麥爾耶姆古麗·麥麥提，麥合蘇木·艾克木，麥麥提江·阿依丁， 麥提喀斯木·尼扎木丁，阿不都熱依木·玉蘇甫

(新疆醫(yī)科大學(xué) 維吾爾醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011)

·專題·

異常黑膽質(zhì)成熟劑抗抑郁作用研究△

麥爾耶姆古麗·麥麥提，麥合蘇木·艾克木，麥麥提江·阿依丁， 麥提喀斯木·尼扎木丁，阿不都熱依木·玉蘇甫*

(新疆醫(yī)科大學(xué) 維吾爾醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011)

目的：觀察異常黑膽質(zhì)成熟劑(ASMq)對不同抑郁動物模型行為學(xué)的影響，探討ASMq的抗抑郁作用。方法：采用小鼠強(qiáng)迫游泳、懸尾應(yīng)激、利血平拮抗實驗以及大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型實驗，分別用ASMq低、中、高劑量(小鼠2.0、4.0、8.0 g·kg-1；大鼠1.5、3.0、6.0 g·kg-1)對上述模型進(jìn)行全程干預(yù)，觀察ASMq的抗抑郁作用效果。結(jié)果：ASMq能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動時間(P<0.01)、懸尾不動時間(P<0.01)；具有拮抗利血平所致的體溫下降(P<0.01)、眼瞼下垂(P<0.01)及運動不能(P<0.01)作用，并呈明顯的劑量依賴關(guān)系(P<0.05)；與正常組相比，慢性應(yīng)激抑郁模型組大鼠糖水?dāng)z入量減少,敞箱實驗中水平運動、站立次數(shù)明顯下降，處于抑郁狀態(tài)。ASMq干預(yù)組能夠增加糖水?dāng)z入量、水平運動及站立次數(shù)(P<0.01)。結(jié)論：ASMq能夠改善不同抑郁動物模型的行為學(xué)缺損，具有明顯的抗抑郁作用。

異常黑膽質(zhì)成熟劑；不同抑郁動物模型；抗抑郁作用

抑郁癥(Depression)是以情緒低落、食欲減退、嗜睡、思維遲鈍、語言行為減少為基本特征的一種慢性精神紊亂性疾病，世界范圍1.2億人患有抑郁癥，世界衛(wèi)生組織預(yù)測，在2030年，抑郁癥將成為世界疾病負(fù)擔(dān)的首位[1]。中國有病例記錄抑郁癥患者已超過3000萬，從未就醫(yī)率達(dá)到62.9%，15%死于自殺[2]。維吾爾醫(yī)學(xué)(維醫(yī))認(rèn)為，抑郁癥屬于“麻利胡利亞”范疇，長期大量服用干寒型的飲食、藥物，長期處于情緒低落、憂傷、悲傷、壓抑等情志失常狀態(tài)，長期過度從事腦力和體力勞動，使體內(nèi)正常體液(黑膽質(zhì)、血液質(zhì)、黏液質(zhì)、膽液質(zhì))“燃燒”生成異常黑膽質(zhì)(燒焦黑膽質(zhì)、燒焦血液質(zhì)、燒焦黏液質(zhì)、燒焦膽液質(zhì))，其份量重、質(zhì)地稠，易在神經(jīng)等組織中形成阻塞和沉淀，引起焦慮癥、抑郁癥和衰老等疾病。課題組前期研究中發(fā)現(xiàn)，在抑郁癥的維醫(yī)異常體液分型中異常黑膽質(zhì)型最為常見，異常黑膽質(zhì)證與抑郁癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[3]。異常黑膽質(zhì)成熟劑(ASMq)是異常黑膽質(zhì)證方藥，是預(yù)防和治療異常黑膽質(zhì)型疾病的良藥[4-6]。因此，本實驗通過小鼠強(qiáng)迫游泳、懸尾應(yīng)激、利血平拮抗實驗以及大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型實驗，分別給予不同劑量的ASMq進(jìn)行全程干預(yù)，觀察其對不同抑郁動物模型行為學(xué)影響，探討ASMq的抗抑郁作用，從而為其應(yīng)用和開發(fā)提供參考。

