周迎春，劉　華，王　軍，王　倩，陳　曦，何長(zhǎng)生，沈　艷，李少炎，占松鶴*

(1.安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽合肥 230061；2.望江縣動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽望江 246230)

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2015年安徽省部分中小規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病定點(diǎn)監(jiān)測(cè)

周迎春1，劉華1，王軍1，王倩1，陳曦1，何長(zhǎng)生1，沈艷1，李少炎2，占松鶴1*

(1.安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽合肥 230061；2.望江縣動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽望江 246230)

為了解安徽省中小規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病病毒gE和gB免疫抗體情況，設(shè)立3個(gè)固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)選取4個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。應(yīng)用ELISA，對(duì)12個(gè)豬場(chǎng)578份血清開(kāi)展PRV gE和PRV gB抗體檢測(cè)。結(jié)果表明，在12個(gè)不同規(guī)模豬場(chǎng)中，58.3%的豬場(chǎng)都存在不同程度的感染。578份血清樣本中，gE抗體總的陽(yáng)性率20.4%，免疫抗體陽(yáng)性率為72.1%。表明安徽省中小規(guī)模豬場(chǎng)PRV隱性感染率較高，并且免疫抗體合格率不高。關(guān)鍵詞：豬偽狂犬??；中小規(guī)模豬場(chǎng)；定點(diǎn)監(jiān)測(cè)

豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的一種急性傳染病，各種豬群均可感染，是仔豬死亡、母豬繁殖障礙的主要疫病之一[1]，主要引起公豬的不育、母豬的流產(chǎn)及產(chǎn)死胎和木乃伊胎，常引起新生仔豬神經(jīng)癥狀或腹瀉。為掌握安徽省中小規(guī)模豬場(chǎng)PRV野毒感染抗體和免疫抗體水平，2015年，按照中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心要求，選取望江縣、全椒縣和霍邱縣作為安徽省豬偽狂犬病固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，每個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)選取4個(gè)使用PRV gE基因缺失疫苗的規(guī)模豬場(chǎng)開(kāi)展了感染抗體和免疫抗體的監(jiān)測(cè)，為建立動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)預(yù)警體系及開(kāi)展動(dòng)物疫病凈化提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1監(jiān)測(cè)點(diǎn)的選擇充分考慮到安徽的地理環(huán)境，在養(yǎng)豬比較集中的望江縣、全椒縣及霍邱縣各選4個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，分別以W1、W2、W3、W4，Q1、Q2、Q3、Q4和H1、H2、H3、H4代替，作為安徽省2015年豬偽狂犬病定點(diǎn)監(jiān)測(cè)點(diǎn)。

1.1.2樣品采集按照中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心《關(guān)于印發(fā)〈2015年國(guó)家動(dòng)物疫病定點(diǎn)監(jiān)測(cè)實(shí)施方案〉的通知》[2]要求，將12個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)按照存欄量不同，進(jìn)行隨機(jī)采樣。大型豬場(chǎng)(豬>1 000)每次分別采集血清和對(duì)應(yīng)組織樣品(扁桃體)50份，中型豬場(chǎng)(100<豬≤1 000)每次分別采集血清和對(duì)應(yīng)組織樣品(扁桃體)30份，小型豬場(chǎng)(30<豬≤100)每次分別采集血清和對(duì)應(yīng)組織樣品(扁桃體)15份。

實(shí)際采樣時(shí)并未嚴(yán)格按照這個(gè)要求采樣。

無(wú)菌采集豬前腔靜脈血3 mL～5 mL，析出血清，經(jīng)3 000 r/min離心，取上清置于滅菌的離心管內(nèi)，逐份進(jìn)行編號(hào)，置于-20 ℃保存?zhèn)溆?。在采樣時(shí)，對(duì)采樣點(diǎn)的養(yǎng)殖、疫苗使用、防疫、疫病發(fā)生、疫病監(jiān)測(cè)、藥物使用等流行病學(xué)調(diào)查信息進(jìn)行收集。

1.1.3主要試劑PRV gE-ELISA和gB-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，均為美國(guó)Idexx公司產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1檢測(cè)方法按PRV gE-ELISA和gB-ELISA試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行。

1.2.2結(jié)果分析檢測(cè)數(shù)據(jù)采用Excel軟件進(jìn)行整理和分析。

2　結(jié)果

2.112個(gè)規(guī)模場(chǎng)PRV gE抗體和gB抗體檢測(cè)結(jié)果

12個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)，共采集578份血清樣品，經(jīng)檢測(cè)，PRV gE抗體陽(yáng)性率為0～85.7%之間，平均抗體陽(yáng)性率為20.4%；gB抗體陽(yáng)性率為44.3%～100%之間，平均抗體陽(yáng)性率為72.1%(表1)。

