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        兒童糞便中四環(huán)素抗性大腸桿菌的分離與鑒定*

        2016-11-01 03:02:41徐先林歐剛衛(wèi)
        關(guān)鍵詞:抗性菌群測序

        徐先林,歐剛衛(wèi)

        (遵義醫(yī)學(xué)院 生物化學(xué)教研室,貴州 遵義 563099)

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        臨床醫(yī)學(xué)研究

        兒童糞便中四環(huán)素抗性大腸桿菌的分離與鑒定*

        徐先林,歐剛衛(wèi)

        (遵義醫(yī)學(xué)院 生物化學(xué)教研室,貴州 遵義563099)

        目的 分離、鑒定無四環(huán)素使用史兒童糞便中四環(huán)素抗性菌株。方法 采用含150 μg/mL四環(huán)素營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基分區(qū)劃線法從兒童糞便樣本中分離、純化四環(huán)素抗性細(xì)菌; 通過觀察菌落外觀形態(tài)特征、16S rRNA基因測序法、生理生化試驗、梅里埃全自動微生物分析儀鑒定細(xì)菌。結(jié)果 從兒童糞便樣本中隨機分離出20例細(xì)菌, 鑒定結(jié)果顯示均為大腸桿菌。結(jié)論 在未接觸四環(huán)素兒童糞便中大腸桿菌是攜帶四環(huán)素抗性的細(xì)菌之一。

        兒童;四環(huán)素;16S rRNA基因;分離;鑒定

        腸道是一個巨大的微生物生態(tài)系統(tǒng), 菌群種類復(fù)雜, 由1000到1150種細(xì)菌組成[1], 菌群結(jié)構(gòu)穩(wěn)定對人體健康至關(guān)重要。研究表明, 直接或間接使用抗生素都會破壞環(huán)境中菌群平衡并致抗性基因出現(xiàn)[2-3]。四環(huán)素不良反應(yīng)和副作用較大, 已多年禁止使用于兒童疾病治療[4], 但仍作為飼料添加劑以及促生長劑廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)、家禽和家畜養(yǎng)殖[5]。四環(huán)素具有高度水溶性和低揮發(fā)性導(dǎo)致其可以穩(wěn)定存在于環(huán)境[6], 通過食物鏈等方式進(jìn)入人體腸道, 造成抗生素及抗性基因蓄積于人體腸道。前期實驗研究結(jié)果表明, 受試兒童雖無明確四環(huán)素使用史, 然而大多數(shù)糞便樣本檢測出四環(huán)素抗性基因tet(B)[7]??剐曰蛟谀c道菌群間廣泛傳播可能導(dǎo)致菌群穩(wěn)定結(jié)構(gòu)破壞, 可導(dǎo)致潛在致病菌過分繁殖, 破壞腸粘膜屏障從而引發(fā)多種疾病。而對于兒童生長發(fā)育的潛在影響仍有待研究。

        分離腸道細(xì)菌并鑒定抗生素抗性菌株, 對于初步了解腸道內(nèi)抗性菌株分布情況及探討抗性基因的攜帶與傳播方式有著重要意義。目前, 關(guān)于四環(huán)素抗性細(xì)菌探討主要集中在環(huán)境土壤或者動物糞便樣本, 但對于人體腸道菌群中四環(huán)素抗性細(xì)菌現(xiàn)狀有待研究。我國兒童已經(jīng)禁止使用四環(huán)素多年, 是探討環(huán)境抗生素對兒童腸道菌群抗生素抗性菌及相關(guān)抗性基因的分布和攜帶狀態(tài)、對腸道菌群的種類和分布以及對兒童健康的影響十分理想的群體。本實驗采用四環(huán)素選擇性培養(yǎng)基分純并鑒定兒童糞便樣本中四環(huán)素抗性大腸桿菌, 以探討兒童腸道菌群中大腸桿菌四環(huán)素抗性基因攜帶狀況, 為進(jìn)一步研究環(huán)境抗生素對兒童健康影響提供實驗基礎(chǔ)。

