肖世基，甘佳玉，張茂生

(遵義醫(yī)學(xué)院 藥物化學(xué)教研室，貴州 遵義　563099)

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基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究

灰氈毛忍冬花蕾正丁醇部位化學(xué)成分的研究*

肖世基，甘佳玉，張茂生

(遵義醫(yī)學(xué)院 藥物化學(xué)教研室，貴州 遵義563099)

目的 研究灰氈毛忍冬花蕾正丁醇部位化學(xué)成分。方法 采用硅膠柱色譜及制備液相色譜等分離方法進(jìn)行分離純化, 經(jīng)核磁共振等波譜技術(shù)進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果 從灰氈毛忍冬花蕾正丁醇部位中分離得到6個(gè)化合物, 分別鑒定為原兒茶醛(1)、咖啡酸丁酯(2)、3-O-咖啡?？崴岫□?3)、3,5-O-雙咖啡?；崴峒柞?4)、3,4-O-雙咖啡?；崴峒柞?5)、β-谷甾醇(6)。結(jié)論 化合物1和2為首次從灰氈毛忍冬中分離得到。

灰氈毛忍冬; 忍冬科; 酚酸; 化學(xué)成分

灰氈毛忍冬 (LoniceramacranthodesHand-Mazz.) 為忍冬科 (Caprifoliaceae)忍冬屬木質(zhì)藤本植物, 以花入藥, 主產(chǎn)地湖南和貴州省, 有“大銀花”“巖銀花”“山銀花”“木銀花”等名稱(chēng)[1]?！吨袊?guó)中藥資源志要》記載灰氈毛忍冬花蕾甘、涼, 清熱解毒, 宣散風(fēng)熱, 產(chǎn)地作“金銀花”入藥[2]。而2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》將來(lái)源于灰氈毛忍冬、紅腺忍冬(LonicerahypoglaucaMiq)、華南忍冬(LoniceraconfuseDC.)或黃褐毛忍冬(LonicerafulvotnetosaHsu et S. C. Cheng)干燥花蕾或帶初開(kāi)

的花統(tǒng)稱(chēng)為“山銀花”, 來(lái)源于忍冬(LonicerajaponicaThunb.)干燥花蕾或帶初開(kāi)的花稱(chēng)為“金銀花”, 以示區(qū)分[3]?；覛置潭瘜W(xué)成分研究表明其主要含酚酸、黃酮苷和皂苷類(lèi)化合物[4-8]。為了闡明黔產(chǎn)灰氈毛忍冬的化學(xué)成分, 為貴州道地藥材的利用奠定物質(zhì)基礎(chǔ), 為“山銀花”合理用藥提供科學(xué)依據(jù), 我們進(jìn)一步對(duì)采自貴州省遵義市的灰氈毛忍冬花蕾進(jìn)行了研究, 從其正丁醇部位中分離得到6個(gè)化合物(見(jiàn)圖1)。

1　材料與方法

1.1儀器與材料Agilent DD2 400-MR型核磁共振儀, TMS為內(nèi)標(biāo) (美國(guó)Agilent公司); Sepacore中壓制備系統(tǒng)(瑞士BüCHI公司); LC3000型高效液相色譜儀(中國(guó)北京創(chuàng)新通恒公司); C18, 5 μm, 10 × 250 mm半制備HPLC柱(日本YMC公司); 反相C18填料(ODS)(日本富士硅化學(xué)株式會(huì)社); 薄層色譜硅膠GF 254 和柱色譜硅膠(300～400目) (中國(guó)青島海洋化工公司)。

灰氈毛忍冬花蕾于2013年9月購(gòu)自遵義市綏陽(yáng)縣小關(guān)鄉(xiāng)小關(guān)村, 由遵義醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室楊建文教授鑒定為灰氈毛忍冬(LoniceramacranthodesHand-Mazz.)花蕾, 樣品標(biāo)本(No.20130910)保存在遵義醫(yī)學(xué)院天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2提取分離灰氈毛忍冬花蕾干重20 kg,粉碎后用95%乙醇回流(90 ℃)提取3次, 每次3 h, 減壓濃縮提取液得乙醇提物約3.8 kg, 將其分散于水中, 依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。減壓濃縮萃取物得正丁醇部位約1.5 kg。取正丁醇部位浸膏900 g經(jīng)乙酸乙酯浸泡提取濃縮提取物得到乙酸乙酯可溶物約50 g, 經(jīng)中壓硅膠柱色譜(90×460 mm, 氯仿-甲醇梯度洗脫)分為12個(gè)部分(Fr.1～12)。第1部分(Fr.1)有白色晶體析出, 重結(jié)晶得到化合物6; 第2部分(Fr.2)經(jīng)ODS柱色譜(36×460 mm, 甲醇:水, 30:70→80:20,V/V)分離為6個(gè)部分(Fr.2.1～6); Fr.2.1經(jīng)半制備HPLC分離(C18, 甲醇:水, 40:60,V/V, 3 mL/min)得到化合物3(12 mg,tR=10.0 min), Fr.2.4經(jīng)半制備HPLC分離(C18, 乙腈:水, 30:70,V/V, 4 mL/min)得到化合物5(9 mg,tR=11.5 min), Fr.2.6經(jīng)半制備HPLC分離(C18, 甲醇:水, 40:50,V/V, 3 mL/min)得到化合物4(40 mg,tR=12.2 min); 第3部分(Fr.3)經(jīng)半制備HPLC分離(C18, 甲醇:水, 75:25,V/V, 3 mL/min)得到化合物2(10 mg,tR=8.1 min); 第四部分(Fr.4)經(jīng)半制備HPLC分離(C18, 甲醇:水, 80:20,V/V, 3 mL/min)得到化合物1(17 mg,tR=13.5 min)。

