閆瑞，楊印軍，劉紅衛(wèi)，李曉妮，郭寶林*

(1.山西醫(yī)科大學 藥學院，山西 太原 030001；2.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京 100193；3.成都天地網(wǎng)信息科技有限公司，四川 成都 610000)

“搶青”采摘對青翹中連翹酯苷A和連翹苷含量的影響

閆瑞1，2，楊印軍2，劉紅衛(wèi)3，李曉妮1*，郭寶林2*

(1.山西醫(yī)科大學 藥學院，山西 太原 030001；2.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京 100193；3.成都天地網(wǎng)信息科技有限公司，四川 成都 610000)

目的：比較“搶青”采收(早于正常采收期的尚未成熟的果實)和正常采收早期采收的青翹中連翹酯苷A和連翹苷的含量差異。方法：采集了12個連翹主產(chǎn)地搶青采收和正常采收早期的青翹對應樣品，采用高效液相色譜法測定其中連翹酯苷A和連翹苷的含量。結果：12組樣品中，除個別組，搶青期的幼果中連翹酯苷A和連翹苷的含量高于正常采收早期，搶青采收期的連翹酯苷A和連翹苷的含量平均分別是正常采收早期的1.32倍和1.42倍。結論：搶青采收的連翹幼果中連翹酯苷A和連翹苷等成分含量高，高含量的功效意義值得關注。搶青采收對青翹產(chǎn)量影響巨大，應減少搶青采收對連翹野生資源的影響。

連翹；連翹酯苷A；連翹苷；高效液相色譜；含量測定；“搶青”期

連翹來源于木犀科植物連翹Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實。秋季果實初熟尚帶綠色時采收，稱“青翹”；果實熟透時采收，稱“老翹”或“黃翹”[1]，成藥生產(chǎn)使用以青翹為主。雖然連翹栽培技術成熟，為常見園藝物種，但藥材資源幾乎均來自于野生，野生資源集中分布于山西南部、河南西北部、陜西東南部[2]，全國年產(chǎn)量和需求量約7000～8000 t，正常年份一般能夠滿足需求。但是連翹是早春開花植物，盛花期為3月中旬至4月下旬，此時如遇倒春寒，對連翹的產(chǎn)量影響很大，嚴重時可減產(chǎn)70%～80%；另外春夏天旱也會導致減產(chǎn)，最差時可減產(chǎn)30%～50%；花期連雨也會減產(chǎn)，但是產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)較少。如果花期平順，春夏雨水充沛，又可增產(chǎn)30%～40%，因此連翹的產(chǎn)量受到天氣變化的影響較大。當連翹上年欠收導致短缺而漲價后，次年產(chǎn)新時就會出現(xiàn)嚴重的“搶青”現(xiàn)象，即未到合理采摘期(8月上旬至9月上旬)，從6月中旬就開始大規(guī)模搶青采收。一般平常年份老百姓為了搶奪野生資源，也存在搶青問題，但規(guī)模不大。而且隨著近些年需求的增加，自然資源產(chǎn)量和需求矛盾也逐漸顯現(xiàn)，搶青導致減產(chǎn)，減產(chǎn)又激發(fā)搶青，使連翹采收進入了可怕的惡性循環(huán)。2015年是在2013、2014年連續(xù)倒春寒后的豐產(chǎn)年份，搶青的青翹量高達青翹總產(chǎn)量的30%以上，經(jīng)對采收的樣品測算，搶青的果實千粒重平均為成熟果實千粒重的26%，因此搶青導致了人為減產(chǎn)與資源浪費。本文作者之一劉紅衛(wèi)在2015年的連翹采收期對連翹產(chǎn)區(qū)進行了全面的調(diào)查，采集了主產(chǎn)區(qū)12個產(chǎn)地搶青期(6月10日—7月20日)和正常采收早期(7月21日—9月10日)的對應樣品，共24份。因為連翹酯苷A和連翹苷是連翹的有效成分，一方面是連翹的高含量成分，另一方面連翹酯苷A具有抗病毒[3]、抗菌[4]和抗氧化[5]等作用；連翹苷具有降血脂、抗氧化[6]、抗病毒[7]、抗細胞損傷[8]等作用。這些功效與連翹具有清熱解毒、消癰散結的藥理作用有一定的關系。本文對24份連翹樣品中的連翹酯苷A和連翹苷進行了含量檢測，以探討搶青采收對藥材質(zhì)量的影響。

