鄭海燕

（開州區(qū)臨江畜牧站，重慶 405400）

杜仲茶對(duì)兔血清SOD和G-SH的活性影響

鄭海燕

（開州區(qū)臨江畜牧站，重慶 405400）

通過對(duì)兔血清中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱苷肽（G-SH）活性的影響研究。表明杜仲茶能顯著提高兔血清中超氧化物歧化酶（SOD）和增加谷胱苷肽（G-SH）活性，對(duì)防止衰老、預(yù)防和緩解老年疾病癥狀具有作用。這對(duì)杜仲資源的開發(fā)有著重要意義！

杜仲茶 SOD G-SH 活性

1 前言

杜仲（Eucommia ulmoides Oliv）屬杜仲科，落葉喬木，是我國傳統(tǒng)的一種名貴中藥材。據(jù)《本草綱目》中記載，杜仲具有補(bǔ)肝、腎、強(qiáng)筋骨、降壓、抗衰老、益腰膝之功效。長(zhǎng)期以來，人們都以杜仲皮入藥，但是皮的來源數(shù)量有限，剝皮也對(duì)杜仲樹造成傷害，對(duì)樹木生長(zhǎng)影響極大，由于皮不能持續(xù)性，產(chǎn)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床需要。近年來的研究表明，杜仲葉與皮具有相似的化學(xué)成分和藥理作用，葉可代皮供藥用，這為杜仲開發(fā)拓展了新的渠道。為充分利用榮昌豐富的杜仲資源，我們開發(fā)了杜仲葉和茶葉炒制的杜仲茶，本課題以兔為試驗(yàn)動(dòng)物，研究杜仲茶對(duì)血清超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱苷肽（G-SH）活性的影響，從而證明其消除自由基、防衰老的保健作用，這對(duì)杜仲葉開發(fā)和利用［5］具有理論和現(xiàn)實(shí)意義。

2 材料與方法

2.1 主要藥品

SOD試劑盒和G-SH試劑盒：購自南京建成生物工程研究所；冰乙酸、無水乙醇、氯化鈉均為分析純。

2.2 主要儀器

722型分光光度計(jì)（上海分析儀器廠）；420恒溫水箱（上海分析儀器廠）；離心機(jī)（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；5mL一次性注射器、5mL滅菌離心管等均由生化實(shí)驗(yàn)室提供。

2.3 杜仲茶的制備

杜仲葉采自榮昌縣直升鎮(zhèn)道觀村5組，茶葉鮮葉由榮昌興榮茶葉有限公司提供。按杜仲葉：茶葉1：9的比例炒制。

稱取杜仲茶葉50g，分別用1000、500、500ml 85℃的蒸餾水分三次提取，每次30min紗布過濾，合并濾液，冰箱冷藏備用，當(dāng)日用完。

2.4 試驗(yàn)動(dòng)物和分組

2.4.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選成年新西蘭大白兔18只，體重1500～2000g，雌雄各半，由榮昌安富榮華兔場(chǎng)提供。

2.4.2 分組方法

18只家兔，采用隨機(jī)分組法分為3組，每組6只。第一組：對(duì)照組，自由采食兔顆粒飼料，自由飲水；第二組：自由飲用組，自由采食兔顆粒料，自由飲用杜仲茶提取液。第三組：灌服組，自由采食顆粒料，每天每只兔灌服杜仲提取液50ml。

2.4.3 兔子采血

預(yù)飼5d，飲用后每隔5d耳靜脈采血一次，連續(xù)采血5次，自配肝素作抗凝劑，離心分離血清，測(cè)定SOD和G-SH的含量。

2.5 血清中超氧化物歧化酶（SOD）和還原性谷胱甘肽（G-SH）活性測(cè)定方法

2.5.1 血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性測(cè)定

依南京建成生物工程研究所提供SOD試劑盒配制方法見表1。

表1　SOD試劑盒配制方法

混勻，室溫放置10min，于波長(zhǎng)550nm處，1cm光徑比色環(huán)，蒸餾水調(diào)零，比色。

SOD活力（U/ml）=（對(duì)照管吸光度-測(cè)定管吸光度）/對(duì)照管吸光度 ÷50%×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)×樣品測(cè)試前的稀釋倍數(shù)

2.5.2 血清谷胱苷肽（G-SH）活性測(cè)定方法

依南京建成生物工程研究所提供G-SH試劑盒配制方法見表2。

表2　G-SH試劑盒配制方法

混勻，靜置5min，420nm處，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零比色，測(cè)各管OD值。

