郭　磊，李　新

（1.周口市川匯區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，河南 周口 466000；

2.商丘市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心）

一種獸用補氣健脾復方顆粒制劑對仔豬免疫功能和生長性能的影響

郭磊1，李新2

（1.周口市川匯區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，河南 周口 466000；

2.商丘市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心）

為觀察一種獸用補氣健脾復方顆粒制劑對仔豬免疫功能和生長性能的影響，試驗以杜長大仔豬為試驗動物，黃芪多糖為對照藥物（200 mg/kg飼料），采用高、中、低（8 g/kg、4 g/kg、2 g/kg飼料）3個劑量，通過檢測豬瘟抗體效價，檢測血清中IL-2和IFN-γ含量。結(jié)果顯示，該復方制劑高、中劑量（8 g/kg、4 g/kg飼料）能促進仔豬的生長發(fā)育，提高血清中IL-2、IFN-γ含量和豬瘟抗體水平。

補氣健脾復方制劑；免疫功能；仔豬

目前，盡管在養(yǎng)豬生產(chǎn)中對許多疾病采用相應(yīng)的疫苗進行預(yù)防，由于病原種類極其復雜，而且不斷變異，使疫苗的研制往往滯后于疫病的發(fā)生，單純依賴疫苗不能解決疫病的防治問題。解決豬疫病防治問題應(yīng)從提高其內(nèi)在免疫機能入手，通過增強其自身的抗病能力，達到預(yù)防疫病的目的。

中藥具有高效、低毒、低殘留等優(yōu)點，其中許多種類還是很好的免疫增強劑，可以提高機體的免疫水平［1］。中藥以其在提高免疫功能方面的獨特優(yōu)勢，在畜禽業(yè)中得到了越來越普遍的推廣應(yīng)用。該試驗為觀察一種獸用補氣健脾復方顆粒制劑（以下簡稱“復方制劑”）對仔豬免疫功能和生長性能的影響，對該復方制劑進行臨床試驗，進一步考察該制劑的療效和毒副反應(yīng)，為該制劑的大規(guī)模生產(chǎn)及應(yīng)用提供合理、科學的臨床試驗數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗時間、地點

2012年4月15日至2013年5月8日河南省周口市某豬場、周口市川匯區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心。

1.2材料

1.2.1試驗動物選用200頭斷奶仔豬，由河南省周口市某豬場提供，仔豬品種為杜長大豬，斷奶日齡為出生25～35 d（平均30 d），豬只健康狀況良好。

1.2.2試驗藥品和試劑某復方制劑，批號：20120302；黃芪多糖粉，北京某公司，批號：20111123；豬瘟疫苗，廣東永順生物制藥有限公司，批號：2011046；豬瘟正向血凝診斷抗原、陽性血清、陰性血清及稀釋液由中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所提供，批號為20121009、20121003和20121003；豬血清IL-2 ELISA檢測試劑盒，天津索羅門生物科技有限公司；豬瘟血清IFN-γ ELISA檢測試劑盒，天津索羅門生物科技有限公司；仔豬飼料，北京某飼料有限公司提供。

1.2.3主要儀器設(shè)備促凝管，湖南安信醫(yī)用高分子材料有限公司，湘食藥監(jiān)械（準）字2009第2410045號；酶標儀（RT2100C），美國雷杜公司；電子天平（MR200A），上海第二天平儀器廠；電熱鼓風干燥箱，北京市永光明醫(yī)療儀器廠；恒溫培養(yǎng)振蕩器（ZHWY-103D），上海智城分析儀器制造有限公司；超凈工作臺（LGJ-10），北京四環(huán)科學儀器廠。

1.3方法

1.3.1試驗分組及處理將體質(zhì)量相近、健康仔豬100頭（公母各半），按照性別、體質(zhì)量、窩別對等分配原則隨機分為5組：試驗組（A組、B組、C組）、黃芪多糖對照組（D組）和空白對照組（E組）。每組20頭。試驗組（A組、B組、C組）于平均31日齡（免疫前3 d）開始，按高、中、低三個劑量（8 g/kg、4 g/kg、2 g/kg飼料）拌料添加復方制劑1 w；黃芪多糖對照組（D組）同時段拌料添加黃芪多糖（200 mg/kg飼料）；空白對照組（E組）不添加任何藥物。平均日齡34 d用1頭份劑量（按說明書）進行豬瘟疫苗首免，于平均日齡65 d用1頭份劑量進行豬瘟疫苗二免。并分別于平均日齡34 d、48 d和60 d稱量各豬只體質(zhì)量，計算料重比；靜脈采血2 ml，析出血清，備用。試驗分組及處理詳見表1。