        1 材料與方法

        1.1樣本遵義市健康兒童糞便樣本, 無四環(huán)素使用史。糞便采集后, 迅速置于-80 ℃保存,并盡快進(jìn)行后續(xù)實驗。

        1.2方法

        1.2.1四環(huán)素抗性細(xì)菌分純?nèi)⌒沦徶玫臓I養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基粉末按說明書配制, 121 ℃滅菌15 min, 待溫度降至50 ℃加入四環(huán)素鹽酸鹽溶液, 使四環(huán)素終濃度為150 μg/mL[8], 迅速搖勻后傾倒平板, 4 ℃保存?zhèn)溆? 從-80 ℃冰箱中取出糞便樣本于室溫中解凍, 用滅菌接種環(huán)蘸取少許樣本采用分區(qū)劃線法接種于新鮮配制的含四環(huán)素營養(yǎng)瓊脂平板上, 置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h; 隨機挑取平板上菌落20個, 分區(qū)劃線接種于新平板上, 37 ℃培養(yǎng)24 h; 連續(xù)傳代3次后, 觀察并記錄各菌落外觀特征。

        1.2.216S rRNA基因測序鑒定

        1.2.2.1引物[9]上游引物(27F): 5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′,下游引物(1492R): 5′-TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3′, 引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

        1.2.2.216S rRNA基因PCR模板制備用滅菌槍頭挑取純化單菌落菌體少許加入100 μL無菌水中, 渦旋混勻后, 沸水浴10 min, 稍冷后12 000 rpm離心1 min, 上清液作為模板直接用于16S rRNA基因PCR擴增。

        1.2.2.3PCR擴增體系上游引物(10 pmol/μL) 1 μL、下游引物(10 pmol/μL) 1 μL、PCR Master Mix (2×) 25 μL、模板(空白對照以滅菌水代替) 5 μL和滅菌水18 μL。

        1.2.2.4PCR擴增條件94 ℃預(yù)變性5 min,94 ℃ 變性45 s, 56 ℃退火45 s, 72 ℃延伸90 s, 30個循環(huán), 72 ℃延伸10 min;4 ℃保存擴增產(chǎn)物。

        1.2.2.5電泳取PCR擴增產(chǎn)物5 μL進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳。恒壓120 V, 電泳35 min后用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果。

        1.2.2.6測序和比對根據(jù)電泳結(jié)果將能清晰分辨出目的條帶且具有一定亮度的PCR產(chǎn)物送生工生物工程(上海)股份有限公司武漢測序部測序。16S rRNA基因大小約為1 500 bp, 采用雙向測序。

        將測序結(jié)果利用SeqMan軟件去除測序圖譜兩端峰形不規(guī)則的序列, 拼接雙向測序結(jié)果, 查找并修正其中拼接錯誤; 對于測序失敗和雙向測序結(jié)果不能正確拼接的細(xì)菌, 需要再次PCR擴增16S rRNA基因, 重新測序和拼接。

        將測序結(jié)果進(jìn)行Blast(Basic Local Alignment Search Tool)在線序列比對分析用作細(xì)菌鑒定, 方法參照文獻(xiàn)[10]。

        1.2.3革蘭氏染色、生理生化試驗及運動性檢測對分離的20株細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色、生理生化試驗及運動性檢測, 方法參照《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》第二部分[11]。

        1.2.4梅里埃VITEK-2全自動微生物分析儀鑒定將培養(yǎng)18~24h的細(xì)菌用無菌稀釋液(0.45%~0.5% NaCl, pH4.5~7.0) 2.5 mL調(diào)節(jié)至0.50~0.63個麥?zhǔn)媳葷釂挝? 連接革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定卡, 上機并按照梅里埃全自動微生物分析儀說明書進(jìn)行操作, 10h后查看鑒定結(jié)果。

        2 結(jié)果

        2.1菌株菌落外觀形態(tài)特征從含四環(huán)素的營養(yǎng)瓊脂平板上隨機分離20個菌落, 傳代3次, 編號為1~20, 各菌株在營養(yǎng)瓊脂平板上呈現(xiàn)灰白色, 菌落小, 表面光滑, 邊緣整齊的菌落外觀形態(tài)。

