盧偉昌，謝柱彬，殷進(jìn)方，盧小明，張險(xiǎn)朋（.東莞市東坑鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 53450；.東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 53086）

對(duì)東莞市家禽H5亞型禽流感免疫效果的評(píng)價(jià)

盧偉昌1，謝柱彬1，殷進(jìn)方2，盧小明1，張險(xiǎn)朋2
（1.東莞市東坑鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523450；2.東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523086）

為了評(píng)估東莞市家禽H5亞型禽流感的免疫效果，2015年在東莞市15個(gè)規(guī)模家禽養(yǎng)殖場(chǎng)和2個(gè)鎮(zhèn)的散養(yǎng)家禽場(chǎng)點(diǎn)共采集了1223份禽血清，采用血凝與血凝抑制試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果為東莞市家禽H5亞型禽流感抗體陽(yáng)性數(shù)為1071份，陽(yáng)性率為87.57%，其中雞的抗體陽(yáng)性率為90.79%，鴨的抗體陽(yáng)性率為83.23%，鵝的抗體陽(yáng)性率為72.22%，鴿子的抗體陽(yáng)性率為57.58%；規(guī)模場(chǎng)家禽抗體陽(yáng)性率為92.05%，散養(yǎng)家禽抗體陽(yáng)性率為70.47%。結(jié)果表明東莞市家禽的抗體水平總體比較高，但抗體水平參差不齊，存在H5亞型高致病性禽流感感染的風(fēng)險(xiǎn)。

H5亞型禽流感；家禽；血凝與血凝抑制試驗(yàn)；免疫效果

禽流感（avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一種人獸共患傳染病，主要感染雞、鴨、鵝、鴿子等禽類。禽流感病毒屬于正黏病毒科流感病毒屬A型流感病毒，根據(jù)血凝素（H）和神經(jīng)氨酸酶（N）的抗原性不同，將AIV進(jìn)行分類。目前，已從水禽中分離到了16 種HA與9種NA亞型的A型流感病毒。家禽感染AIV后，表現(xiàn)為高致病力，中度致病力，低致病力和無(wú)致病力，H5亞型和H7亞型認(rèn)為是可以引起是高致病性禽流感的亞型。OIE將禽流感列為應(yīng)報(bào)告動(dòng)物傳染病，我國(guó)將高致病性禽流感列為一類傳染病。H5N1禽流感病毒不僅對(duì)家禽業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，并可直接感染人，甚至導(dǎo)致患者死亡，對(duì)公共衛(wèi)生安全造成極大威脅。我國(guó)將H5亞型高致病性禽流感列為強(qiáng)制免疫的疫病之一，采取疫苗免疫和撲殺相結(jié)合的綜合策略。為了評(píng)估我市家禽H5亞型禽流感的免疫效果，為防控高致病性禽流感提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，在2015年采集了15個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)的家禽的血清進(jìn)行H5亞型禽流感抗體檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1家禽血清

共1223份禽血清，2015年采自東莞市15個(gè)規(guī)模家禽養(yǎng)殖場(chǎng)和東坑鎮(zhèn)、虎門鎮(zhèn)的散養(yǎng)家禽，其中雞血清945份，鴨血清155份、鵝血清90份，鴿血清33份。以翅靜脈采血，以3500r/min離心15min分離獲得待檢血清，-20℃保存?zhèn)錂z。

1.2試劑

1.2.11%雞紅細(xì)胞懸液

采集實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的3只禽流感和新城疫非免疫的健康公雞的血液與阿氏液等體積混合，用pH值7.2的0.01mol/L PBS液洗滌3次，每次以1000r/min離心10min，洗滌后用PBS液配成體積分?jǐn)?shù)1%雞紅細(xì)胞懸，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2H5亞型禽流感抗原（Re-6）和陽(yáng)性血清H5亞型禽流感抗原（Re-6）和陽(yáng)性血清，購(gòu)自哈爾濱維科生物科技有限公司，批號(hào)分別為2013004，2013001。

1.2.3主要耗材和儀器96孔“V”型反應(yīng)板，離心機(jī)，8道移液器，微量震蕩器。

1.3方法

按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）規(guī)定的血凝與血凝抑制方法操作。以完全抑制4U抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI的滴度。HI效價(jià)小于或等于3log2判陰性，HI效價(jià)等于4log2為可疑，進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，HI效價(jià)大于或等于5log2判陽(yáng)性，判定為抗體合格。根據(jù)東莞市動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)方案規(guī)定，家禽免疫后21d進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)，HI試驗(yàn)免疫抗體大于或等于5log2的樣品判為免疫抗體合格。

2　結(jié)　果

2.1不同時(shí)間家禽免疫抗體合格率比較

2015年共檢測(cè)家禽血清1223份，H5亞型禽流感抗體陽(yáng)性1071份，抗體陽(yáng)性率為87.57%，其中第一季度抗體陽(yáng)性率為90.00%，第二季度抗體陽(yáng)性率為73.26%，第三季度抗體陽(yáng)性率為94.20%，第四季度抗體陽(yáng)性率為90.59%，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　不同季節(jié)家禽H5亞型禽流感抗體免疫情況