表1　試驗動物分組及處理

1.3.2試驗豬的管理試驗豬于哺乳期（23 d）進行公豬去勢，平均日齡30 d時斷奶，轉(zhuǎn)欄（由產(chǎn)仔房轉(zhuǎn)入保育舍），分組，平均日齡60 d時稱重結(jié)束試驗。試驗豬自由采食，自由飲水，試驗組與對照組飼料配方相同，40 d更換保育豬后期料。

1.3.3測定指標及方法

1.3.3.1豬瘟抗體效價檢測分別于平均34日齡、48日齡和60日齡試驗豬靜脈采血2 ml，析出血清，按試劑盒說明書采用正向間接血凝試驗檢測豬瘟抗體水平。

1.3.3.2血清中IL-2含量的檢測對34日齡、48日齡和60日齡試驗豬靜脈采血制備的血清，用ELISA試劑盒檢測其IL-2的含量，其操作方法和判定標準，均按說明書進行。

1.3.3.3血清中IFN-γ含量的檢測對34日齡、48日齡和60日齡試驗豬靜脈采血制備的血清，用ELISA試劑盒檢測其IFN-γ的含量，其操作方法和判定標準，均按說明書進行。

1.3.3.4生長性能測定34日齡和60日齡時分別稱重，計算出初始平均體質(zhì)量、結(jié)束時的平均體質(zhì)量和平均增重；逐日逐欄稱量記錄飼料消耗量，計算飼料報酬（料重比）。料重比＝飼養(yǎng)期內(nèi)所耗標準飼料量（kg）/同期增重（kg）

此外，還對試驗豬群的精神狀態(tài)、食欲、糞便狀態(tài)及發(fā)病情況、死亡淘汰情況等進行臨床觀察。

1.4統(tǒng)計方法

采用spss19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2　結(jié)果與分析

2.1對仔豬豬瘟抗體效價的影響

34日齡，各組豬瘟抗體水平相近，差異不顯著（P＞0.05）。48日齡，豬瘟抗體水平A、B組顯著高于C、E組，差異顯著（p＜0.05）。60日齡，豬瘟抗體水平，A、B組高于C、E組，差異顯著（p＜0.05或p＜0.01）；D組高于E組，差異顯著（p＜0.05）。結(jié)果詳見表2。

表2　對仔豬豬瘟抗體效價的影響（pg/ml）

2.2對仔豬血清IL-2含量的影響

34日齡，各組仔豬血清IL-2含量水平相近，差異不顯著（P＞0.05）。48日齡，血清IL-2含量，A組和B組顯著高于E組，差異顯著（p＜0.05）；C組、D組和E組，差異不顯著（P＞0.05）。60日齡，血清IL-2含量，A組和B組顯著高于C組和E組，差異極顯著（p＜0.01）。結(jié)果詳見表3。

表3　對仔豬血清IL-2的影響（單位：pg/ml）

2.3對仔豬血清IFN-γ含量的影響

34日齡，各組仔豬血清IFN-γ含量水平相近，差異不顯著（P＞0.05）。48日齡，血清IFN-γ含量，A組和B組高于E組，差異顯著（p＜0.01或p＜0.05）；D組和其他各組相比較，差異均不顯著（P＞0.05）。60日齡，血清IFN-γ含量，A組和B組顯著高于C組和E組，差異極顯著（p＜0.01）；D組和其他各組相比較，差異均不顯著（P＞0.05）。結(jié)果詳見表4。

表4　對仔豬血清IFN-γ的影響（單位：pg/ml）

2.4對仔豬生長性能及飼料利用的影響

34日齡各組仔豬平均體質(zhì)量相近，差異不顯著（P＞0.05）。60日齡平均體質(zhì)量和試驗期平均增重，A組和B組高于C組和E組，差異顯著（p＜0.05）；D組與其他各組相比，無顯著差異（P＞0.05）。A組和B組的料重比低于D組，差異顯著（p＜0.05）；D組低于C組和E組，差異顯著（p＜0.05）。料重比A組和B組低于D組，差異顯著（p＜0.05）；D組低于C組和E組，差異顯著（p＜0.05）。結(jié)果詳見表5。

