H-hypertension group with homozygous DD（deletion）genotype had a higher blood lipid level，w ich was statistically different than that with heterozygous ID genotype and insertion homozygotes（genotype II）.The lipids included cholesterol（TC）（P＜0.01），high-density lipoprotein（HDLD）（P＜0.05），low-density lipoprotein（LDLC）（P＜0.05）and apolipoprotein B（P＜0.05）.In common hypertension group，only HDLC，LDLC and apolipoprotein B showed statistical differences（P＜0.05）.Conclusion H-hypertension patients with DD genotype of the angiotensin converting enzyme showed higher enzyme activity，higher blood lipid levels and increased cholesterol levels.The study indicatedthis grouppatients might be more susceptible to hyperlipidemia.

H type hypertension； Angiotensin converting enzyme； Gene polymorphism； Serum lipid

10.11748/bjm y.issn.1006-1703.2016.06.003

2015-10-14；

2016-03-07