        2.216S rRNA測序鑒定結(jié)果采用通用引物27F和1492R擴增細(xì)菌16S rRNA基因, 擴增片段長度為1 500 bp左右, 特異性好, 可用作測序[10](見圖1); 測序圖譜采用chromas軟件分析, 信號強且無套峰, 測序結(jié)果可靠。將雙向測序結(jié)果利用SeqMan軟件去除測序圖譜兩端峰形不規(guī)則序列, 拼接雙向測序結(jié)果, 查找并修正其中拼接錯誤, 將各菌株16S rRNA基因約1265 bp序列導(dǎo)入NCBI網(wǎng)站進(jìn)行Blast在線序列比對, 以同源性高低的順序從上到下排列, 取最大分值(max score)最高且E值為0的菌株作為鑒定結(jié)果[10]。最大分值越大, 同源性越高; E值表示在數(shù)據(jù)庫搜索時與期望值隨機匹配的可能性, E=0表示匹配不是隨機產(chǎn)生的, E值越小置信度越高[10]。部分16S rRNA基因序列在線比對最大分值最高、相似性大于99%且E值=0的細(xì)菌不只一種, 需要結(jié)合其它方法得出最終結(jié)論, 表1列出了每株細(xì)菌Blast比對后按同源性高低排序前兩位細(xì)菌。

        圖1 20株細(xì)菌16S rRNA基因PCR擴增電泳結(jié)果

        表120株細(xì)菌的16S rRNA基因序列分析鑒定結(jié)果

        細(xì)菌編號鑒定結(jié)果最大分值E值相似性(%)1Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23310.0/0.0100/992Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23370.0/0.0100/1003Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2329/23290.0/0.099/994Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23370.0/0.0100/1005Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2346/23460.0/0.0100/1006Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2331/23260.0/0.099/997Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23370.0/0.0100/1008Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2331/23260.0/0.099/999Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23370.0/0.0100/10010Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23370.0/0.0100/10011Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23310.0/0.0100/9912Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23370.0/0.0100/10013Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23370.0/0.0100/10014Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23310.0/0.0100/9915Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23310.0/0.0100/9916Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2333/23270.0/0.099/9917Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23370.0/0.0100/10018Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23370.0/0.0100/10019Cronobactersakazakii(阪崎克羅諾桿菌)/Escherichiacoli(大腸桿菌)2337/23370.0/0.0100/10020Escherichiacoli(大腸桿菌)/Shigellasp.(志賀菌屬)2337/23370.0/0.0100/100

        2.3革蘭氏染色、生理生化試驗及細(xì)菌運動性試驗結(jié)果20株細(xì)菌均為G-桿菌, 運動性呈陰性, 生理生化試驗結(jié)果見表2。生理生化試驗結(jié)果參照《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》[11]和《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(第8版)》[12]標(biāo)準(zhǔn), 所分離細(xì)菌與大腸桿菌特征最相符。志賀菌屬細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖不產(chǎn)氣, 不發(fā)酵乳糖; 阪崎克羅諾桿菌甲基紅試驗陰性、伏普試驗陽性(見表2)。

        表220株細(xì)菌生理生化試驗、革蘭氏染色、運動性試驗結(jié)果

        細(xì)菌編號糖發(fā)酵試驗葡萄糖乳糖麥芽糖甘露糖蔗糖甲基紅試驗伏普試驗硫化氫試驗檸檬酸鹽利用試驗吲哚試驗?zāi)蛩胤纸庠囼瀯恿υ囼灨锾m氏染色1⊕⊕⊕⊕⊕+---+--G-2⊕⊕⊕⊕-+---+--G-3⊕⊕⊕⊕-+---+--G-4⊕⊕⊕⊕-+---+--G-5⊕⊕⊕⊕-+---+--G-6⊕⊕⊕⊕⊕+---+--G-7⊕⊕⊕⊕-+--++--G-8⊕⊕⊕⊕⊕+---+--G-9⊕⊕⊕⊕-+---+--G-10⊕⊕⊕⊕⊕+---+--G-11⊕⊕⊕⊕++--++--G-12⊕⊕⊕⊕⊕+---+--G-13⊕⊕⊕⊕-+---+--G-14⊕⊕⊕⊕-+---+--G-15⊕-⊕⊕-+--++--G-16⊕+⊕⊕-+--++--G-17⊕⊕⊕⊕-+---+--G-18⊕⊕⊕⊕-+--++--G-19⊕⊕⊕⊕-+---+--G-20⊕⊕⊕⊕⊕+--++--G-

