王靜

（河南省濮陽市食品藥品檢驗檢測中心，河南濮陽457000）

高效液相色譜法測定復(fù)方曲尼司特片中曲尼司特含量

王靜

（河南省濮陽市食品藥品檢驗檢測中心，河南濮陽457000）

目的建立測定復(fù)方曲尼司特片中曲尼司特含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5*m），以甲醇-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液（63∶37，用磷酸調(diào)pH至4.6）為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為333 nm。結(jié)果曲尼司特質(zhì)量濃度在32.66～130.64*g/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好，平均回收率為99.67%，RSD為0.33%（n=6）。結(jié)論該方法簡便準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于復(fù)方曲尼司特片中曲尼司特的含量測定。

高效液相色譜法；復(fù)方曲尼司特片；曲尼司特；含量測定

復(fù)方曲尼司特片是由曲尼司特和硫酸沙丁胺醇組成的復(fù)方制劑，該制劑既能發(fā)揮曲尼司特的抗過敏作用［1］，又能發(fā)揮沙丁胺醇的迅速平喘、解痙作用［2］，臨床主要用于輕、中度支氣管哮喘，慢性喘息型支氣管炎的預(yù)防與治療。本研究中參考文獻［3-7］建立了測定復(fù)方曲尼司特片中曲尼司特含量的高效液相色譜（HPLC）法，該方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強、靈敏度高，能較好地控制其質(zhì)量，現(xiàn)報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

Agilent1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；UvikonXL型紫外分光光度計（法國Secomam公司）；92SM-202A型電子分析天平（瑞士Precisa公司）。

1.2試藥

曲尼司特對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為100938-200701）；復(fù)方曲尼司特片（市售，批號分別為1406117，1409006，1412112，規(guī)格為每片含曲尼司特80 mg、硫酸沙丁胺醇2.4 mg）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液（63∶37，用磷酸調(diào)pH至4.6）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：333 nm；進樣量：20 μL；柱溫：30℃。

2.2溶液制備

精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的曲尼司特對照品16.33 mg，置50 mL棕色容量瓶中，加少量無水乙醇使之溶解，再用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液5 mL，置20 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取樣品20片，精密稱定，研細，稱取細粉適量（約相當(dāng)于曲尼司特8 mg），精密稱定，置25 mL棕色容量瓶中，加少量無水乙醇使之溶解，再用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置20 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方比例配制缺曲尼司特的陰性對照品，再按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

陰性干擾試驗：照擬訂色譜條件，吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，分別注入高效液相色譜儀。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同色譜峰，而陰性對照品溶液在相同保留時間處無此色譜峰，表明其他成分對含量測定無干擾。理論板數(shù)以曲尼司特峰計為6 482，見圖1。

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品貯備液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20 μL，記錄色譜圖。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程Y=132.32 X-2 167.06，r=0.999 9（n=7）。結(jié)果表明，曲尼司特質(zhì)量濃度在32.66～130.64 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，重復(fù)進樣5次，記錄曲尼司特的色譜峰面積。結(jié)果平均值為8 390.87，RSD為0.21%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h時進樣測定。結(jié)果曲尼司特峰面積的RSD為0.79%（n=6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一批樣品5份，依法制備供試品溶液，進樣測定。結(jié)果平均含量為標(biāo)示含量的100.2%，RSD為1.09%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：稱取已知含量的樣品（批號為1406117）6份，每份約相當(dāng)于曲尼司特4 mg，精密稱定，置25 mL棕色容量瓶中，分別精密加入曲尼司特對照品溶液（2.011 2 g/L）1.5，2.0，2.5 mL，依法制備供試品溶液，并按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

圖1　高效液相色譜圖

2.4樣品含量測定

分別按2.2項下方法制備供試品溶液和對照品溶液，精密量取2種溶液各20 μL，分別注入高效液相色譜儀，按外標(biāo)法計算曲尼司特的含量。結(jié)果見表2。

表1　曲尼司特加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

表2　樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3　討論

波長選擇：按2.2項下方法制備曲尼司特對照品溶液，同法按復(fù)方曲尼司特片處方比例制備硫酸沙丁胺醇對照品溶液，取上述2種對照品溶液分別在200～400 nm波長范圍內(nèi)進行紫外光譜掃描。結(jié)果曲尼司特、硫酸沙丁胺醇分別在333 nm和276 nm波長處有最大吸收，故以333 nm為檢測波長。

溶劑選擇：曲尼司特難溶于水，直接用流動相溶解對照品及供試品，效果不好。經(jīng)試驗，在溶液制備時先加入少量無水乙醇使之溶解，再用流動相定容，溶解效果理想，且對含量測定無干擾。

流動相選擇：試驗結(jié)果表明，流動相的酸度對曲尼司特峰的保留時間及峰形影響較大，在一定范圍內(nèi)保留時間隨pH增大而變小，經(jīng)比較，甲醇與0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液比例為63∶37，且用磷酸調(diào)pH至4.6時，曲尼司特色譜峰的保留時間適中，峰形較好。

在處方中，由于曲尼司特含量比硫酸沙丁胺醇高30多倍，懸殊太大，在同一積分條件下，硫酸沙丁胺醇峰面積太小，暫未能同時測定其含量。

［1］陳新.抗變態(tài)反應(yīng)新藥——曲尼司特膠囊［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，1989，24（2）：125.

［2］鐘南山.支氣管哮喘——基礎(chǔ)與臨床［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：607-612.

［3］倪沖，繆玉山，陳國明，等.高效液相色譜法測定曲尼司特滴眼液中曲尼司特及其有關(guān)物質(zhì)的含量［J］.東南大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2008，27（5）：365-367.

［4］趙飛浪，袁倚盛，譚力，等.反相高效液相色譜法測定人血漿中曲尼司特濃度［J］.色譜，1998，16（1）：78-79.

［5］何仲貴，唐磊，唐星，等.高效液相色譜法測定血漿中曲尼司特濃度［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，1994，11（2）：43-44.

［6］郭曉烽，丁黎，馬鵬程.復(fù)方曲尼司特片在人體內(nèi)的藥代動力學(xué)和相對生物利用度［J］.藥學(xué)與臨床研究，2007，15（5）：352-356.

［7］金偉華，劉永勝，譚永紅，等.曲尼司特滴鼻液的制備及其質(zhì)量控制［J］.中國藥房，2013，24（13）：1 205-1 207.

Content Determination of Tranilast in Compound Tranilast Tablets by HPLC

Wang Jing
（Puyang Food and Drug Inspection and Testing Center，Puyang，Henan，China 457000）

ObjectiveToestablishanHPLCmethodfor thecontentdeterminationoftranilastinCompoundTranilastTablets. MethodsThe XBridge C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used with methanol-0.02 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution（63∶37）（adjusting pH to 4.6 with phosphoric acid）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 333 nm.ResultsThere was a good linear relationship when the content of tranilast was within the range of 32.66-130.64 μg/mL.The average recovery was 99.67%and theRSD was 0.33%（n=6）.ConclusionThe method is simple and accurate with good reproducibility，which could be used for the analysis of tranilast in Compound Tranilast Tablets.

HPLC；Compound Tranilast Tablets；tranilast；content determination

R927．2；R974

A

1006－4931（2016）14－0074－03

王靜（1982-），女，大學(xué)本科，主管藥師，研究方向為藥品檢驗及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，（電子信箱）396293403@qq.com。

2016－01－13）