龔恒亮，孫東磊，陳立君，趙歡歡，安玉興

（廣州甘蔗糖業(yè)研究所 廣東省甘蔗改良與生物煉制重點實驗室，廣東廣州510316）

甘蔗土棲害蟲Alissonotum impressicolle Arrow抗藥性監(jiān)測與抗性治理

龔恒亮，孫東磊，陳立君，趙歡歡，安玉興*

（廣州甘蔗糖業(yè)研究所 廣東省甘蔗改良與生物煉制重點實驗室，廣東廣州510316）

本文報道了我國甘蔗土棲害蟲Alissonotum impressicolle Arrow抗藥性監(jiān)測結(jié)果。根據(jù)對廣東順德逢簡、廣東紅旗農(nóng)場、廣西崇左3地蟲源Rf蟲群、Rh蟲群和Rc蟲群三齡幼蟲的監(jiān)測結(jié)果與敏感基線對比，在1991年，Rf蟲群對辛硫磷、久效磷、克百威、氰戊菊酯和林丹分別產(chǎn)生了3.3、2.0、3.3、14.8和5.0倍的抗藥性，Rh蟲群對甲基異柳磷、氰戊菊酯和林丹分別產(chǎn)生了3.0、8.9和2.4倍的抗藥性。在1996年，Rh蟲群對辛硫磷、甲基異柳磷、甲拌磷和克百威的抗性分別為2.0、6.0、3.8和11.5倍。與1991年監(jiān)測結(jié)果相比，Rh蟲群對甲基異柳磷、克百威、辛硫磷和甲拌磷的抗性分別上升了3.0、9.6、2.0和2.7倍。在2009年，Rc蟲群對辛硫磷、毒死蜱、特丁硫磷和克百威的抗性分別為2.2、6.5、119.1 和6.4倍。在抗性治理研究方面，通過新農(nóng)藥化合物篩選和農(nóng)藥混配，篩選出10種生物活性優(yōu)于對照藥劑的新農(nóng)藥，特別是有5種新煙堿類藥劑的生物活性高于對照藥劑；農(nóng)藥混配研究中有15個混配組合的CTC＞150。文章還總結(jié)出一套快速、高效的甘蔗土棲害蟲藥劑篩選方法。作者認為，只有通過害蟲抗性綜合治理，減少農(nóng)藥用量和對化學(xué)防治的依賴，才能從根本上解決害蟲抗藥性問題。

甘蔗；土棲害蟲；抗藥性與治理；農(nóng)藥篩選與混配

0　引言

到 2011年為止，世界范圍內(nèi)已有多達 10065件關(guān)于各種害蟲對殺蟲劑抗藥性的案例，涉及 570種害蟲、338個農(nóng)藥化合物［1］。目前，我國已有 37種重要的農(nóng)作物害蟲產(chǎn)生抗藥性，其中包括糧食作物害蟲13種，棉花害蟲5種；蔬菜害蟲10種，果樹害蟲 2種，儲糧害蟲 6種［2］。害蟲抗藥性問題已成為化學(xué)防治面臨的最棘手問題，也是殺蟲劑新產(chǎn)品開發(fā)和應(yīng)用中面臨的重要挑戰(zhàn)之一。從新化合物投入使用到抗藥性產(chǎn)生的時間越來越短，如以吡蟲啉為代表的新煙堿類殺蟲劑，自1992年上市至2011年的短短20年間，就有346例有關(guān)抗藥性報道。即使是新近開發(fā)的氟雙酰胺和氯蟲苯甲酰胺也未能幸免，泰國的小菜蛾、日本茶樹的褐帶卷蛾對這2種農(nóng)藥化合物已產(chǎn)生了嚴重的抗性。抗性發(fā)展速度超過了新藥劑開發(fā)速度。

害蟲抗藥性的產(chǎn)生與發(fā)展有多方面的原因，但歸結(jié)起來不外乎昆蟲的內(nèi)在因素和外在因素。外在因素是化學(xué)農(nóng)藥大量使用、追加用量，在害蟲種群中產(chǎn)生巨大的選擇壓力；而內(nèi)在因素則是害蟲的抗性進化，不過這種進化是生物進化的一個特例（Dobzhansky，1951）。在藥劑選擇前，害蟲種群內(nèi)存在著大量的變異，有自身的遺傳變異和環(huán)境的誘導(dǎo)變異。這些變異是抗性進化之源，而藥劑是抗性基因型的選擇劑。不過在自然界變異對生物通常不利，若無外在的定向選擇，其變異存在的頻率極低，如無選擇壓力存在將會被淘汰。只有在外在對某種變異有定向的篩選作用時，此變異才呈定向性。在殺蟲劑選擇動力下，原始野生害蟲種群中存在的大量低頻率變異等位基因頻次上升，導(dǎo)致害蟲抗藥性進化。從害蟲抗性進化的理論出發(fā)，害蟲抗性是不可避免的，但其抗性發(fā)展的速度因蟲而異，也因藥而異。因蟲而異即因害蟲的活動能力、世代數(shù)、繁殖能力、先天基因型的復(fù)雜性及變異度等的不同而不同，因藥而異即因藥劑的結(jié)構(gòu)、毒性、選擇性、異構(gòu)體的多寡、劑型的不同而不同［3］。因此，當(dāng)一種新的殺蟲劑投入使用后經(jīng)過一段時間，因藥劑的定向選擇，害蟲產(chǎn)生抗藥性，為彌補抗性損益，必須追加用藥量，加速抗性進化使抗性更高，追加更大用量和用藥次數(shù)，導(dǎo)致防治失敗，最后只好改用新的藥劑，如此周而復(fù)始。