1 材料與試劑

1.1 儀器

珀金埃爾默HPLC儀器(Flexar PDA LC Detector，Totalchrom色譜工作站)；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；GZX-9070MBE數(shù)顯鼓風干燥箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)；十萬分之一電子天平(瑞士MettlerToledo公司)；萬分之一天平(上海精密科學儀器有限公司)。

1.2 材料

連翹酯苷A對照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批號：MUST-15010513，純度為98.65%)，連翹苷(成都曼斯特生物科技有限公司，批號：MUST-15031010，純度為99.24%)。青翹樣品信息見表1和圖1。

1.3 試劑

甲醇(北京化工廠)；乙腈(Fisher)；娃哈哈純凈水；磷酸(西隴化工有限公司)；乙腈(Fisher)。

表1 各地青翹樣品的采收期及千粒重

圖1 不同采收時期的青翹樣品圖

2 方法

2.1 色譜條件

Agela C18(250 nm×4.6 nm，5 μm)；流動相：乙腈(A)和0.2%磷酸水(B)，梯度洗脫(0 min，19% A；4 min，20% A；8 min，26% A；10 min，35% A；15 min，45% A)；流速：1.0 L·min-1；柱溫：室溫；進樣量：10 μL，連翹酯苷A檢測波長：330 nm，連翹苷檢測波長：277 nm。

2.2 對照品溶液的制備

取連翹酯苷A、連翹苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為1.200、0.262 mg·mL-1的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取烘干的連翹藥材粉末(過五號篩)約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min(功率250 W，頻率40 kHz)，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察 分別精密稱取連翹酯苷A和連翹苷對照品1.200 mg和0.262 mg置1 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，為母液，再分別稀釋成0.600、0.300、0.150、0.075、0.038 mg·mL-1和0.131、0.066、0.033、0.017 mg·mL-1，按照2.1色譜條件項下進行測定，進樣體積：10 μL。以濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸，連翹酯苷A回歸方程為：Y=7×106X+119 493(r=0.999 3)；連翹苷回歸方程為Y=4×106X-28 115(r=0.999 1)。結果表明連翹酯苷A和連翹苷質(zhì)量濃度分別在1.200～0.038和0.262～0.017 mg·mL-1線性關系良好。

2.4.2 精密度試驗 分別取連翹酯苷A和連翹苷對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次10 μL。結果連翹酯苷A和連翹苷的峰面積的RSD分別為0.26%、0.13%，表示儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液(編號：8B)于0、2、6、8、12、24 h進樣，記錄其峰面積。結果連翹酯苷A、連翹苷質(zhì)量分數(shù)的RSD分別為0.11%、0.31%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復性試驗 取同一批號樣品(編號：12B)，按供試品溶液的制備方法平行制備6份，進樣測定，記錄峰面積，結果連翹酯苷A和連翹苷質(zhì)量分數(shù)的RSD分別為0.18%、1.13%，說明該方法重復性良好。

2.4.5加樣回收率試驗 精密稱取12份樣品(編號：3A)，分別加入連翹酯苷A和連翹苷對照品，按樣品制備方法制得供試品溶液，平行制備6份溶液，進樣測定，結果見表2。

2.5 樣品測定

采用上述方法對連翹藥材樣品進行含量測定，結果見表3。其中對照品和樣品的液相色譜圖見圖2。

表2 青翹中連翹酯苷A和連翹苷的加樣回收率

表3 不同采摘時期青翹中連翹酯苷A和連翹苷的含量測定 (%)

注：A.對照品；B.供試品；1.連翹酯苷A；2.連翹苷。圖2 對照品和青翹樣品的HPLC圖(277 nm)