1 材料與儀器

1.1 藥物

異常黑膽質(zhì)成熟劑(新疆奇康哈博維藥有限公司，批號：140922)，鹽酸氟西汀膠囊(禮來蘇州制藥有限公司，批號：4501A，規(guī)格：20 mg)，利血平注射液(天津金耀藥業(yè)有限公司，批號：1501091，規(guī)格：1 mL·mg-1)，蒸餾水(新疆醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心)。

1.2 實驗動物

ICR小鼠，體質(zhì)量18～20 g；SD大鼠，體質(zhì)量240～260 g；均清潔級，雄性，由新疆醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物許可證號：SCXK(新)2011-0001。

1.3 儀器

電子體溫計(DT001)，濾紙(直徑7.5 cm)，電子秤(XS1003S)，秒表，玻璃缸，懸尾裝置(自制)，數(shù)碼攝像機(jī)，足底電擊箱(自制)，止血鉗，水桶，大鼠行為觀察敞箱(自制)。

2 方法

2.1 ASMq對小鼠抑郁動物模型行為學(xué)的影響

2.1.1 分組及給藥 ICR小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只。分別為空白對照組，ASMq低劑量(2.0 g·kg-1)、中劑量(4.0 g·kg-1)、高劑量(8.0 g·kg-1)組和陽性對照鹽酸氟西汀組(5 mg·kg-1)，各組均按0.2 mL·(10 g)-1體重給藥，每日1次，連續(xù)給藥14 d，因受試藥物均用蒸餾水溶解，因此空白對照組給予等體積的蒸餾水。

2.1.2 小鼠懸尾實驗 第14天，于末次給藥后1 h進(jìn)行實驗。將小鼠尾端(在尾尖2 cm處)用膠布固定使其呈倒懸狀態(tài)，頭部離實驗臺約15 cm。小鼠懸掛6 min，適應(yīng)2 min，記錄后4 min內(nèi)累計不動時間。

2.1.3 小鼠強(qiáng)迫游泳實驗 第16天，于次日末次給藥后1 h進(jìn)行實驗。將小鼠單個放入高20 cm、直徑18 cm、水深10 cm、水溫(23±2)℃的水缸中，觀察6 min，適應(yīng)2 min，記錄后4 min內(nèi)小鼠累計不動時間。每只動物更換1次水，全過程用攝像機(jī)記錄。

2.1.4 利血平拮抗實驗 該實驗中增加設(shè)置正常對照組小鼠10只；給予等體積蒸餾水。各組動物次日末次給藥前1 h用電子體溫計插入已固定的小鼠肛門內(nèi)約1.5～2.0 cm處測定肛溫，作為正常體溫值。除正常對照組外，其他各組測體溫后腹腔注射利血平注射液4 mg·kg-1。觀察指標(biāo)：①觀察1 h后15 s內(nèi)小鼠眼瞼下垂的情況。記錄小鼠不能睜眼的動物只數(shù)，計算對抗百分率。對抗百分率=(1-睜眼不能只數(shù)/動物總數(shù))×100%。②運動不能的觀測：1 h后將小鼠放入直徑為7.5 cm的圓圈內(nèi)觀察15 s，記錄小鼠沒有出圈的只數(shù)，計算對抗百分率。對抗百分率=(1-運動不能只數(shù)/動物總數(shù))×100%。③體溫下降的觀測：給藥4 h后再次測定各組動物的肛溫，記錄前后體溫變化的差異[7]。

2.2 ASMq對大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型行為學(xué)的影響

2.2.1 分組及給藥 將84只大鼠24 h禁水不禁食后給予1%蔗糖水，測定1 h內(nèi)的消耗量。根據(jù)蔗糖水消耗量隨機(jī)分成6個組，每組14只，即正常對照組、模型組、陽性鹽酸氟西汀組(3.5 mg·kg-1)，ASMq高、中、低(6.0、3.0、1.5 g·kg-1)劑量組。造模同時給藥，各組每天灌胃1次，連續(xù)給藥24 d。各組均按1.0 mL·(100 g)-1體重給藥，每周稱一次體重。