就甘蔗土棲害蟲而言，由于世代數(shù)少，活動力和繁殖力相對較弱，害蟲自身的抗性進化相對緩慢，但由于甘蔗土棲害蟲防治使用的藥劑多為毒性高、選擇性差、在環(huán)境中持效期長的藥劑，對害蟲種群形成持久的選擇壓力，導(dǎo)致抗性的不斷進化。盡管有關(guān)甘蔗土棲害蟲抗性的報道為數(shù)不多，但依據(jù)害蟲抗藥性進化理論，作者認為，甘蔗土棲害蟲抗藥性問題普遍存在，也是土棲害蟲周期性暴發(fā)危害的重要因素之一。

突背犀金龜A.impressicolle是我國甘蔗作物的最重要土棲害蟲之一，其分布最廣，從東起臺灣，西至云南的各甘蔗主產(chǎn)?。▍^(qū)）均有分布，國外在印度、緬甸、菲律賓、南非等地亦有分布；其危害性最大，突背犀金龜是甘蔗金龜子中少有的成蟲和幼蟲（蠐螬）均為害甘蔗，且均能對甘蔗生產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟損失的土棲害蟲［4］。

1992年，作者以“甘蔗黑色蔗龜 Alissonotum impressicolle Arrow抗藥性研究初報”為題報道了突背犀金龜抗藥性監(jiān)測結(jié)果［5］。1996和2009年，作者對該蟲抗性發(fā)展狀況進行了跟蹤監(jiān)測，并試圖從新農(nóng)藥篩選和農(nóng)藥混配研究入手，探索抗性治理的途徑。本文將對近20年的研究結(jié)果作一總結(jié)報道。

1　材料與方法

1.1 供試藥劑

辛硫磷 90.0％TC、樂果 98.5％TC、毒死蜱98.1％TC、甲拌磷97.2％TC、久效磷97.0％TC、甲基異柳磷 95.5％TC、特丁硫磷 95.5％TC、嘧啶磷90.0％TC、敵百蟲97.5％TC、二嗪磷96.0％TC、克百威 97.9％TC、丁硫克百威 91.2％TC、甲萘威99.0％TF、殺蟲單 94.9％TF、氰戊菊酯 97.5％TC、氯氰菊酯 95.0％TC、聯(lián)苯菊酯 97.5％TC、吡蟲啉98.1％TF、啶蟲脒 99.0％TC、噻蟲嗪 98.3％TF、噻蟲胺98.0％TF、呋蟲胺95.5％TF、氟蟲腈95.0％TF、溴蟲腈93.2％TF和阿維菌素96.2％TF等藥劑均為工業(yè)品，為國內(nèi)和國外有關(guān)廠家的產(chǎn)品。

1.2供試昆蟲

突背犀金龜Alissonotum impressicolle Arrow的Rf蟲群、Rh蟲群和Rc蟲群的3齡幼蟲分別采自廣東順德逢簡、廣東珠海紅旗農(nóng)場以及廣西崇左扶綏蔗區(qū)。采回的幼蟲在室內(nèi)20±1℃恒溫下，用土培養(yǎng)2～3天，挑選生活力強，體重相近，生長一致的3齡幼蟲作為生物測定的蟲源。

1.3儀器設(shè)備

Burkard手動微量點滴儀（BS00279，英國），生化培養(yǎng)箱（BPC-150F，上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。1.4 測定方法

1.4.1室內(nèi)毒力測定方法

采用微量點滴法。參照龔恒亮等（1992）［5］的方法略有修改。丙酮作為溶解劑和稀釋劑。將原藥稱樣并精確至0.1 mg，用丙酮定容后為母液置冰箱保存，保存時間不超過7天。

1.4.1.1濃度設(shè)計

按等比級數(shù)1、2、4、……，或等差級數(shù)1、2、3、……，或2者相結(jié)合的方法，將藥劑設(shè)計成5～6個系列濃度，用母液進行稀釋后備用。

