趙　微，倪宏波*（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319）

豬輪狀病毒與多種細(xì)菌混合感染的診斷報(bào)告

趙微，倪宏波*
（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319）

豬；輪狀病毒；大腸桿菌；多殺性巴氏桿菌；胸膜肺炎放線桿菌；混合感染

由于飼養(yǎng)管理等各方面原因，在養(yǎng)豬生產(chǎn)中常發(fā)生病毒疾病和細(xì)菌疾病混合感染的現(xiàn)象。大慶某豬場仔豬出現(xiàn)嘔吐，腹瀉等癥狀，并且有部分仔豬死亡。無菌采集病料，提取病料組織和細(xì)菌的RNA和DNA進(jìn)行RT-PCR和PCR鑒定，結(jié)果在412bp處擴(kuò)增出輪狀病毒條帶，在253bp和450bp處擴(kuò)增出多殺性巴氏桿菌和胸膜肺炎放線桿菌的條帶。結(jié)合之前的臨床癥狀和病理變化，確診為輪狀病毒、大腸桿菌、多殺性巴氏桿菌和胸膜肺炎放線桿菌的混合感染?，F(xiàn)報(bào)告如下：

1　發(fā)病情況

大慶市某豬場，共飼養(yǎng)約5000頭豬，其中仔豬約1000頭，本次發(fā)病豬多為斷奶后仔豬，發(fā)病率為60%左右。病死率為5%左右。

2　臨床癥狀

患病豬病初食欲不振，精神沉郁，出現(xiàn)嘔吐和腹瀉，糞便成水樣、糊狀或似乳清樣液體，糞便呈黃綠色、灰白色或黑褐色，下痢病豬出現(xiàn)嚴(yán)重的脫水和體重下降。

3　病理學(xué)診斷

病變主要限于消化道，胃弛緩，內(nèi)充滿凝乳塊和乳汁，小腸壁變薄，呈半透明狀，腸內(nèi)容物呈漿性或水樣，灰白或灰黑色，腸系膜淋巴結(jié)水腫，腸絨毛短縮扁平。

4　實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1革蘭氏染色鏡檢無菌采集病料，用病料中所分離的細(xì)菌進(jìn)行純培養(yǎng)，可見兩種菌落形態(tài)的細(xì)菌，分別對其革蘭氏染色、涂片、鏡檢?？梢妰啥蒜g圓紅色桿狀菌，疑似大腸桿菌。

4.2鑒別培養(yǎng)將革蘭氏染色鏡檢后疑似大腸桿菌的細(xì)菌接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，將劃線后的培養(yǎng)皿倒置37℃溫箱中培養(yǎng)24h，觀察到紫黑色有金屬光澤的菌落，確定其為大腸桿菌。

4.3PCR檢測提取純培養(yǎng)的細(xì)菌DNA和病料組織中的DNA或RNA病毒。選用支原體、豬多殺性巴氏桿菌、豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌、胸膜肺炎放線桿菌的特異性引物（見表1），對細(xì)菌DNA進(jìn)行PCR鑒定。選用豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV），豬流行性腹瀉病毒（PEDV），輪狀病毒（RV）、多重PCR的特異性引物（見表1），對病毒進(jìn)行PCR鑒定。PCR結(jié)果經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析，如圖1和2所示：

表1　各細(xì)菌PCR引物和多重腹瀉PCR引物

圖1中1號泳道有一條253 bp的特異性條帶，與巴氏桿菌的引物目的片段大小一致；4號泳道有一條450bp的特異性條帶，與胸膜肺炎放線桿菌的引物目的片段大小一致。圖2中1號泳道有一條412bp的特異性條帶，與輪狀病毒的引物目的片段大小一致。

圖1 細(xì)菌PCR檢測結(jié)果

圖2 病毒多重PCR檢測結(jié)果

4.4藥敏試驗(yàn)

用紙片法進(jìn)行對本實(shí)驗(yàn)分離的大腸桿菌，多殺性巴氏桿菌和胸膜肺炎放線桿菌的藥敏試驗(yàn)。結(jié)果如下：

大腸桿菌對硫酸頭孢喹肟、阿米卡星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星敏感，對頭孢唑啉、壯觀霉素、阿奇霉素效果一般，對強(qiáng)力霉素、慶大霉素、卡那霉素?zé)o效。多殺性巴氏桿菌對硫酸頭孢喹肟、鹽酸頭孢噻呋、頭孢唑啉、氟苯尼考高度敏感，強(qiáng)力霉素、壯觀霉素、恩諾沙星效果一般，阿米卡星、阿奇霉素、慶大霉素、林可霉素、環(huán)丙沙星無效。胸膜肺炎放線桿菌對氟苯尼考、麥迪霉素、環(huán)丙沙星、頭孢呋辛、大觀霉素、頭孢吡肟 、先鋒噻肟敏感，對氟哌酸、阿莫西林、阿米卡星、多粘菌素B效果一般，對左氟沙星、替考拉寧、頭孢唑啉無效。

綜合以上結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)分離的致病菌對硫酸頭孢喹肟，恩諾沙星，氟苯尼考，環(huán)丙沙星敏感。

5　討　論

在豬場輪狀病毒的感染是非常普遍的，常和其它病毒病原共感染，如豬傳染性胃腸炎病毒，豬流行性腹瀉病毒，細(xì)菌病原例如大腸桿菌，多殺性巴氏桿菌等，導(dǎo)致養(yǎng)豬業(yè)的重大損失。本次發(fā)病主要是輪狀病毒和多種細(xì)菌的混合感染。發(fā)生混合感染的原因可能是仔豬的抵抗力較差，未獲得母源抗體，飼養(yǎng)管理差，畜舍衛(wèi)生條件不合格等。因此加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善衛(wèi)生條件，制定合理的免疫措施是防制關(guān)鍵。應(yīng)該合理搭配日糧，保證充足的營養(yǎng)供應(yīng)，注意通風(fēng)、保暖，保持干燥、減少應(yīng)激，增強(qiáng)抵抗力。可以在母豬產(chǎn)前15d和產(chǎn)后7d進(jìn)行2次免疫，所產(chǎn)仔豬可以通過母乳獲得母源抗體。針對此次發(fā)病，結(jié)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果，可以選用硫酸頭孢喹肟，恩諾沙星，氟苯尼考，環(huán)丙沙星等細(xì)菌敏感的抗生素進(jìn)行治療。

6　結(jié)　論

通過對該豬場病豬的臨床診斷、病理解剖以及實(shí)驗(yàn)室診斷，確診該豬場混合感染了豬輪狀病毒、致病性大腸桿菌、多殺性巴氏桿菌和胸膜肺炎放線桿菌。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.023