        +表示陽性; -表示陰性; ⊕表示產(chǎn)氣產(chǎn)酸。

        2.4梅里埃全自動微生物分析儀鑒定結(jié)果采用梅里埃全自動微生物分析儀對20株細(xì)菌進(jìn)行鑒定(見表3), 結(jié)果顯示20株細(xì)菌均為大腸桿菌, 鑒定率(可能性)>86.78%, 置信度為可接受(acceptable identification)至極好(excellent identification)。綜合上述結(jié)果可以確定該20株細(xì)菌都為大腸桿菌。

        表3梅里埃VITEK-2全自動微生物分析儀鑒定結(jié)果

        細(xì)菌編號鑒定結(jié)果鑒定率(%)置信度1Escherichiacoli93.00非常好2Escherichiacoli99.00極好3Escherichiacoli96.30極好4Escherichiacoli94.56非常好5Escherichiacoli96.30極好6Escherichiacoli99.00極好7Escherichiacoli91.42好8Escherichiacoli94.84非常好9Escherichiacoli97.29極好10Escherichiacoli86.78可接受11Escherichiacoli99.00極好12Escherichiacoli96.30極好13Escherichiacoli91.42好14Escherichiacoli97.29極好15Escherichiacoli86.78可接受16Escherichiacoli99.00極好17Escherichiacoli99.00極好18Escherichiacoli97.29極好19Escherichiacoli94.56非常好20Escherichiacoli99.00極好

        圖2 細(xì)菌進(jìn)化樹分析

        2.516S rRNA基因序列同源性分析從NCBI中查找大腸桿菌(E.coli, gi:174375)、志賀菌屬(Shigellasp. CH-35, gi:928241852)和阪崎克羅諾桿菌(Cronobactersakazakiistrain E601, gi: 118498 806) 16S rRNA基因序列, 并與20株細(xì)菌16S rRNA基因進(jìn)行序列比對, clustalx 1.83軟件分析結(jié)果顯示它們具有相似的保守區(qū)和多態(tài)區(qū), 序列相似度高。采用MEGA5.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(見圖2), 分離的20株大腸桿菌(編號1~20)分布在2個類群; 大腸桿菌、志賀菌和阪崎克羅諾桿菌進(jìn)化關(guān)系較近, 位于同一個分類群中。

        3 討論

        抗生素過度使用導(dǎo)致腸道菌群結(jié)構(gòu)改變以及抗性基因增多已經(jīng)引起全球高度關(guān)注。人體腸道細(xì)菌種類繁多且密度大, 是抗生素抗性基因儲存和轉(zhuǎn)移的良好場所, 有利于抗性基因在腸道細(xì)菌間水平傳播; 健康的腸道菌群主要由有益或者無害細(xì)菌組成, 在腸腔形成一個天然保護(hù)屏障抵御病原菌入侵, 保護(hù)和促進(jìn)腸上皮細(xì)胞發(fā)育, 產(chǎn)生短鏈脂肪酸等, 對人體健康發(fā)揮著重要作用。尤其在兒童階段, 腸道菌群促進(jìn)機體免疫系統(tǒng)發(fā)育的作用與遠(yuǎn)期健康密切相關(guān)。抗性基因轉(zhuǎn)入致病菌或條件致病菌并大量繁殖極易導(dǎo)致穩(wěn)定的菌群結(jié)構(gòu)破壞, 引發(fā)肥胖、過敏等多種疾病。菌群中抗性基因的出現(xiàn)除了源于直接的抗生素篩選壓力外, 還可能來自于環(huán)境中[7,13]。四環(huán)素是一種廣譜抗生素, 已多年不使用于兒童群體, 探討其腸道菌群對抗生素抗性基因的攜帶和傳播具有特殊意義。