1.4.1.2點滴

用微量點滴儀將藥液點滴于昆蟲胸部背板上，每個濃度處理20～25頭蟲，重復(fù)4～5次。并設(shè)丙酮空白對照。處理后的昆蟲置于 20±1℃的恒溫培養(yǎng)箱中黑暗條件下培養(yǎng)48 h。

1.4.1.3結(jié)果統(tǒng)計

將處理48 h后的昆蟲進行結(jié)果調(diào)查，統(tǒng)計活蟲數(shù)和死亡蟲數(shù)，計算死亡率。

1.4.1.4昆蟲死亡判斷標準

蟲體僵直，用銳器觸及蟲體6～8 s，蟲體不能作翻卷運動，或嚴重腹瀉嘔吐、蟲體收縮變形。

1.4.1.5毒力（LD50）計算

將死亡率以死亡機率值，劑量以劑量對數(shù)進行直線回歸，計算LD50值（μg/g）和置信區(qū)間，作χ2測驗，作LD-p線（Y=a+b X）。當(dāng)對照死亡率＞20％時試驗無效；對照死亡率在 10％～20％時，用 Abot公式進行死亡率校正。

1.4.2敏感基線建立

從幾個地方采集蟲源，用LD25的探測劑量對蟲源進行敏感性探測，以相對敏感蟲群的LD50作為敏感基線。

1.4.3共毒系數(shù)（CTC）測定方法

1.4.3.1單劑的室內(nèi)毒力測定

采用微量點滴法。測定方法和步驟同1.4.1小節(jié)的方法。

1.4.3.2混配配比設(shè)計與篩選

以二元混配為例，先配置3～5個不同的混配配方組合，以各組合總有效體含量等量法設(shè)計2～3個濃度，濃度差約10～100倍。以死亡率50％為標準淘汰死亡率＜50％的配方。

1.4.3.3農(nóng)藥混配室內(nèi)毒力測定

采用 1.4.1小節(jié)的方法對保留的混配配方組合進行毒力測定。

1.4.3.4共毒系數(shù)（CTC）計算

以A、B 2種藥劑作二元混配，其共毒系數(shù)（CTC）采用以下方式計算：

毒力指數(shù)（TI），按公式（1）計算：

1.4.3.5混配劑聯(lián)合作用反應(yīng)類型

CTC＜70，拮抗作用；70≤CTC＜150，相加作用；150≤CTC，增效作用；200＜CTC，顯著增效作用。

2　結(jié)果與分析

2.1 突背犀金龜3齡幼蟲對不同藥劑的敏感性差異

表1列出了7種藥劑對突背犀金龜Rh蟲群3齡幼蟲的毒力（LD50）測定結(jié)果。

結(jié)果表明：Rh蟲群對不同藥劑的毒力反應(yīng)存在較大差異，這種差異因其表現(xiàn)的敏感性不同而異。Rh蟲群對特丁硫磷表現(xiàn)最敏感，LD50僅為0.00845 μg/g，對甲拌磷的耐藥性最強，LD50為21.7991 μg/g。如果以毒力指數(shù)為標準衡量 Rh蟲群對不同藥劑間的敏感性差異，則Rh蟲群對特丁硫磷與甲拌磷之間的敏感性差異最大，毒力指數(shù)達到 2579.8；而對殺蟲單與甲拌磷的敏感性差異最小，毒力指數(shù)僅為1.2倍。如果按藥劑對Rh蟲群的毒力大小排列，則順次為特丁硫磷＞毒死蜱＞辛硫磷＞克百威＞甲基異柳磷＞殺蟲單＞甲拌磷。

2.2突背犀金龜Rc蟲群對不同藥劑的敏感性差異

表2列出了7種藥劑對突背犀金龜Rc蟲群3齡幼蟲的毒力（LD50）測定結(jié)果。

數(shù)據(jù)顯示：Rc蟲群對不同藥劑的敏感性亦存在差異，但與Rh蟲群相比，其差異性明顯縮小。其對特丁硫磷表現(xiàn)最敏感，LD50為1.00650 μg/g，毒力指數(shù)為11.4；對殺蟲單的耐藥性最強，LD50為42.3740 μg/g，毒力指數(shù)為0.3。若按照藥劑對Rh蟲群的毒力大小排列，則順次為：特丁硫磷＞克百威＞甲基異柳磷＞辛硫磷＞毒死蜱＞甲拌磷＞殺蟲單。