G-SH含量（gG-SH/L）= 測(cè)定管吸光度 /（標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-空白管吸光度）×準(zhǔn)管濃度（20μmol/L）×G-SH分子量（307）×稀釋倍數(shù)

2.6 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSSⅡ軟件對(duì)SOD和G-SH的活性進(jìn)行顯著性t檢驗(yàn)，比較組間差異性。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 杜仲茶對(duì)兔SOD活性的影響

杜仲茶對(duì)兔SOD活性的影響，見表3所示，和對(duì)照組比較，自由飲用組和灌服組在試驗(yàn)十天內(nèi)其兔血清SOD活性差異不顯著，但可以看出試驗(yàn)組是逐步升高，當(dāng)試驗(yàn)十五日后，自由飲服和灌服組都和對(duì)照差異顯著，說明杜仲茶提取液顯著地提高了兔血清SOD活性，20日后SOD活性與組間內(nèi)比較，兔血清SOD活性差異不顯著，說明SOD活性的增加是有一定的限度，在20日升到最高。

雖然自由飲服組和灌服組其SOD活性沒有多大差異，但是灌服組開初活性的增長(zhǎng)要高些，這和我們?cè)囼?yàn)中我們觀察到兔子在自由飲服開始時(shí)，不習(xí)慣茶的苦味，飲的太少有關(guān)。

3.2 杜仲茶對(duì)兔子G-SH活性影響

杜仲茶對(duì)兔G-SH活性的影響，見表4所示，從表4結(jié)果看出，杜仲茶對(duì)G-SH的影響，自由飲用組和灌服組都不能顯著地使G-SH的活性增加，自由飲用組和灌服組內(nèi)也變化不明顯。但我們可以從試驗(yàn)的結(jié)果來看，對(duì)G-SH活性的改善是顯而易見的，增加不顯著可能與我們?cè)囼?yàn)的時(shí)間太短有關(guān)。

表3　杜仲茶對(duì)SOD活性的影響

表4　杜仲茶對(duì)G-SH活性的影響

4 分析與討論

人休細(xì)胞衰老死亡主要原因，是在于細(xì)胞內(nèi)氧化還原產(chǎn)生超氧陰離子自由基（O2.-）、羥自由基和過氧化氫等，降低了血液及組織中SOD和G-SH活性，提高脂質(zhì)過氧化物水平。也已證明，過氧化損傷也是心臟毒性的主要原因。現(xiàn)已證明超氧物歧化酶（SOD）是生物內(nèi)重要的氧自由基清除劑，隨著年齡的增加其活性逐步下降，檢查老年人高血壓、冠心病、肺心病、糖尿病、自身免疫性疾病及惡性腫瘤患者的SOD值，均與正常老年值有極顯著差異。G-SH也是體還原體系中重要的組成部分，它和保護(hù)細(xì)胞通透性，防止水分的流失，以及重金屬離子的解毒都起著重要作用。

通過試驗(yàn)看出，杜仲茶對(duì)于促進(jìn)血液中SOD的活性十分明顯，G-SH的活性也有增加的現(xiàn)象，表明了長(zhǎng)期飲用杜仲茶具有保護(hù)細(xì)胞膜完整性，促進(jìn)人體皮膚、骨骼和肌肉中蛋白質(zhì)膠原合成和分解，促進(jìn)代謝，預(yù)防衰老具有重要的保健作用。對(duì)一些老年性疾病的緩解也有一定的效果。此試驗(yàn)結(jié)果也驗(yàn)證了美國宇航局將杜仲葉飲料作為宇航員飲品的作用。

在此次試驗(yàn)中，由于時(shí)間的關(guān)系，沒有說明是否長(zhǎng)期飲用杜仲茶對(duì)G-SH的生成具有誘導(dǎo)作用，這還待以后研究。

5 結(jié)論

通過自由飲用和灌服的方式對(duì)家兔飼喂杜仲茶，結(jié)果顯示杜仲茶既能夠提高兔血清中超氧化物歧化酶（SOD）的活性，又能增強(qiáng)還原性谷胱苷肽（G-SH）的活性，這對(duì)于防止衰老和緩解老年性病癥有著一定作用，同時(shí)也能夠變廢為寶，為充分利用和開發(fā)杜仲葉資源提供重要依據(jù)。