2　結(jié)果

我們對(duì)采自貴州省遵義市的灰氈毛忍冬花蕾進(jìn)行了研究, 從其乙醇提取物正丁醇部位中分離得到6個(gè)化合物(見(jiàn)圖1), 分別鑒定為：原兒茶醛(1)、 咖啡酸丁酯(2)、3-O-咖啡?？崴岫□?3)、3,5-O-雙咖啡?；崴峒柞?4)、3,4-O-雙咖啡?；崴峒柞?5)和β-谷甾醇(6)。

圖1　從灰氈毛忍冬花蕾中分離得到的化合物結(jié)構(gòu)圖

化合物1：淺紅色膠狀物,1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 9.68 (1H, s, H-7), 7.29 (2H, m, H-2, 6), 6.90 (1H, d,J=6.0 Hz, H-5)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的一致, 鑒定化合物1為原兒茶醛。

化合物2：淺黃色粉末,1H-NMR (400 MHz, CD3COCD3)δ: 7.54 (1H, d,J=15.9 Hz, H-7), 7.16 (1H, br. s, H-2), 7.04 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5), 6.86 (1H, br. d,J=8.0 Hz, H-6), 6.28 (1H, d,J=15.9 Hz, H-8), 4.14 (2H, t,J=6.6 Hz, H-1′), 1.65 (2H, m, H-2′), 1.41 (2H, m, H-3′), 0.94 (3H, t,J=7.4 Hz, H-4′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的一致, 鑒定化合物2為咖啡酸丁酯。

化合物3：棕色膠狀物,1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.38 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-7′), 7.00 (1H, br. s, H-2′), 6.94 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5′), 6.74 (1H, d,J=8.0 Hz, H-6′), 6.08 (1H, d,J=15.9 Hz, H-8′), 5.01 (1H, m, H-3), 3.85 ～ 4.00 (3H, m, H-4, 8), 3.57 (1H, m, H-5), 2.09 (2H, m, H-2, 6), 1.91 (1H, br. d,J=13.0 Hz, H-2), 1.75 (1H, br. t,J=11.2 Hz, H-6), 1.47 (2H, m, H-9), 1.23 (2H, m, H-10), 0.79 (3H, t,J=7.4 Hz, H-11)。13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 73.1 (C-1), 37.2 (C-2), 66.9 (C-3), 69.3 (C-4), 71.0 (C-5), 35.1 (C-6), 173.2 (C-7), 64.1 (C-8), 30.0 (C-9), 18.5 (C-10), 13.5 (C-11), 125.1 (C-1′), 114.6 (C-2′), 145.8 (C-3′), 145.2 (C-4′), 115.8 (C-5′), 121.4 (C-6′), 149.0 (C-7′), 113.6 (C-8′), 165.4 (C-9′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致, 鑒定化合物3為3-O-咖啡?？崴岫□ァ?/p>

化合物4：淺黃色膠狀物,1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.62 (1H, d,J=15.8 Hz, H-7′), 7.55 (1H, d,J=15.6 Hz, H-7′′), 7.07 (2H, br. s, H-2′, 2′′), 6.96 (2H, m, H-5′, 5′′), 6.79 (2H, m, H-6′, 6′′), 6.34 (1H, d,J=15.8 Hz, H-8′), 6.22 (1H, d,J=15.6 Hz, H-8′′), 5.40 (1H, br. s, H-3), 5.33 (1H, br. s, H-4), 4.00 (1H, br. s, H-5), 3.65 (3H, s, OCH3), 2.32 (2H, m, Heq-2, 6), 2.14 (2H, m, Hax-2, 6)。13C-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 74.8 (C-1), 36.9 (C-2), 69.9 (C-3), 72.1 (C-4), 72.3 (C-5), 35.8 (C-6), 175.7 (C-7), 127.9 (C-1′), 127.7 (C-1′′), 115.5 (C-2′), 115.2 (C-2′′), 146.9 (C-3′), 146.8 (C-3′′), 149.8 (C-4′), 149.6 (C-4′′), 116.7 (C-5), 116.6 (C-5′′), 123.2 (C-6′), 123.2 (C-6′′), 147.6 (C-7′), 147.3 (C-7′′), 115.2 (C-8′), 114.9 (C-8′′), 168.9 (C-9′), 168.1 (C-9′′), 53.2 (OCH3)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致, 鑒定化合物4為3,5-O-雙咖啡?；崴峒柞ゼ椿覛置潭谿。