表1 7種藥劑對突背犀金龜Rh蟲群3齡幼蟲的毒力測定結(jié)果（1996）

表2 7種藥劑對突背犀金龜Rc蟲群3齡幼蟲的毒力測定結(jié)果（2009）

2.3Rf、Rh和Rc 3個蟲群對藥劑的抗藥性差異

Rf、Rh和Rc 3個蟲群對幾種藥劑的抗藥性差異見表3。

為監(jiān)測甘蔗土棲害蟲的抗性狀況，作者從1990年開始，從尋找敏感蟲群入手建立敏感基線。首先對廣東省各蔗區(qū)進行了有針對性的調(diào)查，了解各蔗區(qū)的用藥情況，分別從幾個地方采集蟲源，并在上年毒力測定的基礎(chǔ)上，用LD25的探測劑量進行敏感性探測。探測結(jié)果表明，廣東省博羅縣楊村地區(qū)蟲源對被探測的幾種藥劑（辛硫磷、甲基異柳磷、甲拌磷、克百威、久效磷、林丹、氰戊菊酯）的反應(yīng)相對敏感，故將其測定的LD50作為敏感基線。1996年，特丁硫磷和毒死蜱剛在 Rh蟲群上使用，其對這 2種藥劑相對較敏感，故將該年測定的這2種藥劑對Rh蟲群的LD50也作為敏感基線。

根據(jù)1991、1996和2009 3年的LD50測定數(shù)據(jù)與敏感基線的對比，可以看到：突背犀金龜3個蟲群對藥劑的耐藥性各有不同，且隨時間的推移，其耐藥性不斷加強，對多數(shù)被測定的藥劑已產(chǎn)生了一定的抗藥性。

在1991年的抗性監(jiān)測中，順德逢簡的Rf蟲群對辛硫磷、久效磷、克百威、氰戊菊酯和林丹分別產(chǎn)生了3.3、2.0、3.3、14.8和5.0倍的抗藥性，對甲基異柳磷產(chǎn)生了1.7倍的耐藥性，對甲拌磷的耐藥性與敏感蟲群的耐藥性變化不大；斗門紅旗農(nóng)場Rh蟲群對甲基異柳磷、氰戊菊酯和林丹分別產(chǎn)生了3.0、8.9 和2.4倍的抗藥性，對辛硫磷、甲拌磷、久效磷和克百威分別有1.4、1.1、1.3和1.9倍的耐藥性。

在1996年的抗性監(jiān)測中，Rh蟲群對辛硫磷、甲基異柳磷、甲拌磷和克百威分別產(chǎn)生了2.0、6.0、3.8和11.5倍的抗性。同1991年相比，在經(jīng)歷了5年后，Rh蟲群對幾種常用藥劑的抗性均有不同程度的發(fā)展，對甲基異柳磷的抗性指數(shù)上升了 3，對克百威的抗性發(fā)展較快，抗性指數(shù)上升了9.6；對辛硫磷的抗性由原來的耐藥性水平上升到 2.0倍抗性；對甲拌磷抗性指數(shù)上升了2.7。

在2009年的抗性監(jiān)測中，Rc蟲群對辛硫磷、毒死蜱、特丁硫磷、和克百威的抗性分別為2.2、6.5 119.1和 6.4倍，對甲基異柳磷和甲拌磷分別為 1.9 和1.2倍的耐藥性。

表3　甘蔗突背犀金龜抗藥性監(jiān)測結(jié)果及抗性發(fā)展狀況

2.417種農(nóng)藥化合物對突背犀金龜幼蟲的生物活性

表4列出了突背犀金龜對包括有機磷類、新煙堿類等在內(nèi)的 17種農(nóng)藥化合物和對照藥劑克百威的室內(nèi)生測結(jié)果。

表中以克百威的生物活性為標準計算各藥劑的相對毒力RT。當(dāng)RT＞1時，表示生物活性高于對照藥劑，且RT值越大，表明生物活性越高；當(dāng)RT＜1時，表示生物活性低于對照藥劑，且RT值越小，生物活性越低。從計算的結(jié)果，可以看到：在測定的17種農(nóng)藥化合物中，有10種的RT＞1，其中RT值最高的為阿維菌素，達到109.9；其次為溴蟲腈，RT值為42.9；有7種的RT＜1，其中相對毒力最小的為敵百蟲，RT值僅為0.2。如果以相對毒力大小排列，RT＞1的10種藥劑排列順次為阿維菌素＞溴蟲氰＞噻蟲胺＞呋蟲胺＞氟蟲腈＞聯(lián)苯菊酯＞噻蟲嗪＞啶蟲脒＞吡蟲啉＞二嗪磷；RT＜1的7種藥劑排列順次為丙硫克百威＞嘧啶磷＞樂果＞氯氰菊酯＞丁硫克百威＞甲萘威＞敵百蟲。

2.5農(nóng)藥混配增效研究

在農(nóng)藥混配研究中，以各混配配方組合總有效體等量篩選法，能夠先期快速淘汰大量的不良配方，再對保留的配方進行共毒系數(shù)測定，獲得具有互作增效配方，節(jié)省研究時間。表5列出了15種具有增效作用和1種具有相加作用的農(nóng)藥混配組合。從篩選結(jié)果看，在具有增效作用的配方中，來自不同類型藥劑之間混配的配方組合有12個，來自同類型藥劑之間混配的配方組合有4個。其中CTC最高的有辛硫磷∶樂果 2∶3、氯氰菊酯∶辛硫磷1∶4和氟蟲腈∶辛硫磷0.5∶1.5等3個混配組合，增效比值分別為250、217和225，均達到顯著增效水平，辛硫磷∶樂果1∶1為相加作用，CTC為108；其余12個混配劑共毒系數(shù)為151～192，表現(xiàn)為增效作用。

