規(guī)模豬場(chǎng)傳染性萎縮性鼻炎的防控措施

劉漢中
（江蘇省鹽城市亭湖區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇鹽城 224001）

從亭湖區(qū)一自繁自養(yǎng)大型養(yǎng)豬場(chǎng)病豬分離到的支氣管敗血波氏桿菌（Bb）和巴氏桿菌（Pm），通過藥物敏感性試驗(yàn)，篩選出敏感藥物。并選取本場(chǎng)菌株作為菌種，制成本場(chǎng)I相支氣管敗血波氏桿菌-巴氏桿菌二聯(lián)滅活苗。以二聯(lián)滅活苗分別免疫母豬和仔豬，對(duì)個(gè)別發(fā)病仔豬以敏感藥物進(jìn)行治療，同時(shí)，加強(qiáng)環(huán)境條件控制，改善飼養(yǎng)管理，有效控制了該豬場(chǎng)傳染性萎縮性鼻炎。

支氣管敗血波氏桿菌巴氏桿菌藥敏試驗(yàn)滅活苗綜合防治

近年來，亭湖區(qū)一豬場(chǎng)持續(xù)發(fā)生豬傳染性萎縮性鼻炎，主要表現(xiàn)：6～8周齡豬出現(xiàn)鼻炎癥狀，打噴嚏，鼻孔流出少量清亮或黏性鼻液，有些病豬發(fā)生不同程度血性鼻漏。有的病豬出現(xiàn)眼結(jié)膜炎，淚液分泌增多，眼角經(jīng)常流淚，在內(nèi)眼角下方皮膚上形成半月形濕潤(rùn)區(qū)，黏附塵土后而變黃，形成灰或黑色斑塊，稱為淚斑。甚至有的豬出現(xiàn)面部變形或歪斜，豬鼻變短，向上翹起，鼻背皮膚粗厚出現(xiàn)較深的皺紋、下頜伸長(zhǎng)，上下門齒錯(cuò)開，不能正常咬合。常導(dǎo)致機(jī)體代謝障礙，生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，飼料報(bào)酬降低，并發(fā)肺炎。該豬場(chǎng)也曾用疫苗預(yù)防和藥物治療豬傳染性萎縮性鼻炎，但效果不佳，給豬場(chǎng)帶來嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。為此，從該豬場(chǎng)離出支氣管敗血波氏桿菌和多殺性巴氏桿菌制成蜂膠苗用于該豬場(chǎng)，并對(duì)個(gè)別發(fā)病仔豬以敏感藥物進(jìn)行治療，同時(shí)加強(qiáng)環(huán)境條件控制，改善飼養(yǎng)管理，有效控制了該豬場(chǎng)傳染性萎縮性鼻炎?，F(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1　材料和方法

1.1病料來源

從亭湖區(qū)豬場(chǎng)中選取典型傳染性萎縮性鼻炎病豬，用酒精棉球徹底消毒鼻鏡后，將棉拭子（棉拭子為150 mmxO.8：aln的竹簽，頂端纏以脫脂棉，在腦心浸液充分浸濕后高壓滅菌，一周內(nèi)使用）插入鼻腔至第一臼齒處，采取鼻腔內(nèi)分泌物，共采取10頭份樣本，并迅速送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌的分離和鑒定。

1.2試驗(yàn)試劑

血清肉湯培養(yǎng)基（MH）、鮮血培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基和生化試劑均按常規(guī)方法制備。

1.3試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)動(dòng)物為體重20 g左右的小白鼠和成年家兔，由鹽城市獸醫(yī)院獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室提供，健康妊娠母豬由病料來源豬場(chǎng)提供。

1.4受試藥物

氨芐西林、頭孢曲松鈉、頭孢噻呋、鏈霉素、慶大霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、土霉素、紅霉素、林可霉素、磺胺六甲氧嘧啶、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、呋喃唑酮、呋喃妥因15種藥物均由恰威斯生物技術(shù)有限公司提供。

1.5滅活苗的制備、檢驗(yàn)及應(yīng)用試驗(yàn)

1.5.1擴(kuò)菌

用接種環(huán)鉤取適量Bb菌株，劃線于馬鈴薯瓊脂平板表面，37℃培養(yǎng)20～22 h，以滅菌生理鹽水洗下菌落作為種子，再均勻涂布于馬鈴薯瓊脂平板表面，37℃培養(yǎng)20～22 h，以滅菌生理鹽水洗下菌落，置于滅菌瓶中，用麥?zhǔn)媳葷峁軠y(cè)定其含菌數(shù)。