2.2.2 動物模型的建立 正常對照組每籠14只飼養(yǎng)，正常飲食飲水，不給任何刺激。其他5個組每籠14只飼養(yǎng)，給予24 d的不可預(yù)見性溫和應(yīng)激，包括：①電擊足底：36 V電壓每隔1 min電擊1次，1次持續(xù)10 s，共20次。②冰水游泳：將動物放入盛有4 ℃冷水(冰水混合)的桶中，水深15 cm，大鼠的足尖剛能觸及桶底，5 min后將動物取出。③熱水游泳：將動物放入盛有45 ℃熱水(熱水混合)的桶中，水深15 cm，大鼠的足尖剛能觸及桶底，5 min后將動物取出。④夾尾：將大鼠放入固定籠中，露出尾巴，用止血鉗夾住距尾根部1 cm處(用力不要過大，使大鼠發(fā)出哀號即可)，持續(xù)1 min。⑤搖晃：將大鼠放入紙箱子中搖晃，頻率160次·min-1，持續(xù)3 min。⑥晝夜顛倒：早上8點，將大鼠放入黑暗箱中，晚上8點打開燈照明，至次日早8點。⑦禁食：連續(xù)24 h斷料。⑧禁水：連續(xù)24 h斷水。每組每天給予隨機(jī)一種刺激，平均每種刺激給予3次[8]。

2.2.3 觀察指標(biāo) ①蔗糖水消耗量：實驗前48 h訓(xùn)練大鼠攝入1%蔗糖水，然后單獨飼養(yǎng)禁水24 h，測每只大鼠2 h內(nèi)糖水消耗量。實驗最后一天，單養(yǎng)再次測量每只大鼠2 h內(nèi)糖水?dāng)z入量。②敞箱實驗：敞箱高40 cm，長和寬均為80 cm，無蓋，周壁和箱底均為黑色，底面劃分為面積相等的25塊方格。以動物穿越方格數(shù)作為水平活動得分，以直立次數(shù)為垂直活動得分(兩前肢離地1 cm以上)。每只動物進(jìn)行1次測定，每次3 min。

2.3 統(tǒng)計學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 對小鼠不動時間的影響

由表1結(jié)果可知，與空白對照組比較，陽性對照組，ASMq高、中劑量組均可縮短小鼠懸尾、強(qiáng)迫游泳不動時間，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，表明ASMq具有抗抑郁作用。

表1 ASMq對小鼠不動時間的影響

注：與正常對照組比較，*P<0.01。

3.2對利血平所致小鼠體溫下降、眼瞼下垂和運動不能的影響

由表2結(jié)果可見，與正常對照組比較，抑郁癥模型組體溫下降、眼瞼下垂、運動不能等癥狀明顯，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)，說明小鼠處于抑郁狀態(tài)。與抑郁癥模型組比較，ASMq中、高劑量組拮抗利血平所致的體溫下降、眼瞼下垂及運動不能作用，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)，但ASMq低劑量組作用不明顯。

表2 ASMq對利血平所致小鼠體溫下降、眼瞼下垂和運動不能的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與正常對照組比較，

△P<0.01；下同。

3.3 對大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型蔗糖水消耗量、敞箱實驗的影響

表3結(jié)果表明，與正常對照組比較，模型組大鼠蔗糖水的偏嗜度明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，與模型組比較，ASMq各劑量均能明顯增加大鼠蔗糖水的偏嗜度(P<0.05)。與正常對照組比較，模型組大鼠水平運動、站立次數(shù)明顯減少(P<0.01)；與模型組比較，ASMq高、中劑量組可顯著增加大鼠水平運動、站立次數(shù)(P<0.05)，但ASMq低劑量組作用不明顯。

表3 ASMq對慢性應(yīng)激抑郁模型蔗糖水消耗量、敞箱實驗的影響

4 討論

維吾爾醫(yī)學(xué)體液論認(rèn)為，體液是于肝臟中形成，能夠被機(jī)體所轉(zhuǎn)化，為生命賦予力量，并適于人體本性的復(fù)雜物質(zhì)的總稱。體液不斷生成，又不斷被利用，是人類生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)。機(jī)體健康與否與體液的正常及平衡密切相關(guān)。維吾爾醫(yī)學(xué)正常體液分為膽液質(zhì)、血液質(zhì)、黏液質(zhì)和黑膽質(zhì)4種體液。黑膽質(zhì)體液能保持器官形狀與特質(zhì)貯存各種營養(yǎng)物質(zhì)，參與感覺、思維、記憶等活動。4種體液在“強(qiáng)熱”作用下“燃燒”體液中易揮發(fā)部分蒸發(fā)后變稠，喪失其正常功能從而形成異常黑膽質(zhì)體液。異常黑膽質(zhì)體液阻塞血管后，使各個器官尤其是支配器官“營養(yǎng)”不足，“力”被損耗，影響“腦”，可引起多語癥、抑郁癥、狂躁癥、痙攣、中風(fēng)等[9]。