        細(xì)菌16S rRNA基因序列由保守區(qū)和可變區(qū)組成, 兩者互相交錯排列, 采用通用引物27F和1492R擴增產(chǎn)物包含16S rRNA基因所有的可變區(qū), 適用于親緣關(guān)系不同的細(xì)菌鑒定。在未直接接觸四環(huán)素的兒童群體中, 用16S rRNA基因檢測方法發(fā)現(xiàn)腸道菌群中普遍存在四環(huán)素抗性基因分布[7], 但四環(huán)素抗性基因存在于何種細(xì)菌仍不清楚。本實驗通過四環(huán)素抗性培養(yǎng)篩選, 其抗性菌株經(jīng)16S rRNA基因全序列測定后通過Blast比對尚不能得到精確鑒定細(xì)菌, 其原因在于大腸桿菌與志賀菌或大腸桿菌與阪崎克羅諾桿菌無法區(qū)分(見表1)。有研究表明, 志賀菌未被排除在大腸桿菌種系發(fā)育群之外, 它們可能具有相同的進(jìn)化起源[14]; 而從NCBI中查找大腸桿菌、志賀菌和阪崎克羅諾桿菌16S rRNA基因序列, 經(jīng)相似性比對分析顯示它們序列同源性高, 在構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹中位于同一個分類群(見圖2)?;诖竽c桿菌、志賀菌和阪崎克羅諾桿菌16S rRNA基因序列相似度極高, 單純的16S rRNA基因測序法鑒定存在不確定性, 而且細(xì)菌16S rRNA基因多拷貝現(xiàn)象[15-16]、水平轉(zhuǎn)移問題[17]、異化現(xiàn)象[18]及PCR擴增等實驗操作過程中的諸多問題[18]都可能影響鑒定結(jié)果, 還需其他方法補充或驗證鑒定結(jié)果。

        本研究首先通過16S rRNA測序法確定未知細(xì)菌與數(shù)據(jù)庫中細(xì)菌的相似性, 初步判斷細(xì)菌種類; 再以生理生化試驗結(jié)果加以驗證; 最后結(jié)合全自動微生物分析儀得出準(zhǔn)確鑒定結(jié)果。綜合基因型與表型分析, 避免了單一方法錯誤判讀, 結(jié)果可靠, 20株細(xì)菌鑒定均為大腸桿菌。腸道菌群復(fù)雜, 厭氧及兼性厭氧菌居多[19], 在目前條件下, 能夠通過培養(yǎng)分離的腸道微生物只占極少數(shù), 且不同培養(yǎng)條件以及不同培養(yǎng)基分離到的細(xì)菌不盡相同[20]。當(dāng)采用腦心浸液瓊脂、血平板等不同培養(yǎng)基, 運用厭氧罐及延長培養(yǎng)時間可培養(yǎng)出更多細(xì)菌, 如腸球菌、 雙歧桿菌等(結(jié)果未展示)。實驗中以四環(huán)素選擇性培養(yǎng)基分離的20株大腸桿菌, 經(jīng)四環(huán)素K-B紙片法藥敏試驗確定均為四環(huán)素抗性菌(結(jié)果未展示), 有利于深入研究抗性大腸桿菌攜帶四環(huán)素抗性基因現(xiàn)狀及傳播方式。研究結(jié)果表明, 在未直接接觸四環(huán)素的兒童腸道菌群中,抗四環(huán)素抗性基因存在于大腸桿菌中, 但其抗性基因的種類、攜帶方式、傳播以及對兒童健康的影響仍有待研究。

        [1] Eckburg P B, Bik E M, Bernstein C N, et al. Diversity of the human intestinal microbial flora[J]. Science, 2005, 308(5728): 1635-1638.

        [2] Jernberg C, L?fmark S, Edlund C, et al. Long-term impacts of antibiotic exposure on the human intestinal microbiota[J]. Microbiology, 2010, 156(11): 3216-3223.

        [3] Mitsou E K, Kirtzalidou E, Pramateftaki P, et al. Antibiotic resistance in faecal microbiota of Greek healthy infants[J]. Benef Microbes, 2010, 1(3): 297-306.

        [4] Sánchez A R, Rogers R S, Sheridan P J. Tetracycline and other tetracycline-derivative staining of the teeth and oral cavity[J]. Int J Dermatol, 2004, 43(10): 709-715.

        [5] Kim K R, Owens G, Kwon S I, et al. Occurrence and environmental fate of veterinary antibiotics in the terrestrial environment[J]. Water, Air, & Soil Pollution, 2011, 214(1): 163-174.

