方　琳，朱　輝，李　燁，張思遠(yuǎn)，彭　特，葉賀佳

(廣州市華南農(nóng)大生物藥品有限公司，廣東廣州 511300)

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陜西省部分地區(qū)豬偽狂犬病病毒分離鑒定及其gE基因遺傳變異分析

方琳，朱輝，李燁，張思遠(yuǎn)，彭特，葉賀佳

(廣州市華南農(nóng)大生物藥品有限公司，廣東廣州 511300)

為了解2015年陜西省豬偽狂犬病(PR)流行情況和病毒遺傳變異特點(diǎn)，采集不同地區(qū)28份疑似PR發(fā)病豬場的病料進(jìn)行PCR檢測，采用雞胚絨毛尿囊膜接種和BHK-21細(xì)胞培養(yǎng)分離PRV，應(yīng)用生物信息學(xué)方法分析主要毒力基因gE遺傳變異特征。結(jié)果顯示，從28份PRV疑似病料中檢測出7份PRV陽性樣品，分離出7株P(guān)RV地方株。陜西分離毒株與目前國內(nèi)的流行毒株同源性較高，且在同一進(jìn)化分支內(nèi)，與歐美分離株同源性較低，親緣關(guān)系相對較遠(yuǎn)。其中4個分離毒株具有變異株的典型分子特征，即773 bp～775 bp CGA的特征性插入，另3個分離毒株則與經(jīng)典參考毒株Ea株和GDSH株位于1個相對獨(dú)立的分支；SX01株和SX03株抗原表位發(fā)生改變，SX03株O-GalNAc糖基化位點(diǎn)缺失，SX04株在1個抗原表位增加了1個潛在的O-GalNAc糖基化位點(diǎn)。表明陜西省PRV gE基因在分子水平上發(fā)生了變異，核酸演化上發(fā)生了相對獨(dú)立的進(jìn)化，氨基酸序列的突變對其抗原表位和糖基化位點(diǎn)產(chǎn)生了影響。

豬偽狂犬病病毒；gE基因；遺傳變異；生物信息學(xué)

豬偽狂犬病(Porcine pseudorabies，PR) 是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的傳染病，臨床癥狀以新生仔豬腹瀉及神經(jīng)癥狀,妊娠母豬流產(chǎn)、死胎等繁殖障礙,成年豬隱性感染，長期帶毒排毒為特征[1]。PRV可感染多種家畜、家禽和野生動物。豬是該病的自然宿主和主要傳染源，各年齡段均可感染，15日齡以內(nèi)仔豬病死率可達(dá)100%，斷奶仔豬發(fā)病率40%、病死率20%左右，成年育肥豬感染后可引起生長停滯和增重緩慢等癥狀[2-3]，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

弱毒疫苗或gE基因缺失疫苗免疫接種是控制豬偽狂犬病的重要措施[4-5]。但自2011年以來，在我國多個使用PRV基因缺失疫苗免疫的規(guī)?；i場暴發(fā)了疑似豬偽狂犬病的流行，發(fā)病率和病死率明顯上升?，F(xiàn)有研究指出，在不同省份分離出的PRV變異株[6-12]，與以前的流行株相比，新流行株免疫保護(hù)性抗原的抗原性可能已發(fā)生變異，從而導(dǎo)致現(xiàn)有疫苗不足以提供完全保護(hù)[13-15]。據(jù)此，本研究對2015年間陜西銅川、興平、渭南、榆林、韓城、安康等地疑似PRV感染發(fā)病豬場采集的28份臨床疑似病料進(jìn)行了PCR檢測和病毒分離，比較了其主要毒力基因gE的遺傳變異特點(diǎn)，探討陜西省部分地區(qū)PRV的分子流行病學(xué)及遺傳進(jìn)化情況，以期為該病的防控提供參考。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1病料28份臨床疑似病料來源于2015年從陜西銅川、興平、渭南、榆林、韓城、安康等地疑似PRV感染發(fā)病豬場中采集的腦和肺部病變組織，置-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2細(xì)胞BHK-21細(xì)胞由廣州市華南農(nóng)大生物藥品有限公司病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.3主要試劑DNA提取試劑盒、LaTaqDNA聚合酶、pMD19-T載體、DNA Marker DL 2 000,TaKaRa公司產(chǎn)品；膠回收試劑盒,Tiangen公司產(chǎn)品；細(xì)胞培養(yǎng)基MEM、新生牛血清、胰酶均,Gibco公司產(chǎn)品。