強(qiáng)迫游泳實驗(FST)和小鼠懸尾實驗(TST)是抗抑郁藥物評價模型的經(jīng)典方法，是通過無法逃脫水環(huán)境而誘導(dǎo)產(chǎn)生抑郁絕望行為，屬于行為絕望模型。這種不動狀態(tài)反映了小鼠的一種絕望情緒及狀態(tài)，故而被廣泛用于抗抑郁藥的篩選與評價[10-12]。本實驗研究結(jié)果表明，ASMq能顯著縮短小鼠懸尾和強(qiáng)迫游泳不動時間，表明其有較強(qiáng)的抗抑郁作用。

利血平是一種囊泡再攝取抑制劑，它不可逆地?fù)p傷囊泡膜，損毀囊泡膜功能，使遞質(zhì)留在囊泡外，易被單胺氧化酶降解，從而使神經(jīng)遞質(zhì)耗竭，引起行為和生理上的變化及體溫下降、眼瞼下垂、運動不能、倦怠、精神抑郁等跟抑郁癥病人類似的癥狀[13]。預(yù)先使用有效的抗抑郁藥能夠拮抗利血平所致的這些癥狀，因此此模型被廣泛用于新的抗抑郁藥的篩選。實驗結(jié)果顯示ASMq可有效拮抗利血平所導(dǎo)致的體溫下降、眼瞼下垂及運動不能，具有較強(qiáng)的抗抑郁作用。

引起慢性應(yīng)激的多種因素是引起體液“燃燒”生成異常黑膽質(zhì)的主要因素。異常黑膽質(zhì)成熟劑使“成熟和堆積”的異常黑膽質(zhì)體液排出體外，使氣質(zhì)復(fù)原，體液平衡[14]。大鼠在遭受慢性應(yīng)激后的行為與抑郁癥病人的臨床表現(xiàn)具有相關(guān)性[15]。制造大鼠的抑郁狀態(tài)，應(yīng)用糖水消耗量作為測量模型動物快感缺乏的有效客觀指標(biāo)；應(yīng)用敞箱實驗中的水平運動得分、垂直運動得分作為測量動物模型運動、探索行為能力和興趣的客觀指標(biāo)[16-17]；大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型中ASMq各劑量組與模型組比較，蔗糖水的偏嗜度、敞箱實驗中水平運動得分、站立次數(shù)明顯增多，并呈現(xiàn)出量效關(guān)系。結(jié)果表明ASMq具有較明顯的抗抑郁作用。

綜上所述，ASMq能夠改善抑郁動物模型行為學(xué)缺損，具有顯著的抗抑郁作用。ASMq抗抑郁作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1] Boldizsar C.Animal models of major depression and their clinical implications[J].PROG NEURO-PSYCHOPH，2016，64(4)：293-310.

[2] 哈力旦木·吾加不都，古孜力努爾·依馬木，阿不都熱衣木·肉孜，等.異常黑膽質(zhì)成熟劑對抑郁癥模型大鼠海馬細(xì)胞外信號調(diào)控激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，38(1)：26-29.

[3] 哈木拉提·吾甫爾，阿布都熱依木·玉蘇甫，努爾買買提·艾買提.維吾爾醫(yī)異常黑膽質(zhì)新論[M].烏魯木齊：新疆人民出版社，2009：1-10.

[4] Wang H J，Gao W C，Ma S L，et al.Effect of Abnormal Savda Munziq on hypertrophic scar formation in a rabbit ear model[J].Chin J Integr Med，2015，21(7)：537-541

[5] Upue H，Chen Y，Kamilijiang M，et al.Identification of plasma protein markers common to patients with malignant tumour and Abnormal Savda in Uighur medicine：a prospective clinical study[J]，BMC Complement Altern Med，2015，15(5)：9.

