孫曉敏　張曉娟　李英

摘要：菌核病是由核盤菌[Sclerotinia sclerotiorum （Lib. ） de Bary ]引起的一種嚴(yán)重危害油菜的真菌病，選育和推廣抗病品種是控制油菜菌核病最安全、經(jīng)濟(jì)和環(huán)保的途徑。本研究在陜西漢中地區(qū)采用人工牙簽莖稈接種法，于油菜初花期對17份不同抗性的自交系油菜材料開展連續(xù)3年的核盤菌接菌試驗(yàn)。結(jié)果表明：田間接種方法能夠準(zhǔn)確有效地對油菜品系菌核病抗性進(jìn)行篩選和鑒定，試驗(yàn)材料抗病性介于高抗-高感之間，篩選出5份抗菌核病油菜材料。本研究結(jié)果可為菌核病抗性研究及抗菌核病油菜品種選育提供參考。

關(guān)鍵詞：油菜；菌核??；抗性評價(jià)；抗病材料

中圖分類號： S634.303.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2016）07-0180-02

油菜是我國重要的油料作物，也是陜西省第一大油料作物。陜南漢中地區(qū)是陜西省油菜的主產(chǎn)區(qū)，油菜的安全生產(chǎn)是全省食用油的重要保障。菌核病是一種嚴(yán)重危害植物的真菌病，其病原菌——核盤菌[Sclerotinia sclerotiorum （Lib. ） de Bary ]危害75科408種植物，居3大油菜病害（菌核病、霜霉病、病毒?。┲?，嚴(yán)重影響了油菜產(chǎn)量和品質(zhì)[1]。該病在世界范圍內(nèi)，尤其是溫帶地區(qū)廣泛發(fā)生和流行。在我國長江流域和西南地區(qū)危害最為嚴(yán)重，發(fā)病率最高可達(dá)80%，可造成油菜大幅度減產(chǎn)。據(jù)調(diào)查，陜南地區(qū)田塊菌核平均出現(xiàn)率為43.40%[2]，因此，該地區(qū)菌核病防治工作意義重大。

由于化學(xué)防治成本高且污染環(huán)境，因此，抗病品種選育是控制油菜菌核病最根本有效的方法。目前，選育的抗性較好的品種數(shù)量較少，有中油821、川油21、中雙11和中雙9號。油菜抗菌核病材料的篩選對抗病品種選育具有重要意義。然而，在油菜及其近緣種中極少發(fā)現(xiàn)完全抗或免疫的種質(zhì)資源。

油菜菌核病抗性表現(xiàn)為數(shù)量性狀，易受環(huán)境影響[3]。選擇快速準(zhǔn)確的油菜菌核病抗性鑒定方法、篩選抗菌核病油菜資源非常重要。油菜菌核病抗性鑒定通常采用接種鑒定法，包括：苗期菌絲體接種鑒定、開花期菌絲體接種鑒定以及離體葉片接種鑒定[4]。本研究以陜西省漢中市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所重點(diǎn)材料為依托，在油菜花期通過牙簽莖稈菌絲體接種法進(jìn)行抗源篩選，為配置抗耐病組合及材料的適時(shí)淘汰提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

參試材料為陜西省漢中市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所油菜重點(diǎn)保持系及恢復(fù)系材料，材料來源見表1。對照品種為中油821。材料種植于陜西漢中韓唐基地，每個(gè)材料播種5行，連續(xù)種植3年，每材料平均接菌150株。

1.2 方法

1.2.1 病原菌分離、培養(yǎng) 核盤菌菌株為筆者所在研究室于2010年從自然發(fā)病莖稈內(nèi)采集菌核，并經(jīng)分離純化獲得的強(qiáng)致病菌株。每年接種前7～8 d活化菌種備用。

1.2.2 接種材料準(zhǔn)備 選擇粗細(xì)均勻的牙簽，在5%蔗糖溶液中煮沸，滅菌。將牙簽放入培養(yǎng)瓶中，瓶中心接種菌絲塊，置于培養(yǎng)箱23 ℃、黑暗培養(yǎng)7 d。

1.2.3 接種及調(diào)查 接種方法：油菜初花期時(shí)進(jìn)行人工牙簽莖稈菌絲體接種。每材料分別接種150株。在莖稈離地面25～30 cm處的腋芽處，將帶有菌絲體的牙簽直接插入莖稈內(nèi)，早晚各噴水1次，連續(xù)1周。

2011—2012年調(diào)查方法：根據(jù)油菜菌核病分級標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查病情指數(shù)，計(jì)算相對抗性指數(shù)（RRI）：

RRI=[lnIDM/（100-IDM）]-[lnIDCK/（100-IDCK）]。

式中：IDM為接菌材料的病情指數(shù)；IDCK為對照材料的病情指數(shù)[5]。通過相對抗性指數(shù)進(jìn)行抗性分級，其劃分標(biāo)準(zhǔn)見表2[5]。