表5　農(nóng)藥混配劑的增效測定結(jié)果

3　討論

3.1農(nóng)業(yè)害蟲抗藥性與敏感蟲群

上世紀80年代，由于六六六、DDT等有機氯農(nóng)藥的半衰期長，導(dǎo)致長期滯留于土壤中，造成對環(huán)境和人體的嚴重傷害，我國于1983年全面禁止了有機氯農(nóng)藥的生產(chǎn)、銷售和使用。于是防治甘蔗土棲害蟲的有機氯農(nóng)藥逐步被甲基異柳磷、甲拌磷、克百威等高毒有機磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥取代。由于這類農(nóng)藥均為顆粒產(chǎn)品，成本低、防效好，使用方便，一經(jīng)推出，深受農(nóng)民的喜愛。同時，由于當(dāng)時農(nóng)藥品種少，單一用藥的情況極為普遍。特別是當(dāng)時的甘蔗重點產(chǎn)區(qū)珠三角地區(qū)，由于土棲害蟲發(fā)生面廣，為害嚴重，成為當(dāng)時新農(nóng)藥先行先試的重要區(qū)域。不過，隨著時間的推移，到上世紀80年代末，已有蔗農(nóng)反映這些藥劑的藥效明顯下降，追加用量后，防效仍不理想。

對于農(nóng)業(yè)害蟲來說，當(dāng)抗性蟲群的半致死劑量（LD50或 LC50）比敏感蟲群提高2倍以上時，一般認為已產(chǎn)生了抗藥性。因此，在抗性研究中，敏感基線是研究抗性、評價抗性發(fā)展水平的依據(jù)，而獲得敏感蟲群是建立敏感基線的基礎(chǔ)。一個地區(qū)的種群能否作為敏感蟲群，取決于該種群對殺蟲劑的敏感度［6］。目前敏感蟲群多數(shù)通過室內(nèi)培養(yǎng)多代后獲得。由于土棲害蟲很難在室內(nèi)長期飼養(yǎng)，因而本文中相對敏感蟲群是作者由施藥水平較低的地區(qū)采集蟲源，并通過一定探測手段證明對常用藥劑相對敏感而獲得。

3.2甘蔗土棲害蟲抗藥性發(fā)展與周期性暴發(fā)為害的關(guān)系

20多年來對突背犀金龜抗性跟蹤監(jiān)測的結(jié)果，證明了該蟲對幾種常用藥劑已產(chǎn)生了明顯的抗性，且隨時間的推移，抗性不斷上升。根據(jù)對3個地區(qū)蟲源的抗性監(jiān)測，突背犀金龜對辛硫磷、甲基異柳磷、甲拌磷、毒死蜱等有機磷農(nóng)藥的抗性在2～7倍，對克百威的抗性在3～12倍。需要特別關(guān)注的是：甘蔗突背犀金龜對特丁硫磷和毒死蜱的抗性問題。特丁硫磷從1996年上市到2009年的13年間，抗性上升了119倍。另外，在1991年的抗性監(jiān)測中，林丹（γ-BHC）在停用近10年后，甘蔗突背犀金龜仍對該藥劑具有2～5倍的抗性；氰戊菊酯在防治土棲害蟲上應(yīng)用并不普遍，但卻表現(xiàn)出較高的抗性水平，達到9～15倍，說明氰戊菊酯與其他藥劑之間存在交互抗性問題。

依據(jù)對突背犀金龜抗性研究的結(jié)果以及抗性進化理論，可以推斷：由于甘蔗土棲害蟲防治均以克百威、甲拌磷、甲基異柳磷等高毒農(nóng)藥為主，長期大面積單一用藥以及超量用藥甚至濫用，對其他土棲害蟲所產(chǎn)生的選擇壓力是同等的，因而其抗性的進化和發(fā)展亦真實存在著。也許其整體抗性水平并不高，但從土棲害蟲為害習(xí)性、用藥方法、用藥習(xí)慣和用藥成本來講，其抗性的產(chǎn)生與發(fā)展，對于農(nóng)藥用量、防治效果和用藥成本等影響深遠。例如，克百威在上世紀80年代中期推出時，用量僅為30～45 kg/hm2，到上世紀90年代，不少蔗區(qū)用量已增至60～90 kg/hm2，到本世紀初，用量更增加到105～150 kg/hm2，并且防效仍不理想。特丁硫磷1995年剛推出時，用量為30～40 kg/hm2，到本世紀初，不少蔗區(qū)用量已增加到150 kg/hm2左右，用量翻了4～5倍，而防效僅為原先防效的1/2，甚至根本無效。這不僅對新農(nóng)藥的研發(fā)和推廣增加了困難，也大幅度提高了農(nóng)民的種蔗成本，影響農(nóng)民的收入，挫傷農(nóng)民種蔗的積極性。抗性倍數(shù)關(guān)系雖不能直接等同于生產(chǎn)上實際用藥的倍量關(guān)系，但作者調(diào)查所反映出的用藥量與防治效果嚴重不對等問題，確是與當(dāng)?shù)睾οx抗性水平直接相關(guān)的。抗藥性的產(chǎn)生伴隨著農(nóng)藥防治效果的下降，導(dǎo)致害蟲蟲口的逐年累積，當(dāng)種群密度累積到一定數(shù)量時便會形成暴發(fā)性為害。甘蔗土棲害蟲種群數(shù)量變動都會因一種或幾種新農(nóng)藥的大面積推廣應(yīng)用而被遏制，又會因害蟲抗性的產(chǎn)生與發(fā)展，藥效下降而上升，形成周期性暴發(fā)為害。