1.2方法1.2.1引物的設(shè)計與合成根據(jù)GenBank上發(fā)表的PRV gE基因序列，利用引物設(shè)計軟件 Premier5.0設(shè)計1對引物，鑒定引物P1和P2用于擴(kuò)增gE基因，目的片段長度為990 bp，引物由Invitrogen公司合成。

P1：5′-CTTCCACTCGCAGCTCTTCT-3′

P2：5′-GTCACTTCCGGTTTCTCCGG-3′

1.2.2病料樣品的PCR檢測將病料解凍，研磨制成勻漿液，凍融3次后離心，取上清液，參照核酸提取試劑盒說明書方法提取DNA。以提取的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，25 μL PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為：DNA 模板2 μL，2× GC buffer Ⅰ12.5 μL，dNTP Mixture (2.5 mmol/L) 4 μL，上游引物0.5 μL，下游引物0.5 μL，LATaqDNA polymerase (5 U/μL) 0.5 μL，用ddH2O補(bǔ)至25 μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 5 min；94 ℃ 1 min，60 ℃ 45 s，72 ℃ 1 min，30個循環(huán)；72 ℃ 10 min。PCR產(chǎn)物用10 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.2.3病毒的分離與培養(yǎng)

1.2.3.1雞胚絨毛尿囊膜接種將PCR鑒定為陽性的病料上清液，加入雙抗，4 ℃作用12 h，經(jīng)0.22 μm濾器過濾除菌后分別接種到9日齡～11日齡SPF雞胚絨毛尿囊膜上，棄24 h內(nèi)死亡雞胚，每日觀察雞胚死亡情況，72 h仍未死亡的雞胚收集置4 ℃冰箱過夜，觀察絨毛尿囊膜病變，并將收集的絨毛尿囊膜經(jīng)研磨制成勻漿液，凍融3次，離心，取上清液經(jīng)0.22 μm濾器過濾除菌后，置-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3.2BHK-21細(xì)胞接種和傳代取1.2.3.1中的無菌上清液接種BHK-21單層細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，37 ℃吸附1 h后棄上清，加入適量維持液繼續(xù)培養(yǎng)，逐日觀察細(xì)胞病變(CPE)。待CPE達(dá)70%以上時收獲病毒，并在BHK-21細(xì)胞上連續(xù)培養(yǎng)傳至第5代。培養(yǎng)過程中同時設(shè)立不接毒的細(xì)胞培養(yǎng)物作為陰性對照。

1.2.4PRV gE基因的擴(kuò)增與測序采用gE基因特異性引物，以提取的病毒分離株細(xì)胞培養(yǎng)物的DNA為模板，對gE基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增(方法同1.2.2)，并將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pMD19-T載體中進(jìn)行序列測定。

1.2.5PRV gE基因序列分析將測定的序列在NCBI中進(jìn)行Blast比對，確定其為PRV gE 基因序列后，利用生物學(xué)分析軟件DNA Star和Mega6.0，將分離株及GenBank中登錄的17個經(jīng)典毒株和2012年-2015年全國不同省份分離的21個PRV變異株的gE基因核苷酸和氨基酸序列進(jìn)行比對，分析分離毒株的序列特征并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

1.2.6氨基酸序列分析 將測定的核酸序列進(jìn)行多序列比對后，轉(zhuǎn)化為氨基酸序列。使用Predicted Antigenic Peptides程序預(yù)測抗原表位，YinOYang和NetOGlyc程序預(yù)測糖基化位點(diǎn)。

