崔治中/山東農(nóng)業(yè)大學(xué)

原種雞場ALV凈化技術(shù)和推廣進(jìn)展

崔治中/山東農(nóng)業(yè)大學(xué)

一、種雞場凈化技術(shù)和程序

（一）以零檢出為目標(biāo)的原種雞場核心群的凈化程序

（1）每只留種母雞收集6～8蛋孵化，出殼后胎糞p27檢測，淘汰p27陽性雛雞及其種雞。

（2）每只母雞的后代一籠飼養(yǎng)至6～8周齡，相鄰籠間用隔板相隔，保證不能相互接觸。

（3）在6～8周齡，采血于細(xì)胞培養(yǎng)上分離病毒，淘汰陽性雞的所有同胞雛雞及相應(yīng)母雞；小群飼養(yǎng)陰性母雞。

（4）在開產(chǎn)初期及留種前2次種蛋p27檢測，淘率陽性雞及同一小群母雞。

（5）在開產(chǎn)初期及留種前2次采血分離病毒，淘汰陽性雞及同一小群母雞。

（6）公雞在性成熟后2次采血及采精液分離病毒，淘汰陽性雞。

（7）嚴(yán)格檢測所有弱毒疫苗，絕對保證無外源性ALV污染。

不論單一品系的原種雞場還是具有多個配套系的原種雞場，所謂原種雞場是指不再從其他來源引進(jìn)新的種雞、僅從現(xiàn)有的雞群中選育的在種源上封閉繁種育種的雞場。對這樣的雞場（群）才需要或值得采用這一最嚴(yán)格的凈化程序。

1.出殼雛雞胎糞檢測和淘汰陽性雞。在出殼前，將每只種雞的種蛋置于同一出殼紙袋中，用棉拭子逐只采集1日齡雛雞胎糞，置于小試管中。在對一只母雞的雛雞采集完胎糞后，必須更換手套，或徹底洗手消毒。用ALVp27抗原ELISA檢測試劑盒做對1日齡胎糞檢測P27抗原。要注意，同一只母雞所產(chǎn)雛雞中，有一只陽性就應(yīng)淘汰同紙袋中的其他雛雞，同時淘汰相應(yīng)種雞。

對選留的雛雞，以母雞為單位，同一母雞的雛雞放于一個籠中隔離飼養(yǎng)。每個籠間不可直接接觸，包括避免直接氣流的對流。飼養(yǎng)期間要采取避免橫向傳播的各種措施。

對選留雞選用的所有弱毒疫苗，必須經(jīng)嚴(yán)格檢測，絕對保證沒有外源性ALV污染。

2.六周齡育雛后期采集血漿分離、檢測病毒血癥和淘汰陽性雞。

育雛期結(jié)束時，按育種規(guī)程對后備雞做性狀觀察，淘汰在性狀上不合格個體。對保留的雞逐只采集血漿，接種DF-1細(xì)胞分離病毒。培養(yǎng)9天后用ALVp27抗原ELISA檢測試劑盒逐空檢測p27抗原或用IFA逐空檢測感染細(xì)胞。淘汰陽性后備雞。在同一母雞的同一飼養(yǎng)籠中，有一只陽性就應(yīng)淘汰同籠中的其他后備雞。

對經(jīng)以上選留的后備種雞，可適當(dāng)合群維持小群隔離飼養(yǎng)。例如，每群20～50只左右，可根據(jù)后備種雞的總體數(shù)量視條件而定。

3. 23～25周齡留種雞開產(chǎn)初期檢測和淘汰。初產(chǎn)期屬于雞群禽白血病病毒排毒高峰期，因此逐只取初生3枚蛋一一編號，對蛋清用ALVp27抗原ELISA檢測試劑盒做P27抗原檢測，淘汰陽性雞。公雞可采集精液檢測P27抗原，淘汰陽性雞。

其余雞隨即采集血漿接種DF-1細(xì)胞分離病毒，培養(yǎng)9天后用ALVp27抗原ELISA檢測試劑盒逐空檢測p27抗原或用IFA逐空檢測感染細(xì)胞。淘汰陽性種雞。

同一小群中，如有一只為陽性，淘汰該群所有雞（在感染嚴(yán)重的雞群，這一條在凈化的第一世代可酌情處理）。

4.40～45周齡留種前檢測和淘汰。取2～3枚種蛋對蛋清做P27抗原檢測，淘汰陽性雞。公雞可采集精液檢測P27抗原或分離病毒，淘汰陽性雞。

其余雞隨即采集血漿接種DF-1細(xì)胞分離病毒，培養(yǎng)9天后用ALVp27抗原ELISA檢測試劑盒逐空檢測p27抗原或用IFA逐空檢測感染細(xì)胞。

淘汰陽性種母雞和種公雞。（特別注意，可引起垂直傳播）。

5.種蛋的選留和孵化。在經(jīng)上面“四”項留種前檢測淘汰陽性雞后，每只母雞僅選用1只檢測陰性公雞的精液授精。按規(guī)定時間留足種蛋，每只母雞的種蛋均標(biāo)號。在出殼前，將每只母雞的種蛋置于標(biāo)有母雞號的一個專用紙袋中，置于出雛箱中出雛。