3 討論

本實驗考察了70%和100%的甲醇超聲提取連翹樣品的主要成分，100%甲醇提取更完全。本實驗也考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-醋酸水3種流動相體系，結果表明乙腈-醋酸水分離效果最好。乙腈-0.2%醋酸水時連翹酯苷A和連翹苷梯度洗脫分離度分別達到1.5，因此選擇乙腈-0.2%醋酸水作為流動相。

總體來說，連翹酯苷A和連翹苷的含量表現(xiàn)為搶青期含量高于正常采收早期，也就是幼果含量高于近成熟果實。如今市場流通中將幼果摻入以提高指標成分的含量也是行業(yè)的常見手法。12份搶青采收期的連翹酯苷A和連翹苷的含量均值分別是12份正常采收早期的連翹酯苷A和連翹苷的含量均值的1.32倍和1.42倍，但是12份正常采收早期的連翹千粒重的均值是12份搶青采收期的連翹千粒重均值的3.8倍。搶青采收對青翹產(chǎn)量的影響巨大，應減少搶青采收對連翹野生資源的影響。在12組樣品中只有2組樣品(山西陵川和河南洛寧)搶青期連翹酯苷A的含量低于正常采收早期，3組樣品(山西陵川、山西黎城和河南洛寧)搶青連翹苷的含量低于正常采收早期，文獻曾報道連翹酯苷A的含量呈現(xiàn)先升高后降低的變化[9-10]，但本實驗的搶青期早于文獻報道的采收期，另一篇文獻則各樣品的采收時間順序不甚清楚[11]，因此后期采收除了主要是含量降低外，是否也有含量升高的可能性有待進一步研究。

連翹作為常用的清熱解毒中藥，具有抗炎、抗病毒、抗菌和抗癌等活性[12-14]。木脂類的連翹苷和苯乙苷類的連翹酯苷是連翹的主要成分，也是有效成分之一，但是連翹成分和功效之間的關系尚不很明確[15]，況且老翹中連翹酯苷A和連翹苷的含量更低[11，16-18]，臨床配方老翹的使用比例較高，抗炎活性研究表明老翹較青翹強一些[19]，因此尚不能認為搶青采收的幼果質(zhì)量更好，有待進一步比較和評價。

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EffectofEarlierPeriodHarvestonContentofForsythosideAandPhillyrinofForsythiaeFructus

YAN Rui1，2，YANGYinjun2，LIUHongwei3，LIXiaoni1*，GUOBaolin2*

(1.CollegeofPharmacy，ShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001，China；2.InstituteofMateriaMedica，ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China；3.ChengduTiandiwangMdtInfoTechLtd，Chengdu610000，China)

Objective：To compare the content of forsythoside A and phillyrin of Forsythiae Fructus collected in the earlier period harvest，called ‘Qiang Qing’，andthe earlier than normal period harvest.Methods：24 samples collected from 12 main distribution places ofForsythiasuspensawith conresponding ‘Qiang Qing’ harvest and the earlier than normal period harvest.Forsythoside A and phillyrin content were determined by HPLC.Results：The contents of forsythoside A and phillyrin of the fruits in‘Qiang Qing’period were higher than those with later period harvest in 12 groups of samples，except few groups.The average contents of these two chemicals were 1.32 times and 1.42 times higher，respectively.Conclusion：The significance of the high content of young fruit such as forsythoside A and phillyrin in “Qiang Qing” period should be concerned.‘Qiang Qing’ harvest reduced the yield greatly and should be avoid and cut down.

Forsythiae Fructus；forsythoside A；phillyrin；HPLC；content determination；the earlier period harvest

2015-12-14)

*

李曉妮，教授，碩士生導師，研究方向：中藥復方物質(zhì)基礎及質(zhì)量標準，Tel：(0351)4690114，E-mail：ninili1235@163.com；郭寶林，教授，博士生導師，研究方向：中藥資源鑒定，E-mail：guobaolin010@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.5.008