2　結(jié)果

2.1病料的PCR檢測結(jié)果

gE糖蛋白是PRV的主要毒力因子之一，并作為標(biāo)志基因用來區(qū)分疫苗免疫和野毒感染[16-17]。為鑒定在陜西各地采集的臨床疑似PRV感染病料是否存在野毒感染情況，本研究將28份病料分別研磨制成勻漿液，提取DNA，以提取的DNA為模板，采用PRV特異性gE檢測引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。結(jié)果28份病料中有7份擴(kuò)增出了約990 bp大小的條帶，與預(yù)期擴(kuò)增片段大小相符，說明臨床采集的28份病料中有7份病料為PRV陽性。將擴(kuò)增的7份陽性檢測樣品一起進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如圖1所示。

M.DNA標(biāo)準(zhǔn)DL 2 000; 1～7.病料中PRV的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；8.陰性對照

M.DNA Marker DL 2 000; 1-7.PCR products of PRV from samples; 8.Negative control

圖1病料中PRV的PCR擴(kuò)增結(jié)果

Fig.1PCR amplification of PRV from tissue samples

2.2病毒的分離與鑒定

2.2.1雞胚絨毛尿囊膜接種結(jié)果將PCR鑒定為陽性的7份病料上清液過濾除菌后接種SPF雞胚，于接種后72 h肉眼可見絨毛尿囊膜增厚，表面出現(xiàn)較大隆起的灰白色痘皰樣病變，對照組雞胚絨毛尿囊膜未見異常(圖2)。

2.2.2BHK-21細(xì)胞CPEPRV具有廣泛的細(xì)胞嗜性，可在PK-15、IBRS-2、BHK-21、Hela、SK6、MDCK、牛腎原代細(xì)胞及雞胚成纖維細(xì)胞等細(xì)胞中增殖，病毒毒力不同可導(dǎo)致細(xì)胞病變稍有差異，但均具有合胞體這一典型的細(xì)胞病變。本研究將2.2.1的病料上清液接種BHK-21細(xì)胞，有2株P(guān)RV在第1代觀察到典型CPE，其他5株在第3代觀察到典型CPE。PRV連續(xù)培養(yǎng)傳至第5代，與對照未接種細(xì)胞相比，BHK-21細(xì)胞在接種后的24 h～48 h變圓、收縮、細(xì)胞間界限消失、融合、形成合胞體(圖3)，而對照細(xì)胞界限明顯，呈均勻致密的單層。隨著在相應(yīng)細(xì)胞中傳代次數(shù)的增多，典型CPE出現(xiàn)時間從第1代的60 h～72 h左右縮短至24 h～48 h。

2.3PRV gE基因的擴(kuò)增與測序

采用gE基因特異性引物，以提取的病毒分離株細(xì)胞培養(yǎng)物的DNA為模板，對gE基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，7個分離毒株均擴(kuò)增出了約990 bp的條帶(圖4)，與預(yù)期擴(kuò)增片段大小相符。將回收的PCR產(chǎn)物純化后連接于pMD19-T載體中，送Invitrogen公司進(jìn)行測序。測序結(jié)果顯示，有4個分離毒擴(kuò)增片段的大小為990 bp，共編碼330個氨基酸，分別命名為SX01、SX03、SX05、SX-SQ。另外3個分離毒擴(kuò)增片段的大小為987 bp，共編碼329個氨基酸，分別命名為SX02、SX04、SX-XP。將測定的序列在NCBI中進(jìn)行BLAST比對，確定其為PRV gE基因，說明從病料中分離出了PRV野毒株。

A，B.接種后72 h痘皰樣病變;C.對照(72 h)

A.對照(24 h);B.接毒后24 h細(xì)胞病變;C.對照(48 h);D.接種后48 h左右細(xì)胞病變

A.BHK-21 cells in control group(24 h);B.CPE of BHK-21 cells(24 h);C.BHK-21 cells in control group(48 h);D.CPE of BHK-21 cells(48 h)

圖3PRV陜西株感染BHK-21細(xì)胞產(chǎn)生的病變情況(100×)

Fig.3Cytopathogenic effects of BHK-21 cells infected with PRV Shaanxi strains(100×)