從甘蔗土棲害蟲防治現(xiàn)狀和技術(shù)發(fā)展來看，化學(xué)防治在今后一段時間內(nèi)，仍然是最簡便、最經(jīng)濟有效、應(yīng)急能力最強的手段。因此，加快新農(nóng)藥研發(fā)和開展農(nóng)藥混配，加強害蟲抗性治理研究，是有效遏制甘蔗土棲害蟲周期性暴發(fā)為害的最重要措施之一。

3.3新農(nóng)藥篩選與農(nóng)藥混配的意義及應(yīng)注意的問題

針對甘蔗土棲害蟲抗性問題，從上世紀 90年起，作者一直致力于從新農(nóng)藥的篩選和農(nóng)藥混配研究著手，探索治理甘蔗土棲害蟲抗性的途徑。并隨著時代的進步與我國農(nóng)藥政策的調(diào)整，與時俱進，不斷調(diào)整研究思路和研究方向。上世紀 90年代中期，由于甘蔗土棲害蟲對甲基異柳磷、克百威、甲拌磷等殺蟲劑的抗性發(fā)展很快，土棲害蟲為害加重針對當(dāng)時蔗糖產(chǎn)業(yè)的迫切需求，通過農(nóng)藥篩選和混配研究，于 1995年推出了特丁硫磷、樂果·辛硫磷（辛·樂）等藥劑及配方，并加快試驗推廣，到1997年甘蔗土棲害蟲為害的勢頭得到控制［7］。進入本世紀后，由于高毒農(nóng)藥對環(huán)境和人類健康的負面影響，我國政府調(diào)整了農(nóng)藥政策，制定了限用禁用高毒農(nóng)藥的時間表。作者也在2005年開始了甘蔗土棲害蟲高毒農(nóng)藥替代研究工作，篩選出了一批低毒、高效農(nóng)藥化合物和農(nóng)藥混配劑。近年來，在新煙堿類農(nóng)藥篩選、應(yīng)用于甘蔗土棲害蟲方面取得較好的進展一批新農(nóng)藥、新配方正在加快研制和推廣。經(jīng)過大量的研究工作，已從100多種農(nóng)藥化合物和300多個混配配方中篩選出針對甘蔗土棲害蟲的新農(nóng)藥化合物6大類共17種，具有增效作用的混配組合15個（見表4和表5）。

不過，在新農(nóng)藥篩選和混配研究方面，應(yīng)重點注意下列幾個問題。

3.3.1農(nóng)藥室內(nèi)毒力與田間藥效之間的關(guān)系

室內(nèi)毒力測定是在可控條件下的測定，屏蔽了環(huán)境因素如光、土壤、水分等因素對藥劑有效成分的直接影響，充分反映藥物與靶標之間的關(guān)系，且本實驗中采用微量點滴法其結(jié)果也主要體現(xiàn)為農(nóng)藥的觸殺毒力。對于土棲害蟲來講，必須觀察農(nóng)藥在土壤中的表現(xiàn)，因而還必須進行室內(nèi)土壤毒力測定、田間藥效試驗，才能反映藥劑對甘蔗土棲害蟲的真實效果。因此，為節(jié)省時間，先進行室內(nèi)篩選，從大量備選材料中遴選出對土棲害蟲高活性的化合物，將高活性的化合物再在室內(nèi)通過土壤毒力測定，淘汰一批受土壤條件影響較大的材料，最后將保留的材料經(jīng)由田間試驗驗證，得到效果可靠的產(chǎn)品。因而，對于土棲害蟲來說，一個稱之為好的產(chǎn)品或配方，需經(jīng)過3個重要步驟的嚴格篩選和驗證：室內(nèi)生測、土壤毒力測定和田間藥效試驗。

