梁青青，黃月圓，李錫明，黃鎖義，鐘兆銀

(1.右江民族醫(yī)學院 臨床學院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學院 基礎(chǔ)醫(yī)學院，廣西 百色533000；3.右江民族醫(yī)學院 藥學院，廣西 百色 533000;4.右江流域特色民族藥研究廣西高校重點實驗室，廣西 百色 533000)

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雞骨草莖多糖含量測定

梁青青1，黃月圓2，李錫明1，黃鎖義3,4*，鐘兆銀3，4

(1.右江民族醫(yī)學院 臨床學院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學院 基礎(chǔ)醫(yī)學院，廣西 百色533000；3.右江民族醫(yī)學院 藥學院，廣西 百色 533000;4.右江流域特色民族藥研究廣西高校重點實驗室，廣西 百色 533000)

目的: 提取雞骨草莖中的多糖，并對其含量進行測定。方法: 利用水提醇沉淀法提取多糖，用葡萄糖標準品繪制標準曲線，利用苯酚-硫酸法測定雞骨草莖的多糖含量。結(jié)果：回歸方程為：y=0.1175x-0.026 7，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7，雞骨草莖多糖含量為1.534%，平均回收率為98.16%，RSD=0.4623%(n=5)。結(jié)論: 苯酚-硫酸法具有簡單、快速、準確可靠等優(yōu)點；提取雞骨草莖的多糖并對其含量進行測定，為雞骨草的進一步開發(fā)利用提供了依據(jù)。

雞骨草莖；多糖提??；含量測定；苯酚-硫酸法

植物多糖是植物體內(nèi)廣泛存在的生物活性物質(zhì)，除具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、抗病毒、降血脂等生物活性外，還具有清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗疲勞作用[1-2], 近年來對植物多糖的研究已經(jīng)成為一個熱點，對于多糖抗氧化活性的研究大多以粗多糖為主[3]。

雞骨草(Abruscantoniensis)，常用異名有黃頭草、大黃草，為豆科植物廣東相思子的全草。味甘、味苦、性涼，具有清熱利濕、散瘀止痛的功效，主要生長于山地或曠野灌木林邊。其植株含有相思豆堿、皂苷、黃酮苷、膽堿、甾醇、氨基酸、糖類化合物等化學成分。雞骨草廣泛分布于南方各省區(qū)，在春夏潮濕季節(jié)常用雞骨草煲湯作為藥膳食療[4]。并且廣泛用于黃疽,脅肋不舒,胃骯脹痛,急、慢性肝炎[5]，廣西是雞骨草的主要產(chǎn)區(qū)[6]。本文用水提醇沉淀法提取雞骨草莖中的多糖，并采用苯酚-硫酸法測定雞骨草莖的多糖含量，為我們廣西雞骨草資源的進一步開發(fā)提供理論依據(jù)。

1　實驗材料與試劑

1.1原料

雞骨草莖購自廣西百色市右江區(qū)，烘干粉碎備用。

1.2試劑

95%乙醇(AR)，無水乙醇(AR)，乙醚(AR)，苯酚(AR)，濃硫酸(AR)，葡萄糖標準品(成都科龍化工試劑廠，批號20041102)。

1.3儀器設(shè)備

FA1004電子天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司)；臺式連續(xù)投料粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)；722N型紫外可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)；DHG-9070A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)；HH-S4數(shù)顯恒溫水浴箱(上海上登實驗設(shè)備有限公司)。

2　結(jié)果分析

2.1雞骨草莖多糖提取

精確稱取雞骨草莖粉末15 g，分成3份，放入200 mL的燒杯中，分別加入水100 mL，將其放在65 ℃的恒溫水浴鍋3 h，抽濾用500 mL的燒杯收集濾液，用相同的方法重復提取3次，合并3次濾液，用恒溫水浴鍋加熱至98 ℃濃縮至32 mL，冷卻至室溫，加95%已醇90 mL，背光靜置24 h后，抽濾，分出沉淀物依次用無水乙醇和乙醚洗兩次，得到雞骨草莖多糖固體0.186 g。

2.25%苯酚溶液的配制

量取12.5 mL苯酚，置于250 mL的容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，得5.0%的苯酚溶液。

2.3葡萄糖對照品溶液的配制

精密稱取干燥葡萄糖標準品0.040 g，置于100 mL的容量瓶中，定容，搖勻，得0.4 mg/mL的葡萄糖對照液。

2.4 標準曲線的制備

分別量取葡萄糖對照液2、4、6、8、10 mL，并加入到100 mL的5個容量品中,定容,搖勻,得到0.016 mg/mL,0.032 mg/mL,0.048 mg/mL，0.064 mg/mL，0.080 mg/mL的不同濃度的對照品溶液，精確量取1.0 mL置于50 mL的容量瓶中，再分別加入5%的苯酚溶液1.5 mL，再加入7.5 mL濃硫酸，搖勻室溫靜置30 min。用722N型可見分光光度計，在484 nm處測量吸光度，以對照品濃度C為縱坐標，吸光度A為橫坐標做標準曲線。建立回歸方程(表1)。