2.4PRV gE基因及推導(dǎo)的氨基酸序列分析

將7個陜西分離毒株與GenBank登錄的38株P(guān)RV參考毒株的gE基因核苷酸及推導(dǎo)的氨基酸序列的相似性進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，陜西各分離毒株之間的核苷酸和氨基酸序列的同源性分別為98.7%～99.8%和97.3%～100%；與2012年以來國內(nèi)不同省份陸續(xù)分離的GD01(2015)、JS(2015)、TJ(2014)等21株P(guān)RV變異株的核苷酸和氨基酸序列的同源性分別為98.3%～99.8%和96.4%～99.7%；而與Ea、Min-A、Kaplan、Becker等經(jīng)典參考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分別為97.4%～100%和95.1%～100%。其中，分離毒SX02和SX-XP與參考毒株Ea和GDSH gE基因的氨基酸同源性高達(dá)100%。gE基因及推導(dǎo)的氨基酸序列比對結(jié)果說明，7個陜西分離毒株彼此間同源性較高，與2012年以來國內(nèi)不同省份分離的PRV變異株同源性相對較高，而與Becker、CL-15、Kaplan、Rice等經(jīng)典參考毒株的同源性相對較低。

M.DNA標(biāo)準(zhǔn)DL 2 000; 1～7.PRVgE基因擴(kuò)增產(chǎn)物；8.陰性對照

M.DNA Marker DL 2 000; 1-7.PCR products of PRV gE gene; 8.Negative control

圖4PRV gE基因擴(kuò)增結(jié)果

Fig.4PCR amplification of PRV gE gene

與經(jīng)典參考毒株相比，SX01、SX03、SX05、SX-SQ 4株分離毒的gE基因核苷酸序列中存在3個連續(xù)堿基的插入，即773 bp～775 bp CGA的插入，導(dǎo)致編碼的氨基酸序列上第258位增加1個Asp(D)殘基。2012年以后國內(nèi)不同省份陸續(xù)分離的21株P(guān)RV變異株在這個位點(diǎn)上均存在3個連續(xù)堿基的插入，從而導(dǎo)致gE蛋白相應(yīng)位點(diǎn)上1個Asp(D)的插入。該插入特征為PRV變異毒株的重要標(biāo)志，是判斷PRV是否為變異毒株的重要指標(biāo)[10]。而SX02、SX04、SX-XP 3個分離毒在773 bp～775bp并沒有CGA的插入，與Ea、Korea、GDSH、P-Prv等經(jīng)典毒株相同。同時，7株P(guān)RV陜西分離毒均在233、235、265、270、283、287位發(fā)生了氨基酸置換(G233R、R235H、A265I、S270A、283A、A287P)，與2012年以來國內(nèi)不同省份分離的PRV變異株的氨基酸序列突變位點(diǎn)相同。核苷酸在第63位均發(fā)生突變(C→T)，但該突變位點(diǎn)并沒有引起相應(yīng)位點(diǎn)氨基酸的變化。

值得注意的是，SX01、SX03、SX05、SX-SQ 4株分離毒第210位氨基酸為I，與大部分2015年的PRV流行毒株相同；而SX02、SX04、SX-XP 3個分離毒第210位氨基酸為V，與經(jīng)典毒株(包括歐美分離株和亞洲分離株)和2014年前分離的PRV流行毒株相同。SX01、SX03、SX-SQ 3株分離毒在個別位點(diǎn)上發(fā)生了氨基酸突變。

2.5PRV gE基因遺傳演化分析

將7個陜西分離毒株與GenBank登錄的其他38株參考毒株的gE基因核苷酸序列做進(jìn)化樹分析(圖5)，結(jié)果顯示，45株P(guān)RV毒株共分為2個大群，分別包括75V19、CL-15、Kaplan等的歐美分離株和包括Ea、Fa、P-Prv及近年國內(nèi)分離的亞洲分離株。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，7個陜西分離毒株和2012年以來國內(nèi)不同省份分離的PRV變異株形成了一個相對獨(dú)立的分支，與歐美分離株關(guān)系相對較遠(yuǎn)。SX01、SX03、SX05、SX-SQ 4株分離毒與近3年國內(nèi)不同省份分離的14株P(guān)RV變異株位于一個相對獨(dú)立的分支中，親緣關(guān)系相對較近，屬于近年來流行的PRV變異毒株。而SX02、SX04、SX-XP 3個分離毒與經(jīng)典參考毒株Ea株和GDSH株位于位于另一個相對獨(dú)立的分支中，親緣關(guān)系相對較近，由共同的祖先進(jìn)化而來。此外，7株陜西分離株與國外分離株Korea株和P-Prv株的親緣關(guān)系相對較近，位于同一大分支中。