2.212個(gè)規(guī)模場(chǎng)PRV免疫抗體和感染抗體陽(yáng)性率相關(guān)性分析

由表1可以看出，PRV免疫抗體和感染抗體陽(yáng)性率趨勢(shì)非常相似。在Excel軟件中，分別設(shè)感染抗體陽(yáng)性率和免疫抗體陽(yáng)性率為X和Y。從圖1中可以看出，其分布點(diǎn)基本都分布在一條直線附近，這說(shuō)明兩者呈正相關(guān)關(guān)系。將兩者進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，其相關(guān)系數(shù)為0.887，具有明顯的相關(guān)性(圖1)。

表1　12個(gè)規(guī)模場(chǎng)PRV gE抗體和gB抗體檢測(cè)結(jié)果Table 1　The detection results of PRV gE and gB antibodies in 12 pig farms

圖1　偽狂犬病病毒免疫抗體和感染抗體相關(guān)分析

2.3不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)的感染情況

12個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，PRV gE抗體陽(yáng)性場(chǎng)7個(gè)，場(chǎng)平均陽(yáng)性率為58.3%。最高為全椒縣，達(dá)到75%。檢測(cè)樣本578份，陽(yáng)性樣本118份，個(gè)體平均陽(yáng)性率20.4%，其中最高為全椒縣，達(dá)到44.1%(表2)。

2.4不同規(guī)模場(chǎng)感染情況

12個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)中，大型豬場(chǎng)的PRV gE抗體場(chǎng)陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率最高；中型豬場(chǎng)和小型豬場(chǎng)的場(chǎng)陽(yáng)性率相同，但是小型豬場(chǎng)的個(gè)體陽(yáng)性率低于中型豬場(chǎng)的(表3)。

2.5不同生長(zhǎng)階段感染情況

本次采樣主要是從母豬、保育豬、育肥豬3個(gè)生長(zhǎng)階段，從檢測(cè)結(jié)果看，母豬gE抗體陽(yáng)性率最高，為32.4%，主要是全椒縣Q2、Q4兩個(gè)豬場(chǎng)陽(yáng)性率較高所致，望江縣、霍邱縣采集的28份母豬血清樣本gE抗體均為陰性。從免疫抗體檢測(cè)情況看，免疫抗體合格率也不高，平均免疫抗體合格率為72.1%(表4)。

3　討論

文獻(xiàn)表明，近年，安徽省規(guī)模豬場(chǎng)PRV隱性感染一直居高不下。2104年，我們抽樣檢測(cè)73個(gè)不同規(guī)模種豬場(chǎng)，種豬群PRV野毒抗體陽(yáng)性率為18.99%，79.45%中小規(guī)模場(chǎng)都受到不同程度感染[3]。涂健等[4]對(duì)安徽省7個(gè)地區(qū)21個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)的187頭疑似發(fā)病豬的血清進(jìn)行PRV檢測(cè)，PRV平均陽(yáng)性率為34.2%；劉華等[5]開(kāi)展了中等規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病群流行率和風(fēng)險(xiǎn)因素的橫斷面研究表明，2013年安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病的群流行率為34.1%(95%置信區(qū)間29.3%～38.9%)；秦谷雨等[6]對(duì)從安徽省37個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)采集腹瀉仔豬的糞便或病死豬腸段共計(jì)186份,用RT-PCR和PCR進(jìn)行PRV檢測(cè)，結(jié)果PRV陽(yáng)性病料數(shù)占8.1%,陽(yáng)性豬場(chǎng)占21.6%。本次監(jiān)測(cè)，雖然總體場(chǎng)陽(yáng)性率較高，達(dá)到58.3%，主要是因?yàn)閭€(gè)別場(chǎng)陽(yáng)性率太高所致，從表1可以發(fā)現(xiàn)，大部分規(guī)模豬場(chǎng)PRV感染率還是較低的，如果實(shí)施凈化，可有效降低PRV感染率。

表2　不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)PRV感染陽(yáng)性率Table 2　The positive rate of PRV infection in different monitoring points

表3　不同規(guī)模場(chǎng)PRV感染陽(yáng)性率Table 3　The positive rate of PRV infection in different scale pig farms

表4　豬不同生長(zhǎng)階段PRV gE抗體和gB抗體陽(yáng)性率Table 4　The positive rate of PRV gE and gB antibodies in different growth stages

由監(jiān)測(cè)結(jié)果可以看出，PRV免疫抗體陽(yáng)性率和感染抗體陽(yáng)性率呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)關(guān)系，而2015年這些地區(qū)并沒(méi)有普遍的豬偽狂犬病疫情暴發(fā)，且這些豬場(chǎng)都使用了基因缺失苗進(jìn)行豬群免疫接種。分析原因可能是因?yàn)橐呙缰術(shù)E基因片段并沒(méi)有完全去除，或者是規(guī)模豬場(chǎng)存在長(zhǎng)期帶毒豬，因此，檢測(cè)出的感染抗體陽(yáng)性率可能并不能準(zhǔn)確地反映豬群中PRV的感染情況，但也提醒這些地區(qū)應(yīng)對(duì)豬偽狂犬病引起足夠的重視[7]。