表1　紫外線可見分光光度計測定葡萄糖對照液吸光度

根據(jù)表1得回歸方程：C=0.117 5A-0.026 7，

r=0.999 7。

2.5雞骨草莖多糖含量測定

精確稱取0.010 g的雞骨草莖多糖置于100 mL的燒杯中，加入1 mol/L H2SO42 mL加熱水解2 h，冷卻至室溫，將其轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中，定容，搖勻，得到供試樣品溶液，按照繪制標準曲線的方法，稱取5.0mL的樣品溶液分別置于5個50 mL的燒杯中，先后加入1.5 mL的苯酚溶液，再加入7.5 mL的濃硫酸溶液，混合均勻后放置20 min，用722N型可見分光光度計在484 nm處測量吸光度值，由回歸方程可以計算雞骨草莖多糖的含量，其測量結(jié)果如表2：

表2　紫外線可見分光光度計平行測定雞骨草莖

由回歸方程及表2計算得出雞骨草莖多糖含量為：1.534%。

2.6回收率的測定

精確稱取0.010 g的雞骨草莖多糖置于100 mL的燒杯中，加入1 mol/L H2SO42 mL加熱水解2 h，冷卻至室溫，將其轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中，定容，搖勻。按照“2.4”方法，往不同濃度的對照品系列溶液中，分別加入0.1 mL上述溶液進行糖含量的測定，得到平均回收率98.16%，RSD=0.4623%(n=5)

3　結(jié)果和討論

3.1隨著對多糖生物活性的深入研究，多糖的生物活性機理，功效因子會更加明顯，它的應(yīng)用領(lǐng)域也將會更加擴寬[7]。

3.2多糖是強極性分子，據(jù)其溶于水而不溶于有機溶劑的特點，采用水提醇沉法提取，防止引起糖苷鍵的斷裂[8]。

3.3本實驗采用水提醇沉淀法及苯酚-硫酸法對雞骨草莖多糖含量進行提取和測定，使用722N型可見分光光度計在484 nm處測量吸光度值。該實驗結(jié)果顯示雞骨草莖多糖的含量為1.534%，平均回收率為98.16%,RSD=0.4623%(n=5)。

3.4苯酚-硫酸法顯色穩(wěn)定，精密準確，重現(xiàn)性好，且靈敏度顯著提高，這有利于低密度供試品溶度的分析，擴大了可分析的樣品范圍[9]，該方法可用于雞骨草莖多糖含量的測定。

[1]謝好貴,陳美珍,張玉強.多糖抗腫瘤構(gòu)效關(guān)系及其機制研究進展[J].食品科學,2011,32(11):329-333.

[2]何余堂,潘孝明.植物多糖的結(jié)構(gòu)與活性研究進展[J].食品科學,2010,31(17):493-496.

[3]譚冰,嚴煥寧,黃鎖義,等.廣西壯藥雞骨草多糖的提取及對羥自由基清除作用的研究[J].檢驗醫(yī)學教育,2011,18(4):36-39.

[4]李榮,黃秋妹,李子行. 淺談雞骨草的藥理作用[J].首都醫(yī)藥，2013(10):20.

[5]國家藥典委員會.中國藥典：一部[S].北京:化學工業(yè)出版社,2005:135.

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Determination of the Content of Polysaccharide Extract of Stems ofAbruscantoniensis

Liang Qingqing1，Huang Yueyuan2，Li Ximing1，Huang Suoyi3,4*，Zhong Zhaoyin3,4

(1.College of Clinical Medicine, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000,China; 2.College of Basic Medicine, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000,China; 3.College of Pharmacy, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000,China; 4.Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of the Characteristics of Ethnic Medicine of the Youjiang Valley, Baise 533000, China)

Objective: To extract polysaccharides from stems ofAbruscantoniensisand determine its content. Methods: Using water extraction and alcohol precipitation method to extract polysaccharide, drawing standard curve with glucose sugar standard products, and using phenol-sulfuric acid method to determine polysaccharide content of stems ofAbruscantoniensis. Results: regression equation:y=0.117 5x-0.026 7, correlation coefficientr=0.999 7, polysaccharide content of stems ofAbruscantoniensisis 1.534%, average recovery is 98.16%, RSD=0.4623% (n=5) .Conclusion: Phenol-sulfuric acid method is simple, fast, accurate, reliable; polysaccharides from stems ofAbruscantoniensiswere extracted and determined, and the study provided scientific basis for further development and utilization of stems ofAbruscantoniensis.

stems ofAbruscantoniensis; extraction of polysaccharide; determination of content; phenol-sulfuric acid method

10.3969/j.issn.1006-9690.2016.04.011

2016-01-08

國家中醫(yī)藥管理局“十二五”中醫(yī)藥重點學科中藥化學學科建設(shè)項目(國中醫(yī)藥人教發(fā)[2012]32號)；廣西自然科學基金資助項目(2013GXNSFAA019240);廣西重點學科藥物化學學科建設(shè)項目(桂教科研[2013]16號)；2016年自治區(qū)級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(201610599043)。

梁青青(1993—)女，本科在讀，主要研究方向：天然產(chǎn)物化學、藥物化學、食品衛(wèi)生。E-mail:787077792@qq.com

黃鎖義(1964—)，男，教授，碩士生導師，主要從事天然藥物化學、中藥化學、藥物分析及食品衛(wèi)生等研究工作。

E-mail:huangsuoyi@163.com

R284.1

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1006-9690(2016)04-0040-03