表5　對仔豬生長性能及飼料利用率的影響

2.5對仔豬其他生理狀況的影響

復方制劑剛添加到飼料中時，未見不良反應(yīng)。通過對各組豬群的精神狀態(tài)、食欲、糞便狀況及發(fā)病、死亡等情況的臨床觀察，輕度腹瀉C組和E組各2頭次（發(fā)病率為8%）、B組和D組各1頭次（發(fā)病率為4%），A組無腹瀉豬只，各組之間無顯著差異（P＞0.05）。其他情況各組均未顯現(xiàn)異常，均無死亡。

3　討論

該復方制劑中有黃芪、刺五加、甘草、茯苓等成分，其中多種中藥能增強動物的體液免疫和細胞免疫。張訓海等研究表明，黃芪多糖也可以作為體液免疫增強劑［2］。刺五加對多種動物具有免疫增強作用，能促進免疫器官的發(fā)育，增強免疫功能［3-5］。甘草多糖具有多種免疫增強功能，能激活網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)［6］，具有抗補體活性［7］，直接刺激B淋巴細胞增殖，誘導IgM、IgG的產(chǎn)生，還能誘生和促誘生干擾素，增強機體的殺傷細胞的活性［8］。王旭貞等報道，黃芪提取物能提高雞血清ND和IBD抗體效價［9］。Han等研究表明刺五加多糖可以使分泌IgM的B細胞數(shù)量顯著增加［10］。劉新義等通過檢測豬瘟疫苗抗體水平，證實了黃芪多糖對豬免疫功能的增強作用［11］。劉霞等證實甘草多糖具有促進淋巴細胞增殖的作用［12］。鄧媛媛等報道，茯苓不同提取物質(zhì)部位能不同程度促進小鼠腹腔內(nèi)吞噬百分率和吞噬指數(shù)，能明顯增加小鼠血清內(nèi)免疫因子IL-2和TNF-α含量［13］。邵珊等研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖能增強豬對PRRSV滅活疫苗的免疫應(yīng)答能力，主要通過極大地促進外周血淋巴細胞的增殖，使抗體提早產(chǎn)生并提高抗體滴度和IL-2表達水平［14］。

體液免疫是由B淋巴細胞介導的一種重要的特異性免疫反應(yīng)，是機體抗御傳染病的主要因素之一，主要評價指標為抗體水平。IL-2即白細胞介素2，是參與免疫應(yīng)答的重要細胞因子。IFN-γ是由機體活化的T淋巴細胞和NK細胞產(chǎn)生的一種糖蛋白，除具有抗病毒、抗胞內(nèi)寄生蟲、抗細胞增殖外，還具有強大的免疫調(diào)節(jié)功能。故筆者將豬瘟抗體效價、血清IL-2含量、血清IFN-γ含量作為免疫功能的檢測指標。

試驗結(jié)果顯示，復方制劑高、中劑量能顯著升高仔豬豬瘟疫苗的抗體水平、血清IL-2含量、血清IFN-γ含量，且其效果均優(yōu)于黃芪多糖。另外，復方制劑高、中劑量組平均體質(zhì)量和試驗期平均增重顯著高于對照組，料重比顯著低于對照組。說明復方制劑高、中劑量組能促進仔豬的生長發(fā)育，降低料重比。應(yīng)該與復方制劑中富含有多種氨基酸、糖、葉酸、甜菜堿、亞麻酸、VA和VB，以及Fe、Ca、Mn、 Zn、Cr、Co等多種微量元素有關(guān)。

4　結(jié)論

經(jīng)過該研究可以發(fā)現(xiàn)，復方制劑具有增強機體免疫功能和促進仔豬生長發(fā)育作用，綜合試驗結(jié)果和臨床實際情況，建議以中劑量，即4 g/kg為推薦劑量。給藥方式為：拌料，推薦劑量為：每千克飼料加入4 g復方制劑，連續(xù)使用7 d。

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1004-5090（2016）08-0010-03

2016-05-27）