欒　蘭，　 任嘉鵬，　 王鋼力，　 林瑞超，　 李先加*

（1. 北京醫(yī)藥集團(tuán)職工大學(xué)，北京 100079；2. 北京諾信達(dá)醫(yī)藥企業(yè)管理有限公司，北京 100020；3. 中國食品藥品檢定研究院，北京 100050；4. 北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029；5. 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 漯河，462002）

HPLC法測(cè)定注射用雙黃連（凍干）中5-羥甲基糠醛含量

欒蘭1， 任嘉鵬2， 王鋼力3， 林瑞超4， 李先加5*

（1. 北京醫(yī)藥集團(tuán)職工大學(xué)，北京 100079；2. 北京諾信達(dá)醫(yī)藥企業(yè)管理有限公司，北京 100020；3. 中國食品藥品檢定研究院，北京 100050；4. 北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029；5. 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 漯河，462002）

建立了HPLC測(cè)定注射用雙黃連（凍干）中5-羥甲基糠醛的含量，采用Agilent TC-C18色譜柱（250×4.6 mm，5 μm），以甲醇―水為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)284 nm，柱溫35℃。結(jié)果表明，5-羥甲基糠醛能得到很好的分離，線性關(guān)系良好，平均回收率在97.06%～103.41%之間。該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，可以實(shí)現(xiàn)注射用雙黃連（凍干）多成分質(zhì)量控制。

HPLC；注射用雙黃連（凍干）；5-羥甲基糠醛

注射用雙黃連（凍干）為中藥抗菌抗病毒的著名方劑，是由金銀花、黃芩、連翹三味中藥經(jīng)提取、精制、冷凍干燥所得的供靜脈滴注的中藥粉針劑，對(duì)呼吸道合胞病毒、流感病毒、皰疹病毒、腺病毒及麻疹病毒等具有顯著地抑制作用，是一種廣譜的抗病毒藥物[1]。有報(bào)道稱5-羥甲基糠醛是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個(gè)醛類化合物，該化合物可能引發(fā)并促進(jìn)腸小囊異常生長(zhǎng)及具有一定程度的基因毒性[2-3]。本文對(duì)注射用雙黃連（凍干）中的5-羥甲基糠醛進(jìn)行測(cè)定，所建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，能更好的控制注射用雙黃連（凍干）的質(zhì)量，并為其安全性研究提供參考依據(jù)。

1　實(shí)驗(yàn)

1.1儀器與試藥

注射用雙黃連（凍干），哈藥集團(tuán)中藥二廠；甲醇，色譜純，J.J.Baker公司；重蒸水；5-羥甲基糠醛對(duì)照品，中國藥品生物制品檢定所提供。

高效液相色譜儀（Waters 2998型二極管陣列檢測(cè)器，Waters公司），AE 240型十萬分之一電子分子天平（METTLER公司），KQ=250 DE型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），MiLLi-Q超純水處理系統(tǒng)。

1.2色譜條件

色譜柱，AgiLent Zorbax SB-C18（250×4.6 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)，284 nm；柱溫，35℃；流動(dòng)相，A相為水（V/V），B相為甲醇，流速1.0 min/mL；洗脫程序如表1所示。

表1　HPLC梯度洗脫程序

1.3溶液配制

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取5-羥甲基糠醛對(duì)照品6.25 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，從中精密吸取1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：精密稱取供注射用雙黃連（凍干）樣品89.9 mg置10 mL容量瓶中，加水定容，搖勻，即得。

2　結(jié)果與討論

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系的考察

取上述對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1.0、3.0、6.0、9.0、12.0 μL，記錄色譜圖，如圖1所示。以各對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸得回歸方程y＝8E＋06 x＋1 485.4，r＝0.999 7，線性回歸曲線表明，在2.5～30 μg進(jìn)樣量范圍內(nèi)，5-羥甲基糠醛的進(jìn)樣量與色譜峰峰面積分值程良好的線性關(guān)系。結(jié)果見圖2和表2所示。

圖1　5-羥甲基糠醛對(duì)照品色譜圖

表2　5-羥甲基糠醛線性關(guān)系考察試驗(yàn)結(jié)果

2.2檢測(cè)方法準(zhǔn)確性考察

2.2.1精密度試驗(yàn)

精密吸取同一上述混合對(duì)照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5針，記錄色譜圖，計(jì)算儀器精密度，結(jié)果如表3所示。由表3可見，5-羥甲基糠醛峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＝2.7%，表明本法精密度良好。

表3　5-羥甲基糠醛精密度考察試驗(yàn)結(jié)果

2.2.2重復(fù)性試驗(yàn)