用接種環(huán)鉤取適量Pm菌株，劃線于7%鮮血瓊脂平板表面，37℃培養(yǎng)20～22 h，以滅菌生理鹽水洗下菌落作為種子，再均勻涂布于7%鮮血瓊脂平板表面，37℃培養(yǎng)20～22 h，以滅菌生理鹽水洗下菌落，置于滅菌瓶中，用麥?zhǔn)媳葷峁軠y(cè)定其含菌數(shù)。

1.5.2滅活

分別取Bb、：Pm的菌株培養(yǎng)液混合，以滅菌生理鹽水稀釋至含每種細(xì)菌數(shù)均為100億/m l。加入福爾馬林使其在菌液中的最終濃度為0.4%，37℃滅活48 h，其間不斷搖動(dòng)。滅活后的菌液緩緩加入到一定量的蜂膠中，加的過程中不斷用玻璃棒攪拌，最后加入柳硫汞鈉使最終濃度為0.01%，混勻、檢驗(yàn)、分裝。

1.5.3性狀和無菌檢驗(yàn)

肉眼直接觀察滅活苗性狀；混勻并取適量滅活苗，均勻涂布于鮮血瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)3 d后觀察。

1.5.4安全性檢查

取10只小白鼠，分別皮下注射菌苗0.1 m l，觀察1周內(nèi)生長(zhǎng)狀況；取10只家兔，皮下注射滅活苗2 m l/只，觀察2 d，期間每4 h 測(cè)1次體溫；妊娠母豬10頭，產(chǎn)前15 d左右，肌肉注射5 ml/頭，觀察。

1.5.5應(yīng)用試驗(yàn)

選擇健康的妊娠母豬，隨機(jī)分為3組。第一組本場(chǎng)滅活苗免疫，產(chǎn)前15d肌肉注射，3mml/頭；所產(chǎn)仔豬在7～10日齡、25～28日齡各接種一次，每次1m l，肌肉注射。第二組用市售蜂膠苗進(jìn)行免疫作對(duì)照。第三組不免疫作為對(duì)照。每天觀察試驗(yàn)?zāi)肛i所產(chǎn)仔，記錄仔豬傳染性萎縮性鼻炎發(fā)生情況和仔豬發(fā)育情況，綜合判定滅活苗的免疫效果。

2　結(jié)果

2.1病原分離培養(yǎng)、純化和鑒定

2.1.1分離培養(yǎng)及染色鏡檢

從10頭份的鼻腔棉拭子中均分離出波氏桿菌和巴氏桿菌。對(duì)分離菌株的形態(tài)與培養(yǎng)特性進(jìn)行鑒定。均分別符合Bb和Pm的特征。

2.1.2生化鑒定

分離的Bb均有溶血現(xiàn)象，同時(shí)過氧化氫酶，氧化酶，尿素酶，檸檬酸酶，6%、7.5%、9%氯化鈉試驗(yàn)和石蕊牛乳試驗(yàn)均為陽性；阿拉伯糖、果糖、半乳糖、葡糖糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、木糖試驗(yàn)和亞硝酸鉀試驗(yàn)均為陰性。

分離的Pm經(jīng)過氧化氫酶、氧化酶、尿素酶、吲垛、硫化氫試驗(yàn)，硝酸鹽還原試驗(yàn)，葡萄糖、半乳糖、蔗糖、山梨醇試驗(yàn)均為陽性。麥康凱培養(yǎng)基生長(zhǎng)性、運(yùn)動(dòng)性、溶血性為陰性，M-R、V-P反應(yīng)，明膠液化試驗(yàn)，乳糖、棉子糖試驗(yàn)為陰性。

2.2滅活苗的檢驗(yàn)及應(yīng)用試驗(yàn)

2.2.1無菌試驗(yàn)

滅活苗靜置后分層，上層這淡黃色澄清液體，下層為深黃色沉淀物，振混勻呈均一渾濁液；培養(yǎng)基上無任何細(xì)菌生長(zhǎng)。

2.2.2安全性檢查

20只小白鼠7d內(nèi)均健活；10只家兔均沒有體溫升高；產(chǎn)前15d妊娠母豬注射7d后，未出現(xiàn)異常反應(yīng)，胎兒、新生仔豬均正常。

2.2.3應(yīng)用試驗(yàn)

