張淼　程悅寧

摘要 開展了狐貍腦炎活疫苗免疫效力試驗，確定最小免疫劑量為1.0 mL（103.5TCID50/mL），免疫劑量1.0 mL（104.5TCID50/mL），免疫后180 d用強(qiáng)毒攻擊均獲得了100%保護(hù)，-20 ℃保存期為180 d。

關(guān)鍵詞 狐貍腦炎；活疫苗；免疫效力

中圖分類號 S858.315.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）05-0288-01

Abstract Test of protective efficacy of live vaccine of fox encephalitis was done in this study.The results showed that the minimum immune dose was 1.0 ml（103.5TCID50/mL），the immunizing dose was 1.0 mL（104.5TCID50/mL），and immunity period was up to 180 days.The live vaccine could induce completely protection in foxes against lethal challenge with virulent strain.The shelf life of vaccine was 180 days at -20 ℃.

Key words fox encephalitis；live vaccine；protective efficacy

我國狐貍飼養(yǎng)業(yè)發(fā)展迅速，目前全國養(yǎng)殖量約為1 500萬只，分布在北方12個省市。通過對分離鑒定的我國流行狐貍腺病毒毒株的馴化致弱，獲得了CAV-2C弱毒株，適合于中國狐貍腺病毒流行株特點(diǎn)的疫苗毒株，首次篩選和優(yōu)化出狐貍腦炎活疫苗制苗毒種。采用犬腎傳代細(xì)胞（MDCK）培養(yǎng)犬腺病毒Ⅱ型CAV-2C弱毒株，成功地研制出狐貍腦炎活疫苗。本項研究重點(diǎn)開展了狐貍腦炎活疫苗最小免疫劑量、免疫劑量和效力試驗、免疫期和保存期試驗，以及臨床應(yīng)用試驗，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 狐貍腦炎活疫苗最小免疫劑量試驗

應(yīng)用不同稀釋度的狐貍腦炎活疫苗免疫斷乳21 d未接種任何疫苗的健康北極狐，同時設(shè)對照組5只。

1.2 狐貍腦炎活疫苗免疫劑量和效力試驗

取狐貍腦炎活疫苗批號為201401、201402、201403等3批，疫苗效價為104.5～5.0TCID50/mL，免疫斷乳21 d未接種任何疫苗的健康北極狐，每批疫苗免疫狐5只，每只1.0 mL，免疫后21 d用100個ID50 CAV-1株強(qiáng)毒攻擊，同時設(shè)對照組5只，觀察30 d[1-3]。

1.3 狐貍腦炎活疫苗免疫期試驗

選斷乳21 d未接種任何疫苗的健康北極狐50只，用批號為201401、201402、201403等3批狐貍腦炎活疫苗分別免疫10只，每只接種1.0 mL，分別在免疫后7、21、60、180 d采血分離血清，測定CAV抗體情況，CAV抗體測定采用中和試驗方法，免疫180 d后，進(jìn)行攻毒試驗，隨機(jī)選取每批疫苗免疫狐5只，用100個ID50 CAV1株強(qiáng)毒攻擊，同時設(shè)對照組5只，觀察30 d[4-6]。

1.4 狐貍腦炎活疫苗保存期試驗

取批號為201401、201402、201403等3批狐貍腦炎活疫苗，對分別在室溫條件下保存1～5 d，在4 ℃條件下保存7～21 d，在-20 ℃條件下保存30～180 d，然后進(jìn)行效價測定，確定疫苗保存期。每批疫苗應(yīng)用MDCK細(xì)胞做狐貍腦炎活疫苗效價測定。

1.5 狐貍腦炎活疫苗田間試驗

對3批狐貍腦炎活疫苗免疫的養(yǎng)狐場，進(jìn)行了安全性檢驗均合格，并分別在接種后3個月和6個月隨機(jī)選300只狐貍采血做抗體檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 狐貍腦炎活疫苗最小免疫劑量試驗

免疫狐貍分別在第7天開始產(chǎn)生抗體，14 d與21 d抗體效價基本相同，不同稀釋度疫苗產(chǎn)生的抗體效價不同，結(jié)果見表1。

試驗結(jié)果表明，10-1倍稀釋1.0 mL劑量在7 d產(chǎn)生抗體，14 d效價達(dá)到1∶16以上，而10-3倍稀釋1.0 mL劑量僅為1∶8。免疫21 d后用100個ID50犬腺病毒CAV1株強(qiáng)毒攻擊，10-1倍稀釋1.0 mL劑量獲得100%保護(hù)，而10-2倍稀釋1.0 mL劑量未獲得全部保護(hù)，對照組全部發(fā)病，出現(xiàn)典型的腦炎癥狀，根據(jù)試驗結(jié)果，確定狐貍腦炎活疫苗最小免疫劑量為10-1倍稀釋1.0 mL，即103.5TCID50/mL。

2.2 狐貍腦炎活疫苗免疫劑量和效力試驗

疫苗效價為104.5～5.0TCID50/mL，接種劑量為1.0 mL，免疫后21 d經(jīng)強(qiáng)毒攻擊可獲得100%保護(hù)，結(jié)果表明，狐貍腦炎活疫苗免疫劑量為1.0 mL，免疫動物產(chǎn)生了很好的免疫力，證明該疫苗的免疫原性好，安全可靠，免疫效果好（表2）。

2.3 狐貍腦炎活疫苗免疫期試驗

狐貍腦炎活疫苗免疫180 d攻毒試驗結(jié)果見表3?？梢钥闯?，3批狐貍腦炎活疫苗免疫180 d后，用強(qiáng)毒攻擊均獲得了100%保護(hù)，結(jié)果表明狐貍腦炎活疫苗免疫期180 d。

2.4 狐貍腦炎活疫苗保存期試驗

室溫15～20 ℃條件下保存3 d，效價保持不變，5 d效價下降101.0 個滴度。4 ℃冰箱條件下保存14 d，效價保持不變，保存21 d，每批狐貍腦炎活疫苗效價都有所下降，效價下降最多為101.0個滴度。-20 ℃條件下保存，120 d時測定狐貍腦炎活疫苗效價均未發(fā)生變化。180 d時測定狐貍腦炎活疫苗效價也未發(fā)生變化。根據(jù)試驗結(jié)果，確定狐貍腦炎活疫苗-20 ℃的保存期為180 d（表4）。

2.5 狐貍腦炎活疫苗田間試驗

結(jié)果表明，在3個月CAV抗體陽轉(zhuǎn)率為100%。6個月CAV抗體陽轉(zhuǎn)率為98%，抗體效價在1∶64以上達(dá)98%，以上結(jié)果表明，該狐貍腦炎活疫苗免疫后6個月臨床保護(hù)率為98%。

3 結(jié)論與討論

狐貍腦炎活疫苗（CAV-2C株）免疫效力試驗結(jié)果表明，最小免疫劑量為1.0 mL（103.5TCID50/mL），免疫劑量1.0 mL（104.5TCID50/mL），免疫后180 d用強(qiáng)毒攻擊均獲得了100%保護(hù)，-20 ℃保存期為180 d。

狐貍腦炎活疫苗應(yīng)用于吉林、遼寧等地養(yǎng)狐場，用于預(yù)防免疫接種，未發(fā)生狐貍腦炎，免疫效果良好，安全可靠，具有廣闊的應(yīng)用前景。

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