3.3.2抗性治理與新農(nóng)藥篩選

害蟲抗性的進化與發(fā)展，根源在于農(nóng)藥的定向選擇和不斷追加用量和用藥次數(shù)。因此，必須不斷篩選新的農(nóng)藥化合物，以替代原有的藥劑，停用已產(chǎn)生抗性的藥劑，有效遏制害蟲的抗性。但依據(jù)抗性進化理論，在新農(nóng)藥引入的同時也已引入新的選擇劑，藥劑的抗性風(fēng)險依然存在。為延緩害蟲抗性產(chǎn)生，延長新農(nóng)藥的使用壽命，必須嚴格限制藥劑的使用量和使用次數(shù)，注意與其他藥劑特別是不同作用機制的藥劑輪換使用。

3.3.3抗性治理與農(nóng)藥混配

農(nóng)藥混配是抗性治理的一個重要措施，也是增加品種和制劑加工的重要手段之一。根據(jù)農(nóng)藥混配理論，農(nóng)藥混配的聯(lián)合作用機制存在3種不同的反應(yīng)類型：拮抗、相加和增效。拮抗作用即2種或 2種以上藥劑相混時，效果不增反降的現(xiàn)象，在農(nóng)藥混配中應(yīng)絕對摒棄；相加作用即在藥劑混配時的效果等于各自單用時相加的效果。這一混配形式可根據(jù)生產(chǎn)的需要酌情加以利用。如通過混配能降低成本、降低人工，擴大殺蟲譜，這種混配也可以采用，否則應(yīng)舍棄。增效作用即2種或2種以上藥劑通過混配，可產(chǎn)生互作增效的效果。混配后不但可減少用量，降低成本，提高防治效果，還有利用延緩和遏制抗性的發(fā)展。因此，在藥劑混配時應(yīng)積極提倡這類混配。農(nóng)藥混配應(yīng)盡量選擇不同作用機理的藥劑之間的混配，特別是害蟲已產(chǎn)生較高抗性的農(nóng)藥與另一種無交互抗性的藥劑之間混配，往往能獲得增效效果。表5中有不少這樣的例子。不過也有例外，在表5中亦有幾種相同機理的農(nóng)藥之間混配具有增效作用的例子，其原因可能是同類型中不同藥劑的解毒酶不同，相混后產(chǎn)生互作增效作用。另外，在樂果∶辛硫磷2∶3配方，聯(lián)合反應(yīng)為顯著增效作用，這與樂果在環(huán)境中可通過氧化作用產(chǎn)生氧化樂果，對昆蟲的毒性更高；與此同時，辛硫磷擊倒性強，極易在環(huán)境中被氧化導(dǎo)致失效，樂果的存在可能對辛硫磷的降解有一定的抑制作用。

3.4土棲害蟲新農(nóng)藥與混配配方篩選方法

在土棲害蟲藥劑篩選過程中，由于土壤因素的作用，室內(nèi)生測表現(xiàn)活性很高的藥劑在田間藥效試驗中可能效果不佳甚至出現(xiàn)相反結(jié)果，即室內(nèi)生測試驗結(jié)果不能真實反映藥劑的實際效果，導(dǎo)致篩選的盲目性和實驗工作量大。針對這個問題，筆者經(jīng)過多年的試驗總結(jié)，建立了一套既快速又經(jīng)濟有效的土棲害蟲新化合物及藥劑混配的高效篩選方法：

第一步，分析和解讀農(nóng)藥化合物理化性質(zhì)，有針對性地選擇測定的化合物；

第二步，快速淘汰法。以死亡率（％）為標準，通過與標準藥劑的比較，淘汰低活性的化合物（新化合物篩選），或?qū)⒒炫浣M合和不同配方，以總有效體等量法則，配制2～3個濃度，以死亡率為評判標準，進行測定，淘汰低效甚至無效配方；

第三步，室內(nèi)生測試驗。采用點滴法或浸潰法進行毒力（LD50或LC50）和共毒系數(shù)（CTC）測定，進一步確定藥劑的毒力和聯(lián)合反應(yīng)類型，淘汰活性低或拮抗反應(yīng)的藥劑及配方組合；

第四步，室內(nèi)土壤毒力測試法。將藥劑配制成系列濃度施于土壤中，測定藥劑在土壤中對土棲害蟲的活性，淘汰低活性的材料；

第五步，田間篩選和藥效試驗。選擇5～8個藥劑或配方組合進行田間篩選試驗，了解藥劑對不同土壤條件的適應(yīng)性。并最終選定1～2個藥劑進行大田藥效試驗和產(chǎn)業(yè)化研究。