2.6gE蛋白特性比較分析

2.6.1B細(xì)胞抗原表位預(yù)測使用依據(jù)蛋白質(zhì)親水性參數(shù)為基礎(chǔ)的Predicted antigenic peptides程序，預(yù)測7株P(guān)RV的gE基因編碼肽段均存在11個潛在的B細(xì)胞抗原表位，整體抗原性良好。但與Ea株相比，SX01株在24-66位處抗原表位發(fā)生改變，這與氨基酸第62位C→R有關(guān)；SX03株和在24-66位和163-176位兩處抗原表位發(fā)生改變，這與氨基酸第64位F→S，第165位P→A有關(guān)。表明氨基酸序列的突變改變了陜西2株P(guān)RV分離毒的囊膜糖蛋白gE結(jié)構(gòu)，從而對其抗原表位產(chǎn)生了影響，但是抗原表位的改變是否會影響gE基因的免疫原性和功能，進(jìn)而影響PRV的毒力，還需進(jìn)一步研究。此外，SX01株氨基酸在34位點(diǎn)發(fā)生置換(P→S)，SX-SQ氨基酸在223位點(diǎn)發(fā)生置換(S→A)，均位于潛在的抗原表位內(nèi)，這些氨基酸位點(diǎn)的變化是否會對其相應(yīng)位置的抗原性產(chǎn)生影響，從而影響PRV毒力，亦有待進(jìn)一步研究。

2.6.2潛在糖基化位點(diǎn)預(yù)測使用糖基化位點(diǎn)預(yù)測軟件，對陜西分離株的gE基因編碼肽段的N糖基化位點(diǎn)和O-GalNAc糖基化位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測。預(yù)測結(jié)果顯示，7株陜西分離毒gE基因編碼肽段存在2個潛在的N糖基化位點(diǎn)，分別位于20位和105位氨基酸處，與Ea株的N糖基化位點(diǎn)基本一致。SX01、SX02、SX05、SX-SQ和SX-XP 5株分離毒均存在1個潛在的O-GalNAc糖基化位點(diǎn)，位于第66位氨基酸處，與Ea株的O-GalNAc糖基化位點(diǎn)基本一致。而SX03株第66位氨基酸O-GalNAc糖基化位點(diǎn)缺失，SX04株在172位氨基酸處增加了1個潛在的O-GalNAc糖基化位點(diǎn)，該位點(diǎn)位于一個可能的抗原表位內(nèi)，這2個糖基化位點(diǎn)的消失和增加是否與病毒的生物學(xué)特性變化有關(guān)，還需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

●為陜西分離毒株；▲為經(jīng)典參考毒株；未標(biāo)記的為2012-2015年全國各地分離的變異株。

3　討論

近年來，在我國許多使用豬偽狂犬基因缺失疫苗免疫的規(guī)?；i場，暴發(fā)了豬偽狂犬病，具有持續(xù)感染，終生帶毒等發(fā)病特點(diǎn)和流行形勢，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的損失。已有報道指出，新發(fā)的豬偽狂犬病病原在原豬偽狂犬病毒的基礎(chǔ)上發(fā)生了重組變異，形成了新的超強(qiáng)毒株[18]，與以前的PRV流行毒株相比，新流行毒株在基因和蛋白水平上發(fā)生了變異，進(jìn)而導(dǎo)致現(xiàn)有疫苗保護(hù)率降低，疫病難以防控。因此，對PRV進(jìn)行分離鑒定和遺傳進(jìn)化分析，以此監(jiān)測PRV毒株的變異情況，從分子水平揭示PR在豬場重新流行的原因，為PR的防控提供理論依據(jù)，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