按所擬訂的“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法，對(duì)同一批樣品，平行制備5份供試品溶液，進(jìn)樣10 μL，分別計(jì)算各測(cè)定成分的含量，結(jié)果如表4所示。由表4可見，5-羥甲基糠醛含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＝3.0 %，表明本法重復(fù)性良好。

表4　5-羥甲基糠醛重復(fù)性考察試驗(yàn)結(jié)果

2.2.3穩(wěn)定性試驗(yàn)

圖2　5-羥甲基糠醛標(biāo)準(zhǔn)曲線

按擬訂的“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法，對(duì)同一供試品溶液，分別在室溫下放置0、1、2、4、8 h，精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果如表5所示。由表5可見，5-羥甲基糠醛在8 h之內(nèi)基本穩(wěn)定。

表5　5-羥甲基糠醛穩(wěn)定性考察試驗(yàn)結(jié)果

2.2.4 加樣回收試驗(yàn)

采用加標(biāo)回收法，精密量取已知準(zhǔn)確含量的注射用雙黃連樣品為基底，精密加入5-羥甲基糠醛（C＝2.5 μg/mL）1.3 mL依法測(cè)量，測(cè)定加標(biāo)回收率，結(jié)果如表6所示。

表6　5-羥甲基糠醛回收率測(cè)定結(jié)果

2.3樣品含量測(cè)定

圖3是注射用雙黃連（凍干）樣品色譜圖。按所擬訂的含量測(cè)定方法，測(cè)定了6批雙黃連注射液樣品中5-羥甲基糠醛的含量，結(jié)果如表7。

圖3　5-注射用雙黃連（凍干）樣品色譜圖

表7　雙黃連注射液樣品中5-羥甲基糠醛的含量

3　結(jié)論

藥典關(guān)于該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未涉及5-羥甲基糠醛的限量要求，但是鑒于其安全性評(píng)價(jià)的相關(guān)研究結(jié)果[4]，對(duì)其含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)應(yīng)該引起足夠的重視，確保用藥安全。本研究測(cè)定了6批注射用雙黃連（凍干）中5-羥甲基糠醛的含量，平均為0.113‰，所建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，能更好的控制注射用雙黃連（凍干）的質(zhì)量，并為其安全性研究提供參考依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典[S]. 一部. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2001: 135.

[2] Zhang X M, Chan, C C, Stamp D, et al. Initiation and promotion of colonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose[J]. Carcinogenesis, 1993, 14(4): 773-775.

[3] Surh Y J, Tannenbaum S R. Activation of the Maillard reaction product 5-(hydroxymethy) furfural to strong mutagens via vallylic sulfonation and chlorination[J]. Chem Res Toxicol, 1994, 7(3): 313-318.

[4] 張玉玉, 宋戈, 李全宏. 食品中糠醛和5-羥甲基糠醛的產(chǎn)生機(jī)理、含量檢測(cè)及安全性評(píng)價(jià)研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué), 2012, 33(5): 275-280.

HPLC Determination of 5-HMF in Shuanghuanglian Injection

LUAN Lan1,REN Jia-peng2,WANGgang-li3,
LIN Rui-chao4,LI-Xian-jia5*
（1. China Academy of Chinese Medical Sciences, China Academy of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100700, China;
2. Beijing NuoXinDa Pharmaceutical Enterprise Mananement Co., Ltd, Beijing 100020, China;
3. National institute for Food and Drug Control, Beijing 100050, China;
4. Bejing university of Chinese Medicine, Beijing 100029, China
5. Luohe Med & Cal College, Luohe 462000, China）

To establish an HPLC method for the determination of 5-HMF in Shuanghuanglian Injection. The optimal conditions of separation and detection were achieved on an TC-C18(250×4.6 mm, 5 μm) eluted with agradient of methanol and water, at a flow rate of 1.0 mL/min, detected at 284 nm. Thegood resolution can be achieved and the method was linear over the investigated concentration range. The average recovery was between 97.06%～103.41%, and the method was accurate, easy and reproducible, which could be applied to quality control of Shuanghuanglian Injection.

HPLC; Shuanghuanglian Injection; 5-HMF

R284.1

A

1009-220X(2016)02-0043-05 DOI: 10.16560/j.cnki.gzhx.20160204

2015-12-21

欒 蘭（1978～），女，博士研究生；主要從事中藥化學(xué)成分及質(zhì)量控制的研究。

李先加（1976～），男，碩士，副教授；主要從事生物化學(xué)的研究。nzr110@163.com