6.第二世代雞的檢測和淘汰。

對經(jīng)上述“1”到“5”步檢測淘汰后種雞的出殼的雛雞，作為凈化后第二世代雞。繼續(xù)按“1”到“5”的程序，實(shí)施第二世代的檢測和凈化。第三世代后可按此程序繼續(xù)循環(huán)進(jìn)行。

7. 檢測陽性閾值的調(diào)整。在全群不再檢測出陽性，或陽性率很低時，可酌情調(diào)整在ELISA中判定陽性的p/s閾值，從嚴(yán)淘汰。

8.凈化程序啟動時期的選擇。

以上程序為一個世代的全部過程，但各雞場可以根據(jù)凈化計劃實(shí)施開始的時期不同，可以從不同的階段開始。

作為剛起始凈化過程的種雞群，多數(shù)都選擇從種雞的檢測和淘汰開始。

9.凈化狀態(tài)的維持。實(shí)施上述完整的對核心群雞逐一檢測和淘汰的程序，工作量很大、成本也很高。根據(jù)國外成功的經(jīng)驗，當(dāng)一個核心群連續(xù)3～4個世代都檢測不出ALV感染雞后，可轉(zhuǎn)入維持期。在進(jìn)入維持期后，就不需再對每只后備雞逐一做上面所有檢測步驟。可改為對一定比例雞的定期抽檢，例如5%左右。而且也不一定要用細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒，僅僅采用操作上比較簡單的檢測胎糞和蛋清的p27抗原。當(dāng)然，在這方面我們還沒有直接經(jīng)驗，還有待于今后逐漸摸索和成熟。

（二）引進(jìn)的祖代或父母代種雞場的凈化

這類種雞場對ALV的凈化只是廣義含義上的凈化。實(shí)際上，他們只需要做到選擇凈化的種源和監(jiān)控并維持引進(jìn)種雞群的凈化狀態(tài)。

對新的供應(yīng)商育種公司，可要求對其曾祖代雞群或祖代雞群采集一定數(shù)量血清樣品（100～200份）檢測抗體，確認(rèn)都為陰性，或更有可操作性的是要求其提供初產(chǎn)種蛋檢測其蛋清p27抗原（100～200個）及出殼雛雞的胎糞p27抗原。

（三）小型自繁自養(yǎng)黃羽肉雞或地方品種的種雞群的凈化

鑒于現(xiàn)在我國大多數(shù)自繁自養(yǎng)黃羽肉雞或地方品種的種雞群都已不同程度的感染了ALV-J和其他亞群外源性ALV，有的已發(fā)生臨床病理表現(xiàn)并造成明顯經(jīng)濟(jì)損失。這類公司的規(guī)模和經(jīng)濟(jì)實(shí)力還不夠大，更沒有技術(shù)力量和條件做細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒。

這時可采用相對簡化的檢測淘汰程序作為過渡期。在這類種雞場，可僅對雛雞出殼后做胎糞p27抗原檢測及對種蛋蛋清做p27抗原檢測?；蛘吒唵蔚刂粰z測種雞種蛋蛋清p27抗原。但這只能作為不得已的過渡期，長遠(yuǎn)下去也會被市場所淘汰。

二、禽白血病凈化示范及其成功推廣的啟示

禽白血病是我國規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)第一個通過病原凈化實(shí)現(xiàn)有效的防控的疫病。白羽肉雞近10年沒有顯著的病例報告；蛋用型雞2013年后沒有典型病例報告；黃羽肉雞已有一個育種公司基本實(shí)現(xiàn)凈化，多個公司在ALV凈化方面取得顯著進(jìn)展；地方品種雞：有待推廣。

禽白血病凈化進(jìn)展也能給我國其他動物疫病防控的帶來很多啟示，而且很多發(fā)達(dá)國家已經(jīng)以凈化為主要手段防控動物疾病，包括：牛結(jié)核病、牛布氏桿菌病、?？谔阋?、羊布氏桿菌病、羊藍(lán)舌病、豬偽狂犬病、豬口蹄疫、豬瘟、雞白痢、高致病性禽流感。

另外，值得我們關(guān)注的是，近幾年世界獸醫(yī)界發(fā)表的“SCI”論文中估計有一半來自中國獸醫(yī)界，世界獸醫(yī)界發(fā)表的最杰出的“SCI”論文，也幾乎都來自中國。但中國的動物疫病發(fā)病狀況是世界上最嚴(yán)重的，動物死亡率也是最高的。

這說明什么？養(yǎng)殖業(yè)既需要有疫病充滿“SCI”精神的杰出的獸醫(yī)科學(xué)家和學(xué)者，但更需要大量的能面對和解決現(xiàn)實(shí)問題的有“工匠”技藝的獸醫(yī)專家和學(xué)者。各級主管部門要鼓勵高校和科研單位深入畜牧場多為行業(yè)服務(wù)。（本文根據(jù)會議錄音及資料整理，未經(jīng)專家本人審閱，如有出入，以專家意見為準(zhǔn)。）