使用PR基因缺失疫苗免疫是當(dāng)前PR的防控主要措施之一。謝海波等[8]研究指出，豬偽狂犬病免疫合格率達(dá)到80%以上才能較為有效地預(yù)防該病的流行。檢測(cè)結(jié)果顯示，大部分養(yǎng)豬場(chǎng)的豬偽狂犬病免疫情況并不是很理想。本次監(jiān)測(cè)的12個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，PRV gB抗體在44.3%～100%之間，平均免疫抗體為72.1%。從不同生長(zhǎng)階段的豬群檢測(cè)結(jié)果看，育肥豬的免疫抗體陽(yáng)性率最低，僅為65.6%。由此可見(jiàn)，這些地區(qū)疫苗的使用并沒(méi)有在豬群中形成有效的免疫屏障。究其原因，可能與疫苗的質(zhì)量、與流行毒株的匹配性、免疫程序的合理性以及多種疫苗的混合使用有關(guān)。因此，對(duì)該病還應(yīng)加強(qiáng)免疫預(yù)防，定期進(jìn)行PRV(gE/gB)抗體的檢測(cè)，尤其做好種豬場(chǎng)PRV野毒抗體檢測(cè)，及時(shí)清除帶毒豬，并結(jié)合進(jìn)行免疫抗體的監(jiān)測(cè)和評(píng)估，對(duì)豬群中偽狂犬病的控制和凈化至關(guān)重要[9-10]。

[1]吳金桂．豬繁殖障礙性疾病的病因與防治[J]．養(yǎng)殖與飼料，2010(2)：47-48．

[2]關(guān)于印發(fā)《2015年國(guó)家動(dòng)物疫病定點(diǎn)監(jiān)測(cè)實(shí)施方案》的通知：疫控(監(jiān))〔2015〕52號(hào)[Z].

[3]占松鶴,劉華,周迎春,等.安徽省規(guī)?；N豬場(chǎng)豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015,36(3):124-127.

[4]涂健,祁克宗,馮梅.安徽部分地區(qū)豬偽狂犬病PCR診斷及流行病學(xué)調(diào)查[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2008,29(2):35-38.

[5]劉華,占松鶴,王靖飛,等.2013年安徽省中小規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病群流行率及風(fēng)險(xiǎn)因素橫斷面研究[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2014(11):16-20，47.

[6]秦谷雨,楊勇,李郁,等.安徽省仔豬腹瀉5種病毒感染情況的調(diào)查研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,33(12):59-63.

[7]戰(zhàn)濤,陶軍,殷方芝,等.豬偽狂犬病的血清學(xué)分析[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2015(6):51-53.

[8]謝海波，何小華．豬偽狂犬病的流行情況和預(yù)防措施[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2001，37(6)：212-213.

[9]戴愛(ài)玲，凌明發(fā),黃思瓊,等.某規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬gE和gB抗體的檢測(cè)與分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(32):11324-11325.

[10]徐靈龍，苗得園，杜希珍，等.規(guī)?；i場(chǎng)母豬群PRV抗體血清學(xué)調(diào)查[J].豬業(yè)科學(xué)，2010(2):72-74.

Fixed Point Monitoring on Pseudorabies in Medium and Small Scaled Pig Farms of Anhui Province 2015

ZHOU Ying-chun1,LIU Hua1,WANG Jun1,WANG Qian1,CHEN Xi1,HE Chang-sheng1,SHEN Yan1,LI Shao-yan2,ZHAN Song-he1

(1.AnhuiProvincialCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention,Hefei,Anhui,230061,China;2.WangjiangCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention,Wangjiang,Anhui,246230,China)

A surveillance was conducted to understand the sero-positive rates of PRV gE and gB antibodies.4 scaled pig farms in each 3 counties in Anhui province were chosen as fixed monitoring points.578 serum samples were collected form 12 pig farms for PRV gE and gB antibody test by ELISA.The herd positive rate of PRV gE was 58.3% in these 12 farms,with the total positive rate 20.4%.The total positive rate of PRV-gB antibody was 72.1%.The results showed that the PRV inapparent infection rate was high,and the immune antibody qualified rate was not so high.

Pseudorabies;scale pig farm;fixed point monitoring

2016-03-07

周迎春(1980-)，女，山東單縣人，獸醫(yī)師，碩士研究生，主要從事動(dòng)物疫病檢測(cè)工作。*通訊作者

S855.3;S858.28

B

1007-5038(2016)10-0127-04