廖乾秀

成都市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(四川 成都 610000)

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成都地區(qū)乙型肝炎病毒感染者病毒基因型和亞型分布及其臨床意義

廖乾秀

成都市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(四川 成都 610000)

目的探討成都地區(qū)乙型肝炎病毒(HBV)感染者病毒基因型和亞型分布及其臨床意義。方法采用PCR檢測法對(duì)成都地區(qū)隨機(jī)選取的216例HBV感染患者的病毒基因型以及亞型的分布情況進(jìn)行研究，分析成都地區(qū)乙型肝炎病毒感染者病毒基因型和亞型分布情況及不同類型HBV感染者基因型頻率有無差異。結(jié)果216例HBV感染患者的血清檢測結(jié)果顯示，70例為B基因型(32.4%)，105例為C基因型(48.6%)，B+C混合感染型41例(19.0%)，混合型顯著低于B型和C型(P<0.05)。無癥狀攜帶者以B型感染為主，慢性乙型肝炎以B型和C型為主，肝硬化及肝癌以C型為主，不同類型HBV感染者基因型分布頻率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論成都地區(qū)乙型肝炎病毒感染以B型和C型為主，C型感染可能是本地區(qū)HBV感染者肝硬化及肝癌的高危因素。

成都地區(qū)；乙型肝炎；基因型；亞型；臨床意義

目前，我國乙型肝炎病毒(HBV)感染者占據(jù)世界HBV感染者的3/4以上，是HBV患者較多的國家之一[1]。HBV屬于嗜肝DNA病毒，在進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄的過程中沒有校對(duì)酶的作用，經(jīng)常使核苷酸的配對(duì)發(fā)生錯(cuò)誤，因此，HBV基因的變異性較強(qiáng)，按照基因序列的差異將其分為A～H總共8個(gè)基因型[2]。感染HBV后的人群最終可導(dǎo)致肝硬化(LC)、無癥狀攜帶者(ASC)、肝癌(HCC)、重型肝炎(SH)、慢性乙型肝炎(CHB)。而且不同區(qū)域患者的基因型以及亞型有一定的差別，本文對(duì)成都地區(qū)隨機(jī)選取的216例HBV感染患者進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇成都地區(qū)2012年3月—2014年3月216例HBV感染患者作為研究對(duì)象，取患者的血清保存在-20℃?zhèn)溆?。其中男?34例，女性82例，年齡18～78歲，平均年齡(48.6±12.7)歲。其中ASC患者26例，CHB患者 157例，LC患者23例，HCC患者10例。所有患者均符合乙型肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，且臨床確診HBVDNA陽性。

1.2方法

1.2.1血清HBVDNA濃度測定在60μL的裂解液中加入待檢血清50μL，徹底混勻后調(diào)整水浴溫度至37℃，水浴時(shí)間10min，然后加入Tris飽和酚以及氯仿各30μL，按照49∶1的比例加入異戊醇，混合均勻后，轉(zhuǎn)速140 000r/min，離心10min，取出上清液，加入等體積的異丙醇和10μL的醋酸鈉溶液，放置在-20℃下沉淀2h，離心操作同上，將上清液倒出后，在剩下的物質(zhì)中加入500μL, 75%的預(yù)冷乙醇，離心操作同上，同樣去掉上清液，將剩余物質(zhì)沉淀后在50℃下進(jìn)行干燥，最后在20μL的焦碳酸二乙酯(DEPC)中進(jìn)行溶解，保存在-20℃?zhèn)溆?，作為PCR反應(yīng)的模板。

1.2.2HBV基因型測定第一輪PCR反應(yīng)體系是40μL，然后將其按照95℃ 10min，94℃ 20s，55℃ 20s，72℃ 1min進(jìn)行擴(kuò)增，總共擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，72℃時(shí)的時(shí)間增加7min。第二輪PCR的反應(yīng)體系分為A、B兩組，A組反應(yīng)體系是40μL，第一輪PCR得到的產(chǎn)物是第二輪的模板，擴(kuò)增的基因有A、B、C三種基因型；B組反應(yīng)體系是40μL，第一輪得到的產(chǎn)物是第二輪的模板，擴(kuò)增的基因有D、E、F三種基因型，兩組均按照95℃ 10min，94℃ 20s，65℃ 20s，72℃ 30s進(jìn)行擴(kuò)增，總共擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，72℃時(shí)時(shí)間增加7min。然后將第二輪的產(chǎn)物取出10μL，采用2%的瓊脂糖在100V的電壓下電泳20min，觀察其結(jié)果。B、E、C、D、F、A基因型的PCR產(chǎn)物分別是283bp、168bp、121bp、117bp、96bp、67bp。

1.2.3HBV基因亞型的測定①B1基因亞型的檢測：擴(kuò)增的是前C區(qū)和C區(qū),第一輪PCR反應(yīng)體系是40μL，然后將其按照96℃ 2min，94℃ 15s，55℃ 45s，72℃ 45s進(jìn)行擴(kuò)增，總共擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，72℃時(shí)時(shí)間增加7min。第二輪同第一輪，只是72℃的45s改為30s進(jìn)行擴(kuò)增，其PCR產(chǎn)物是110bp。②B2基因亞型的檢測方法同B1。③C1、C2基因亞型的檢測：擴(kuò)增的是P區(qū)，PCR反應(yīng)體系是同B1基因亞型檢測的第二輪。C1、C2基因亞型的PCR產(chǎn)物是340bp、240bp。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，率用百分比(%)表示，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1HBV基因型分布216例HBV感染患者的血清檢測結(jié)顯示，70例為B基因型(32.4%)，105例為C基因型(48.6%)，B+C混合感染型41例(19.0%)，混合型顯著低于B型(χ2=11.95,P<0.05)和C型(χ2=46.35,P<0.05)。