2012—2013年與2013—2014年調(diào)查方法：分別于接種后15、30 d測定莖稈上形成的病斑長度，計(jì)算病斑擴(kuò)展值（LE）=L30 d-L15 d。式中：L30 d為接種后30 d時(shí)莖稈上病斑長度，mm；L15 d為接種后15 d時(shí)莖稈上病斑長度，mm。

以中油821為耐病對照品種，參照周必文的方法[6]計(jì)算供試材料抗病指數(shù)（RI）=（YCK-Y）/ YCK。式中：Y為參試材料病斑長度；YCK為對照品種病斑長度。根據(jù)抗病指數(shù)劃分油菜菌核病抗性類型，其劃分標(biāo)準(zhǔn)見表3。

2 結(jié)果與分析

連續(xù)3年核盤菌接菌試驗(yàn)表明，基于相對抗性指數(shù)（RRI）和抗病指數(shù)（RI）的抗性評價(jià)結(jié)果具有較好的一致性，6個(gè)保持系和11個(gè)恢復(fù)系的總體抗菌核病能力良好。5個(gè)質(zhì)不育保持系中CH20B表現(xiàn)為高抗、08-H16B中抗，ZH9B和05-862B表現(xiàn)為中感，而312B表現(xiàn)為低感-低抗材料，兩型核不育保持系材料1003-2AB-B屬于低感-低抗材料。11個(gè)恢復(fù)系中，750R表現(xiàn)為高抗，X2FR中抗、C9816R低抗，CH1FR總體表現(xiàn)為高抗材料，9722×H14和H702表現(xiàn)為低感材料，C98R表現(xiàn)為低感-低抗材料，另外2003-1、05-862表現(xiàn)為中感材料，583R和430R表現(xiàn)中感-低感。其中材料312B、C98R、583R、430R、ZH2R及1003-2AB-B，2年調(diào)查結(jié)果存在差異（表4）。這可能是由于油菜菌核病抗性表現(xiàn)易受環(huán)境影響，抗性基因的表達(dá)存在時(shí)空差異，因此，鑒定年份、時(shí)間不一致導(dǎo)致某些材料抗性出現(xiàn)差異[7]。而其余材料連續(xù)3年的抗性鑒定結(jié)果基本一致，從而得出準(zhǔn)確的抗性分級結(jié)果，為抗病育種方法中親本的選配提供了基礎(chǔ)。

陜西省漢中市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所已審定品種漢油8號（312A×50R）、漢油9號（1003-2AB×08-H16）和漢油6號（1003-2AB×05-862）的抗性均經(jīng)西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)研究所鑒定，分別表現(xiàn)為低抗、低抗-中抗、感病。本試驗(yàn)以上述材料作為對照，對這3個(gè)材料進(jìn)行抗性鑒定，鑒定結(jié)果與材料的抗病性一致，證明試驗(yàn)方法準(zhǔn)確可靠。

3 討論與結(jié)論

長江流域是我國油菜主產(chǎn)區(qū)，陜西漢中地區(qū)為長江上游油菜優(yōu)勢區(qū)域，油菜種植的面積和總產(chǎn)均居全省之首。菌核病對該地區(qū)油菜生產(chǎn)造成較為嚴(yán)重的影響。陜西省漢中市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所將抗菌核病油菜育種作為主要的育種方向之一。目前，油菜抗菌核病品種選育進(jìn)展較為緩慢，主要是由于缺少對菌核病具有高抗能力的油菜種質(zhì)資源。

油菜菌核病抗性評價(jià)人工接種方法較多[8-12]，病害的發(fā)生和擴(kuò)展的程度常常受氣候及基因互作影響，所以接菌后濕度的保持尤為重要，可以減少干燥的環(huán)境對抗性評價(jià)結(jié)果帶來的誤差。牙簽莖稈接種法有效避免了外界的干燥環(huán)境對抗性評價(jià)的影響，是目前田間人工鑒定菌核病抗性應(yīng)用比較可靠的接種方法[13]。

本研究采用牙簽莖稈菌絲體接種法進(jìn)行了連續(xù)3年的油菜菌核病抗性鑒定與篩選，通過對已審定的3個(gè)不同抗性油菜品種-漢油8號（低抗）、漢油9號（低抗-中抗）、漢油6號（感?。┑目剐澡b定，驗(yàn)證了該鑒定方法的準(zhǔn)確性。試驗(yàn)篩選出高抗恢復(fù)系材料2份（750R、CH1FR），高抗保持系材料1份（CH20B）；明確了漢中市主要油菜親本資源圃材料的菌核病抗耐性，試驗(yàn)準(zhǔn)確反映了材料自身的抗菌核病能力，為油菜抗性育種中組合的配置提供理論依據(jù)，同時(shí)促進(jìn)了抗性材料的推廣應(yīng)用。

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