用本場(chǎng)滅活苗和市售滅活苗分別免疫妊娠母豬及其所產(chǎn)的仔豬，觀察其仔豬在生長(zhǎng)過程中的保護(hù)情況，見表1。

表1　原場(chǎng)滅活苗免疫效果

從表1可以看出，本場(chǎng)苗組、市售苗組和對(duì)照組傳染性萎縮性鼻炎的發(fā)生率分別為1.94%、17.59%和25.45%，表明本場(chǎng)苗對(duì)豬傳染性萎縮性鼻炎有好的預(yù)防效果。

2.3藥敏試驗(yàn)

Bb藥敏試驗(yàn)：15種抗生素中對(duì)頭孢曲松鈉、頭孢噻呋、氨芐西林、鏈霉素高度敏感；對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、丁胺卡那霉素、慶大霉素、土霉素、林可霉素、新霉素中度敏感；對(duì)磺胺六甲氧嘧啶、紅霉素、呋喃唑酮、呋喃妥因耐藥。

Pm藥敏試驗(yàn)：15種抗生素中對(duì)頭孢曲松鈉、鏈霉素、磺胺六甲氧嘧啶高度敏感；對(duì)頭孢噻呋、慶大霉素、氨芐西林、丁胺卡那霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、呋喃唑酮、呋喃妥因、紅霉素中度敏感；對(duì)土霉素、林可霉素、新霉素耐藥。

2.4治療結(jié)果

對(duì)39頭患病仔豬，按照本文方案采用高敏藥物治療，無死亡，淘汰5頭，其余的全部康復(fù)，治愈率為87.18%。

3　小結(jié)與討論

單獨(dú)妊娠母豬免疫接種，免疫母豬的初乳中抗體效價(jià)可達(dá)17log：以上，通過初乳抗體被動(dòng)保護(hù)仔豬。免疫母豬所產(chǎn)仔豬，在生后（吃初乳）4 h即可在鼻腔中出現(xiàn)被動(dòng)抗體，對(duì)鼻腔感染的局部保護(hù)力維持約2周。但被動(dòng)保護(hù)力持續(xù)時(shí)間很短。仔豬免疫接種，學(xué)者認(rèn)為這種方法無效，這可能是由于污染群中母豬的初乳中有一定水平的抗體。對(duì)仔豬早期疫苗注射的免疫應(yīng)答有一定的干擾作用。因此日本北里研究建議給免疫母豬所產(chǎn)的仔豬在5周齡第1次注苗，1 周后注射第二次。而本試驗(yàn)采用母仔結(jié)合免疫取得良好的效果，一方面與蜂膠佐劑有關(guān)，蜂膠不僅對(duì)母源抗體的干擾作用不敏感，而且還能全面啟動(dòng)機(jī)體的免疫防衛(wèi)系統(tǒng)，刺激機(jī)體細(xì)胞免疫、體液免疫、紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)和巨噬細(xì)胞，補(bǔ)體系統(tǒng)都能產(chǎn)生免疫應(yīng)答；另一方面可能與蜂膠苗的抗原劑量有關(guān)，其免疫機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

造成本病病原產(chǎn)生耐藥的主要原因是養(yǎng)豬生產(chǎn)上濫用抗菌藥物。在一些中小豬場(chǎng)，尤其是一些農(nóng)戶，不問病因，只要發(fā)燒就用青霉素，鏈霉素，土霉素，四環(huán)素，慶大霉素等抗生素，甚至長(zhǎng)期在飼料中添加抗菌藥物，使原來的極少數(shù)耐藥菌株得到大量生長(zhǎng)繁殖和傳播。所以在使用藥物預(yù)防和治療該病時(shí)應(yīng)先做藥敏試驗(yàn)，以藥敏試驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)，切勿盲目用藥。

疫苗的免疫效果在一定程度上還與衛(wèi)生管理部門有關(guān)，在實(shí)際生產(chǎn)中，應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，有效降低空氣中病原體、塵埃和有害氣體濃度；改善豬舍環(huán)境條件、降低飼養(yǎng)密度；保證通風(fēng)干燥，減少各種應(yīng)激；最好實(shí)行全進(jìn)全出的管理體制，豬舍內(nèi)豬欄最好采用實(shí)墻隔開，以防接觸傳播；在北方冬季應(yīng)注意防寒保暖的同時(shí)，更應(yīng)做好通風(fēng)換氣和降濕工作。

[1]李國(guó)江，鄭偉，劉彪，等.規(guī)模化豬場(chǎng)傳染性萎縮性鼻炎病原學(xué)調(diào)查與分析[J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2012，39（11）：184-186.

[2]李中興.豬傳染性萎縮性鼻炎的診斷及防治[J］.北方牧業(yè)，2010，31（1）：17.