本研究對2015年陜西省多地疑似暴發(fā)PR的豬場采集的病料進(jìn)行檢測，同時采用先接種雞胚絨毛尿囊膜再接種BHK-21細(xì)胞的病毒分離方法對陽性病料進(jìn)行病毒分離。該方法是利用皰疹病毒可在絨毛尿囊膜上產(chǎn)生典型痘皰樣病變的特性，對病料中PRV進(jìn)行純化，可以簡化病毒分離步驟，快速分離PRV，避免混合感染的病料直接接種細(xì)胞造成分離病毒不純等缺點(diǎn)。

廣州市華南農(nóng)大生物藥品有限公司病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)室共分離出了7個PRV分離毒株，均能在細(xì)胞上穩(wěn)定傳代，可產(chǎn)生細(xì)胞融合等典型病變。將7個PRV分離毒株與GenBank中登錄的17個經(jīng)典毒株和近3年國內(nèi)分離的21個流行變異株的gE基因序列進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)7株陜西分離毒與流行變異株的相似性較高，在進(jìn)化樹上處于1個相對獨(dú)立的分支中，與經(jīng)典株親緣關(guān)系相對較遠(yuǎn)；其中4個分離毒株與2012年以來國內(nèi)流行的變異株之間存在相同的分子特征，即773 bp～775 bp CGA特征性插入，該位點(diǎn)的插入是區(qū)分變異毒株的典型特征[8-14]，表明SX01、SX03、SX05、SX-SQ 4個分離毒株為PRV變異株；而另3個分離毒株沒有CGA特征性插入，且與經(jīng)典參考毒株Ea株和GDSH株處于1個的分支上。說明陜西不同地區(qū)PRV分離毒的gE基因在分子水平上發(fā)生了一定的變異，核酸演化上發(fā)生了相對獨(dú)立的進(jìn)化。

7個分離毒株分別來自陜西銅川、興平、渭南、榆林、韓城、安康等不同地區(qū)的豬場，反映了陜西不同地方PRV的流行變化情況。通過遺傳進(jìn)化分析，說明陜西2015年流行的毒株存在多元化的特征，既存在變異毒株，也存在與經(jīng)典毒株同源關(guān)系較近的毒株。本研究從分子水平研究了陜西省部分地區(qū)PRV的分子流行病學(xué)和遺傳變異規(guī)律，為預(yù)防和控制PRV的發(fā)生和流行提供理論依據(jù)。

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Isolation and Identification of Porcine Pseudorabies in Some Areas of Shaanxi Province and Analysis of Genetic Variation of gE Gene

FANG Lin,ZHU Hui,LI Ye,ZHANG Si-yuan,PENG Te,YE He-jia

(Guanzhou South China Biological Medicine CO.,LTD.，Guangzhou,Guangdong,511300)

In order to investigate the prevalence and genetic variation of PRV in Shaanxi Province in 2015,28 diseased tissues of swine were collected and detected by PCR,and the PRV was isolated by inoculating chick embryo chorioallantoic membrane and BHK-21 cell.Meanwhile the main virulence gene gE was amplified and its genetic variation characteristics were analyzed by bioinformatics methods.The results showed that the isolated 7 PRV Shaanxi strains had higher homology and closer relationships with Chinese epidemic strains than foreign reference strains.Among them,4 strains had characteristic insert of CGA in 773 bp-775 bp,which was the important marker for the PRV variant,and the other 3 strains had closer relationships with classical strains GDSH and Ea.The epitopes of strains SX01 and SX03 were changed,O-GalNAc glycosylation site of strain SX03 was deleted,a potential O-GalNAc glycosylation site was added in a epitope of strain SX04.The research indicated that PRV gE gene of Shaanxi had mutated in molecular level,and the mutant amino acids had an impact on its epitope and glycosylation sites.This study provided a theoretical basis for PRV monitoring and control.

Porcine pseudorabies virus; gE gene; genetic variation; bioinformatics analysis

2015-12-27

廣州市產(chǎn)學(xué)研協(xié)同創(chuàng)新重大專項(xiàng)(201508020088)

方琳(1982-)，女，安徽合肥人，碩士，主要從事動物傳染病學(xué)和生物制品研究。

S852.659.1；S858.28

A

1007-5038(2016)08-0024-07