2.2不同類型HBV感染者基因型分布ASC者以B型感染為主，CHB以B型和C型為主，LC和HCC以C型為主，不同類型HBV感染者基因型分布頻率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=12.36,P<0.05)，見表1。

表1　不同類型HBV感染者基因型分布[n(%)]

3　討論

HBV是目前發(fā)現(xiàn)的最為普遍的DNA病毒，是一種嗜肝病毒，在我國的感染率較高，占70%以上，這與我國人口眾多且密集有關(guān)[4]。HBV的形狀多種多樣，有大球形、小球性以及管形等。HBV的感染主要通過病毒DNA的復(fù)制完成，當(dāng)病毒侵入人體的肝細(xì)胞后，DNA會(huì)進(jìn)入肝細(xì)胞核，然后以負(fù)鏈為模板進(jìn)行完整的修補(bǔ)，形成的DNA會(huì)在RNA多聚酶的作用下進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，形成長短不一的RNA[5-7]。然后繼續(xù)將長短不一的RNA作為模板進(jìn)行復(fù)制，形成雙鏈DNA，HBV也就誕生了。最后通過肝細(xì)胞漿釋放到肝細(xì)胞外進(jìn)行進(jìn)一步的感染和發(fā)展[6]。目前乙肝病毒發(fā)現(xiàn)的種類有A～H8種基因型，根據(jù)全球不同的地理特征進(jìn)行分布，其中北歐和非洲大陸主要以A基因型為主，東亞地區(qū)則以B、C兩種基因型為主，中東以及北美地區(qū)以D基因型為主，南美和非洲地區(qū)主要以E、F兩種基因型為主，法國以及美國常見G基因型，而H基因型則主要在美國、墨西哥以及尼加拉瓜地區(qū)[8-10]。我國南北差異較大，成都地處南北交界處，主要以B、C兩種基因型常見。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)216例HBV感染患者的血清檢測中70例為B基因型(32.4%)，105例為C基因型(48.6%)，B+C混合感染型41例(19.0%)，混合型顯著低于B型和C型(P<0.05)。ASC患者以B型感染為主，CHB患者以B型和C型為主，LC及HCC以C型為主，不同類型HBV感染者基因型分布頻率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。研究提示，成都地區(qū)乙型肝炎病毒感染以B型和C型為主，C型感染可能是本地區(qū)HBV感染者LC及HCC的高危因素。因此對(duì)于HBVC型感染患者應(yīng)引起醫(yī)務(wù)人員的重視，此類感染人群更易發(fā)展為LC及HCC。

同時(shí)，對(duì)于HBV患者要及時(shí)進(jìn)行診斷和治療，減少傳染率，降低其他并發(fā)癥的發(fā)生，提高人們的生活質(zhì)量。我國已有了乙肝病毒的疫苗，需要患者及時(shí)注射，避免發(fā)生傳染。同時(shí)注意休息、飲食，可采用中藥、抗生素等藥物進(jìn)行治療，注意營養(yǎng)物質(zhì)的充足，減少高熱量物質(zhì)的攝入量。

綜上所述，成都地區(qū)HBV感染以B型和C型為主，C型感染可能是本地區(qū)HBV感染者LC及HCC的高危因素。

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責(zé)任編輯：艾茜

DistributionandClinicalSignificanceofHBVGenotypesandSubtypesinChengduArea

LiaoQianxiu

(Department of Clinical Laboratory,the Chengdu First People′s Hospital，Chengdu 61000，China)

ObjectiveToexplorethedistributionandclinicalsignificanceofHBVgenotypesandsubtypesinChengduarea.Methods216caseswithHBVwerecollectedfromChenduandthegenotypeandsubtypesofHBVpatientsweretestedbyPCRmethod.ThedistributionofHBVgenotypesandsubtypesandthedifferenceofgenotypefrequenciesfordifferenttypesofHBVwereanalyzed.ResultsTheserumdetectionresultsof216HBVcasesshowedthat70casesweregenotypeB(32.4%),105casesweregenotypeC(48.6%)and41caseswereB+Cmixedtype(19.0%).ThemixedtypewassignificantlylowerthangenotypeBandC(P<0.05).TheasymptomaticcarriersweremainlygenotypeB,chronichepatitispatientsweregenotypeBandCandlivercirrhosisandlivercancerpatientsweregenotypeC.TherewasastatisticaldifferenceamonggenotypefrequenciesfordifferenttypesofHBV(P<0.05).ConclusionTheHBVinfectioninChengduwasmainlybasedongenotypeBandC.ThegenotypeCmaybeahighriskfactorforlivercirrhosisandlivercancerforHBVpatientsinthearea.

chengdu;HBV;genotype;subtype;clinicalsignificance

廖乾秀(1983- )，女，四川德陽人，技師，研究方向：臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。

R512.62

A

1008-8164(2016)03-0043-03

2016-07-08