        [6] Daghrir R, Drogui P. Tetracycline antibiotics in the environment: a review[J]. Environ Chem Lett, 2013, 11(3): 209-227.

        [7] 文雯, 徐先林, 歐剛衛(wèi). 多種抗生素抗性基因在兒童腸道菌群的攜帶情況[J]. 遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2013, 36(2): 113-115.

        [8] Narisawa N, Haruta S, Arai H, et al. Coexistence of antibiotic-producing and antibiotic-sensitive bacteria in biofilms is mediated by resistant bacteria[J]. Appl Environ Microbiol, 2008, 74(12): 3887-3894.

        [9] Moreno C, Romero J, Espejo R T. Polymorphism in repeated 16S rRNA genes is a common property of type strains and environmental isolates of the genus Vibrio[J]. Microbiology, 2002, 148(Pt 4):1233-1239.

        [10] 朱飛舟, 陳利玉, 陳漢春. 16S rRNA基因序列分析法鑒定病原細(xì)菌[J]. 中南大學(xué)學(xué)報: 醫(yī)學(xué)版, 2013, 38(10): 1035-1041.

        [11] 東秀珠, 蔡妙英. 常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 2001: 66-398.

        [12] 布坎南, 吉本斯. 伯杰細(xì)菌鑒定手冊[M]. 中國科學(xué)院微生物研究所《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》翻譯組,譯. 第8版. 北京: 科學(xué)出版社, 1984: 382-462.

        [13] Mitsou E K, Kirtzalidou E, Pramateftaki P, et al. Antibiotic resistance in faecal microbiota of Greek healthy infants[J]. Benef microbes, 2010, 1(3): 297-306.

        [14] 王林, 徐建國. 志賀菌與大腸桿菌進(jìn)化關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 疾病監(jiān)測, 2005, 20(5): 275-277.

        [15] Větrovsky T, Baldrian P. The variability of the 16S rRNA gene in bacterial genomes and its consequences for bacterial community analyses[J]. Plos One, 2013, 8(2): e57923.

        [16] 閻永偉, 張德民. 原核生物16S rRNA基因多重拷貝及其序列異化[J]. 生物學(xué)雜志, 2013, 30(4): 63-66.

        [17] Tian R M, Cai L, Zhang W P, et al. Rare events of intragenus and intraspecies horizontal transfer of the 16S rRNA gene[J]. Genome Biol Evol, 2015, 7(8): 2310-2320.

        [18] 劉馳, 李家寶, 芮俊鵬, 等. 16S rRNA基因在微生物生態(tài)學(xué)中的應(yīng)用[J]. 生態(tài)學(xué)報, 2015, 35(9): 2769-2788.

        [19] O'Hara A M, Shanahan F. The gut flora as a forgotten organ[J]. Embo Rep, 2006, 7(7): 688-693.

        [20] O'Sullivan D J. Methods for analysis of the intestinal microflora[J]. Curr Issues Intest Microbiol, 2000, 1(2): 39-50.

        [收稿2016-05-04;修回2016-06-12]

        (編輯:王福軍)

        Isolation and identification of tetracycline resistantE.coliin children intestinal microbiota

        XuXianlin,OuGangwei

        (Department of Biochemistry,Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099,China)

        Objective To isolate and identify the tetracycline resistant strains in fecal of children without tetracycline treatment.Methods The strains were cultivated and isolated by nutrient agar plates with tetracycline (150 μg/mL). The bacterial strains were identified by the characteristics of bacterial colonies, 16S rRNA gene sequencing, bacterial physiological and biochemical tests and BioMerienx fully-automatic germ analysis system respectively.Results Twenty strains ofEscherichiacoliwere isolated and identified.ConclusionE.coliis one of the tetracycline resistant bacteria in fecal samples of children which without tetracycline treatment.

        children; tetracycline; 16S rRNA gene; isolation; identification

        貴州省科技廳基金資助項目(NO:黔科合J字[2009]2301);遵義醫(yī)學(xué)院博士啟動金資助項目(NO:2010F-391)。

        歐剛衛(wèi),男,博士,教授,碩士生導(dǎo)師,研究方向:腸道菌群與免疫,E-mail:gangwei.ou@zmc.edu.cn。

        R372

        A

        1000-2715(2016)04-0387-05

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