3.5害蟲抗藥性的綜合治理

就甘蔗土棲害蟲而言，目前及今后的一段時間內(nèi)，化學(xué)防治仍是一種有效的、不可替代的重要防控技術(shù)措施之一。但過分依賴化學(xué)防治，不僅導(dǎo)致害蟲抗性的快速發(fā)展，使農(nóng)藥的研發(fā)和應(yīng)用面臨困境，而且對生態(tài)環(huán)境和人類生存健康產(chǎn)生不利影響。因此，在甘蔗土棲害蟲防治策略上，應(yīng)以農(nóng)藥為主要應(yīng)急措施，同時，加大力度，開展諸如農(nóng)業(yè)防治、生物防治、誘殺技術(shù)、生態(tài)防控等技術(shù)的攻關(guān)，以減輕害蟲防治的壓力。只有在以其他防控措施保障有效控制土棲害蟲危害的基礎(chǔ)上，有效減少農(nóng)藥用量，降低人們對農(nóng)藥的依賴心理，才能從根本上有效地解決害蟲抗藥性問題。

［1］何秀玲.害蟲抗藥性研究與治理狀況概述［J］.世界農(nóng)藥，2013，35（5）：34-28.

［2］張帥.我國農(nóng)業(yè)病蟲害抗藥性發(fā)展現(xiàn)狀與對策［EB/OL］.（2015-10-27）［2016-08-10］.http://www.agroinfo.com.cn/ other_detail_2109.html.

［3］何月平，沈晉良.害蟲抗藥性進化的遺傳起源與分子機制［J］.昆蟲知識，2008，45（2）：175-180.

［4］龔恒亮，安玉興.中國糖料作物地下害蟲［M］.廣州：暨南大學(xué)出版社，2009：10-23.

［5］龔恒亮，李金玉.甘蔗黑色蔗龜Alissonotum impressicolle Arrow抗藥性研究初報［J］.甘蔗糖業(yè)，1992（2）：7-13.

［6］陳長琨，李秀峰，韓召軍，等.二化螟抗藥性監(jiān)測方法及相對敏感基線［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2000，23（4）25-28.

［7］龔恒亮，劉玉彩，李金玉，等.5％特丁磷顆粒劑（地蟲靈）防治甘蔗地下害蟲試驗研究［J］.甘蔗糖業(yè)，1998（6）20-23.

（本篇責(zé)任編校：李金玉）

Monitoring and Management of Insecticide Resistance in Alissonotum impressicolle Arrow

GONG Heng-liang，SUN Dong-lei，CHEN Li-jun，ZHAO Huan-huan，AN Yu-xing
（Guangzhou Sugarcane Industry Research Institute/Guangdong Key Lab of Sugarcane Improvement & Biorefinery，Guangzhou 510316）

This paper reported monitoring results of insecticide resistance in Alissonotum impressicolle Arrow （a sugarcane underground pest）.According to the comparison between 3 instar of Rf strain from Fengjian （Xunde county，Guangdong Province），Rh strain from Hongqi Farm （Zhanjiang，Guangdong Province） and Rc strain from Chongzuo （Guangxi Province） and sensitivity base-line，the resistance values of Rf strain in 1991 against phoxim，monocrotophos，carbofuran，fenvalerate，gamma-BHC were 3.3，2.0，3.3，14.8，5.0 respectively； that of the Rh strain against isofenphos-methyl，fenvalerate，gamma-BHC were 3.0，8.9，2.4 respectively.In 1996，the resistance values of Rh strain against phoxim，isofenphos-methyl，phorate，carbofuran were 2.0，6.0，3.8 and 11.5 respectively.By comparison to monitoring results of 1991，resistance values of Rh strain againstisofenphos-methyl，carbofuran，phoxim，phorate rose 3.0，9.6，2.0 and 2.7，respectively.In 2009，the resistance values of Rc strain against phoxim，chlorpyrifos，terbufos and carbofuran were 2.2，6.5，119.1 and 6.4.In the aspect of management of insecticide resistance，we have found 10 new insecticides with better bioactivity than that of the control，bioactivity of 5 neonicotionoids were particularly good.In the research of pesticide mixing，CTC of 15 mixtures were greater than 150.The author also presented a rapid，efficient screening method of insecticide on underground insect pests of sugarcane.It is suggested that，to resolve radically the problem of resistance to insecticide，the dosage and dependence of insecticide should be reduced，and comprehensive management of resistance to insecticide should be employed.

Sugarcane； Soil pests； Monitoring and management； Pesticide screening and mixing

S566.1

A

1005-9695（2016）04-0023-09

2016-08-01；

2016-08-25

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)甘蔗產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項目（CARS-20-2-1）；廣東省省級科技計劃項目（2014B070706005、2013B020503052）

龔恒亮（1959-），男，高級農(nóng)藝師；E-mail：ghl59505@163.com

安玉興（1970-），男，研究員；E-mail：yanxing888@126.com

龔恒亮，孫東磊，陳立君，等.甘蔗土棲害蟲Alissonotum impressicolle Arrow抗藥性監(jiān)測與抗性治理［J］.甘蔗糖業(yè)，2016（4）：23-31.