2.2不同養(yǎng)殖場(chǎng)所家禽免疫抗體合格率比較

在檢測(cè)1223份家禽血清中，其中檢測(cè)散養(yǎng)家禽血清254份，H5亞型禽流感抗體陽(yáng)性179份，抗體陽(yáng)性率為70.47%；檢測(cè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)家禽血清969份，H5亞型禽流感抗體陽(yáng)性892份，抗體陽(yáng)性率為92.05%，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　不同養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)家禽H5亞型禽流感抗體免疫情況

2.3不同家禽種類免疫抗體合格率比較

在檢測(cè)1223份家禽血清中，檢測(cè)雞血清945份，H5亞型禽流感抗體陽(yáng)性858份，抗體陽(yáng)性率為90.79%；檢測(cè)鴨血清155份，H5亞型禽流感抗體陽(yáng)性129份，抗體陽(yáng)性率為83.23%；檢測(cè)鵝血清90份，H5亞型禽流感抗體陽(yáng)性65份，抗體陽(yáng)性率為72.22%；檢測(cè)鴿子血清33份，H5亞型禽流感抗體陽(yáng)性19份，抗體陽(yáng)性率為57.58%，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表3。

3　討論

3.1使用滅活疫苗是防控高致病性禽流感的最有效措施，東莞市的家禽養(yǎng)殖以小規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)為主，家禽的存欄量比較少，多年來(lái)一直按照農(nóng)業(yè)部的部署落實(shí)高致病性禽流感的強(qiáng)制免疫。從本次家禽H5亞型禽流感抗體血清學(xué)調(diào)查可以看出，我市的家禽H5亞型禽流感抗體水平較高，達(dá)到了87.57%，遠(yuǎn)高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的免疫合格率大于等于70%的要求。近年來(lái)，隨著我市加強(qiáng)動(dòng)物防疫隊(duì)伍建設(shè)，建立了市、鎮(zhèn)、村動(dòng)物防疫隊(duì)伍，落實(shí)動(dòng)物防疫責(zé)任制，嚴(yán)格執(zhí)行“政府保密度，業(yè)務(wù)部門保質(zhì)量”的政策，采用“動(dòng)物防疫管理信息系統(tǒng)”動(dòng)態(tài)監(jiān)控養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫情況，養(yǎng)殖場(chǎng)實(shí)行二次免疫制度，散養(yǎng)戶實(shí)行春、秋、冬大防集中免疫，常年補(bǔ)免，做到村不漏戶，戶不漏針，構(gòu)筑了高致病性禽流感的免疫屏障。

表3　不同家禽種類點(diǎn)家禽H5亞型禽流感抗體免疫情況

3.2從監(jiān)測(cè)的場(chǎng)點(diǎn)來(lái)看，規(guī)模場(chǎng)的H5亞型禽流感的抗體陽(yáng)性率明顯高于散養(yǎng)戶。規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)嚴(yán)格實(shí)行二次免疫甚至三次免疫，家禽抗體處于較高的抗體水平。散養(yǎng)戶由于分布廣，防疫意識(shí)較差，通常只在集中免疫時(shí)免疫一次，抗體水平偏低，不足于抵抗野的侵襲，給動(dòng)物疫病防控工作帶來(lái)很大難度，疫情風(fēng)險(xiǎn)比較大，是防疫監(jiān)測(cè)的重點(diǎn)對(duì)象。

3.3從不同時(shí)間的監(jiān)測(cè)結(jié)果來(lái)看，以第三季度的抗體陽(yáng)性率最高，依次為第四季度、第一季度、第二季度，第二季度最低只有73.26%?？赡苁堑诙径?，天氣比較炎熱，養(yǎng)殖戶產(chǎn)生麻痹心理，以為氣溫高，不會(huì)發(fā)生疫情，放松了免疫措施的落實(shí)。

3.4從不同種類家禽監(jiān)測(cè)結(jié)果來(lái)看，雞的H5亞型禽流感抗體陽(yáng)性率最高達(dá)到90.79%，依次為鴨、鵝、鴿子，抗體陽(yáng)性率分別為83.23%、72.22%、57.58%，鴿子的抗體陽(yáng)性率最低。陳華等對(duì)2009～2013年山東家禽H5亞型禽流感抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果也表明，雞的抗體陽(yáng)性率明顯高于水禽。目前，我市使用的禽流感疫苗分為雞的疫苗和水禽專用苗。免疫的效果不同可能與不同種類的家禽對(duì)禽流感的疫苗免疫應(yīng)答不同。水禽養(yǎng)殖的規(guī)模化程度不高，放牧或半放牧的飼養(yǎng)方式，免疫難度大，免疫效果難以保證。根據(jù)調(diào)查鴿子進(jìn)行滅活禽流感免疫后，會(huì)影響產(chǎn)蛋，種鴿場(chǎng)的養(yǎng)殖戶不愿意免疫，可能是造成鴿子抗體水平比較低的原因。

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10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.027

盧偉昌（1976～），廣東省東莞市人，助理獸醫(yī)師，從事動(dòng)物疫病防控工作