化合物5：淺黃色膠狀物,1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.50 (1H, d,J=15.8 Hz, H-7′), 7.41 (1H, d,J=15.6 Hz, H-7′′), 7.03 (2H, br. s, H-2′, 2′′), 6.98 (2H, m, H-5′, 5′′), 6.75 (2H, m, H-6′, 6′′), 6.26 (1H, d,J=15.8 Hz, H-8′), 6.12 (1H, d,J=15.6 Hz, H-8′′), 5.27 (1H, m, H-3), 4.97 (1H, dd,J= 6.4, 2.8 Hz, H-4), 4.16 (1H, m, H-5), 3.59 (3H, s, OCH3), 2.24 (2H, m, Heq-2, 6), 1.98 (2H, m, Hax-2, 6)。13C-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 73.2 (C-1), 37.7 (C-2), 67.8 (C-3), 72.5 (C-4), 65.3 (C-5), 36.1 (C-6), 173.4 (C-7), 125.2 (C-1′), 125.0 (C-1′′), 114.8 (C-2′), 114.7 (C-2′′), 145.9 (C-3′), 145.8 (C-3′′), 148.9 (C-4′), 148.8 (C-4′′), 115.9 (C-5), 115.9 (C-5′′), 121.6 (C-6′), 121.5 (C-6′′), 145.7 (C-7′), 145.7 (C-7′′), 113.8 (C-8′), 113.2 (C-8′′), 166.0 (C-9′), 165.3 (C-9′′), 52.1 (OCH3)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致, 鑒定化合物5為3,4-O-雙咖啡?；崴峒柞ゼ椿覛置潭谾。

化合物6：白色針狀物, 和β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照, 不同溶劑體系Rf值一致, 鑒定化合物6為β-谷甾醇。

3　討論

酚酸是天然產(chǎn)物中一類(lèi)重要的化合物, 其普遍存在于藥用植物中, 活性也很廣泛。本研究從灰氈毛忍冬花蕾中分離得到6個(gè)化合物, 其中有5個(gè)為酚酸類(lèi)衍生物, 進(jìn)一步佐證酚酸類(lèi)衍生物是灰氈毛忍冬的主要成分。本研究為灰氈毛忍冬花蕾即“山銀花”用藥提供了科學(xué)依據(jù), 也進(jìn)一步豐富了其物質(zhì)基礎(chǔ)研究。

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[收稿2016-06-02;修回2016-07-11]

(編輯：王靜)

Study on the chemical constituents ofn-butanol fraction ofLoniceramacranthoidesbuds

XiaoShiji,GanJiayu,ZhangMaosheng

(Department of Pharmaceutical Chemistry, Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099, China)

Objective To investigate the chemical constituents ofn-butanol fraction fromLoniceramacranthoidesbuds.Methods The structures of chemical constituents, isolated and purified by silica gel column chromatographic and preparative HPLC technologies fromLoniceramacranthoidesbuds, were elucidated by NMR spectrum.Results Six isolated compounds were identified as protocatechuic aldehyde (1), caffeic acidn-butyl ester (2), 3-O-caffeoyl quinic acid butyl este (3), 3,5-di-O-caffeoyl quinic acid methyl ester (4), 3,4-di-O-caffeoyl quinic acid methyl ester (5),β-sitosterol (6).Conclusion Compounds 1 and 2 were firstly isolated fromLoniceramacranthoidesbuds.

Loniceramacranthoides; Caprifoliaceae; phenolic acid; chemical constituent

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 (NO:31560102)；貴州省教育廳自然科學(xué)研究資助項(xiàng)目 (NO:黔教合KY字 [2015] 362)；貴州省科技廳中藥現(xiàn)代化資助項(xiàng)目 (NO:黔科合ZY字[2012]3014)；遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)科建設(shè)經(jīng)費(fèi)資助；遵義醫(yī)學(xué)院博士啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目 (NO:F-698)。

R284.1

A

1000-2715(2016)04-0350-03