[6] Amat N，Hoxur P，Min D，et al.Behavioral Neurochemical and Neuroendocrine Effects of Abnormal Savda Munziq in the Chronic Stress Mice[J].e CAM，2012(2)：1-8.

[7] 王景霞，張建軍，白曉菊，等.貫郁膠囊治療抑郁癥的實驗研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2005，11(3)：46-48.

[8] 阿不力皮孜·哈力甫，古孜力努爾·依馬木，阿不都熱依木·玉蘇甫，等.異黑成熟顆粒對抑郁癥模型大鼠生物表征的影響[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2011，34(12)：1305-1310.

[9] 哈木拉提·吾甫爾，阿布都熱依木·玉蘇甫.維醫(yī)氣質(zhì)、體液論及其現(xiàn)代研究[M].烏魯木齊：新疆科學(xué)技術(shù)出版社，2003：34-133.

[10] 鐘曉明，毛慶秋，黃真，等.蘇郁膠囊對小鼠抑郁癥模型的影響[J].中國新藥雜志，2006，15(15)：1247-1250.

[11] 王巍，王曉華.醒神開郁方抗抑郁作用的實驗研究[J].中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測，2014，5(11)：279-282.

[12] 孫世光，劉健，鹿巖，等.昆明小鼠強(qiáng)迫游泳實驗與懸尾實驗抑郁模型相關(guān)性[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2014，28(1)：107-112.

[13] Ren Y，Zhu C，Wu J，et al.Comparison between herbal medicine and fluoxetine for depression：A systematic review of randomized controlled trials[J].Complement Ther Med，2015，23(5)：674-684.

[14] 阿衣木姑·阿布拉，庫木斯·巴雅合買提，巴哈古麗·阿爾斯郎，等.抑郁癥患者的維醫(yī)證候?qū)W特征及其臨床流行病學(xué)調(diào)查[J].科技導(dǎo)報，2011，29(21)：60-63.

[15] 程工倪.KYY01治療抑郁癥的藥效學(xué)研究和機(jī)理探討[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2009.

[16] Arbabi L，Baharuldin MT，Moklas MA，et al.Antidepressant-like effects of omega-3 fatty acids in postpartum model of depression in rats[J].Behav Brain Res，2014，271(1)：65-71.

[17] Murray R，Boss-Williams K A，Weiss J M，et al..Effects of chronic mild stress on rats selectively bred for behavior related to bipolar disorder and depression[J].Physiol Behav，2013，119(2)：115-129.

ExperimentalStudyofAbnormalSavdaMunziqonAntidepressant-likeEffects

Maryamgul Muhammat，Mahsum Ekim，Mamatjan Ayidin，Matkasim Nizhamudin,Abdiryim Yusup*

(CollegeofTraditionalUyghurMedicine，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011，China)

Objective：To evaluate the behavioral changes in different animal models of depression for investigatethe antidepressant-like effects of Abnormal Savda Munziq (ASMq).Methods：Forced swimming test，tail suspension test，reserpine reversal test were applied in the study.ASMq low，medium，high doses were 2.0，4.0，8.0 g·kg-1for mice，respectively，and 1.5，3.0，6.0 g·kg-1for rat to explore the antidepressant-like effects of ASMq.Results：ASMq significantly shortened immobility time in forced swimming (P<0.01) and tail suspension tests (P<0.05)，and ameliorated reserpine-induced behavioral impairment (P<0.01)，ptosis (P<0.01) and reduced autonomic activity (P<0.01) in a dose-dependent manner.ASMq significantly increased sugar consumption，horizontal and vertical activities in open-field test in chronic mild unpredictable stress model of depression in rat.Conclusion：ASMq showed significant antidepressant-like effects by improve behavioral defects of animal model of depression.

Abnormal Savda Munziq；different animal models of depression；antidepressant-like effects

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.10.007

2016-01-15)

國家自然科學(xué)基金(81360667)

*

阿不都熱依木·玉蘇甫，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：維醫(yī)藥作用機(jī)理研究及新藥開發(fā)；E-mail：ayusup@126.com