張鵬威蘇文琴曾沖張麗（.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南　?？?5799；.?？谀详戓t(yī)藥科技有限公司，海南　?？凇?700）

坎地沙坦酯氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)研究

張鵬威1蘇文琴1曾沖2張麗1
（1.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南?？?571199；2.?？谀详戓t(yī)藥科技有限公司，海南?？?71100）

目的建立測(cè)定坎地沙坦酯氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法。方法：采用Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，以磷酸-三乙胺緩沖液（pH值5.0）為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，流速1.0 mL·min-1。結(jié)果：已知雜質(zhì)和降解的未知雜質(zhì)與主藥分離良好，4批樣品檢測(cè)結(jié)果表明，總雜質(zhì)均＜1.0%，單雜均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論：所訂方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可以用于檢測(cè)本產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)。

高效液相色譜法；坎地沙坦酯氨氯地平片；有關(guān)物質(zhì)；降解產(chǎn)物

坎地沙坦酯是由日本武田公司開發(fā)，1998年首先在瑞典上市。它是二苯四咪唑類血管緊張素Ⅱ型受體（AT1）拮抗劑。苯磺酸氨氯地平是由美國(guó)輝瑞公司研制開發(fā)，1992年首次上市，為長(zhǎng)效二氫吡啶類鈣離子拮抗劑。坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平兩者均呈良好的抗高血壓效果，而兩者聯(lián)合用藥因不同作用機(jī)制，作用于不同位點(diǎn)，合用具有良好的協(xié)同效應(yīng)，顯示比兩藥單用可產(chǎn)生更好的降血壓作用，并不增加不良反應(yīng)發(fā)生率。對(duì)單藥不易控制的高血壓病患者，選擇聯(lián)合用藥能提高患者的血壓控制達(dá)標(biāo)率，并有良好的安全性、依從性［1］。因此，日本武田公司開發(fā)了坎地沙坦酯氨氯地平片，并于2010年在日本首次上市。

對(duì)于坎地沙坦酯氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)目前已經(jīng)有少量報(bào)道［2-3］，但依據(jù)最新的注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，其研究均無(wú)法達(dá)到藥品注冊(cè)要求。因此本文參照坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平在JP16、BP2013、USP35、EP7.8中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)本復(fù)方制劑的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了研究并建立了測(cè)定方法［4-6］。

1　儀器與材料

安捷倫高效液相色譜儀（LC-2010）。

表1　分離度試驗(yàn)結(jié)果

坎地沙坦酯（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100685-200401，含量：100.0%）；苯磺酸氨氯地平（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100374-200903，含量：99.9%）；坎地沙坦酯氨氯地平片（由海口南陸醫(yī)藥科技有限公司提供）；坎地沙坦酯雜質(zhì)A，B，C，D，E，F(xiàn)均來(lái)自加拿大TorontoResearch Chemicals Inc；氨氯地平雜質(zhì)來(lái)自加拿大Molcan Corporation；甲醇、乙腈（TEDIA，色譜純）；超純水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

圖1　已知雜質(zhì)分離圖譜

2　試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

取本品細(xì)粉適量，精密稱定，加入乙腈-水（3：2）適量，超聲溶解5分鐘，并定量稀釋制成每1ml中含坎地沙坦酯1.5mg的溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取1 ml至100 ml量瓶中，加乙腈-水（3：2）稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。分別取坎地沙坦酯、坎地沙坦酯雜質(zhì)A、坎地沙坦酯雜質(zhì)B、坎地沙坦酯雜質(zhì)C、坎地沙坦酯雜質(zhì)D、坎地沙坦酯雜質(zhì)E、坎地沙坦酯雜質(zhì)F、坎地沙坦酯雜質(zhì)G、坎地沙坦酯雜質(zhì)I、苯磺酸氨氯地平、氨氯地平雜質(zhì)A、氨氯地平雜質(zhì)B、氨氯地平雜質(zhì)D、氨氯地平雜質(zhì)E、氨氯地平雜質(zhì)F、氨氯地平雜質(zhì)G、氨氯地平雜質(zhì)H加乙腈-水（3：2）溶解并定量稀釋制成坎地沙坦酯和坎地沙坦酯雜質(zhì)約含450ug/mL及氨氯地平和氨氯地平雜質(zhì)約含140 ug/ml溶液，搖勻，作為各雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液。再分別取以上各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，分別配置成約含坎地沙坦酯和坎地沙坦酯雜質(zhì)18ug/ml及氨氯地平和氨氯地平雜質(zhì)約含5.6ug/ml的溶液，作為各組分定性溶液及其混合溶液。

2.2色譜條件

表2　檢測(cè)限定量限試驗(yàn)結(jié)果

色譜柱：Agilent C18（4.6 mm×250mm，5μm），流動(dòng)相：以磷酸-三乙胺緩沖液（取三乙胺4 ml，加水1000 ml溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.0）為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，線性梯度洗脫程序?yàn)椋? min（65%A）→15 min（65%A）→45 min（20%A）→68 min （20%A）→72 min（65%A）→90 min（65%A），流速：1.0 mL·min-1，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，進(jìn)樣體積：20 μL。

2.3波長(zhǎng)選擇

在EP7.3、USP36、BP2012及JP16中坎地沙坦酯的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)為254，而在JP16中，苯磺酸氨氯地平的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)為237。通過(guò)主藥及其已知雜質(zhì)對(duì)照品的紫外光譜掃描試驗(yàn)，坎地沙坦酯及其已知雜質(zhì)在254nm波長(zhǎng)處有較大吸收，氨氯地平及其降解雜質(zhì)峰在254nm波長(zhǎng)處有較大吸收，且峰型良好；而在237nm處，坎地沙坦酯峰型對(duì)稱性欠佳，故將本品有關(guān)物質(zhì)檢查檢測(cè)波長(zhǎng)確定為254nm。

2.4專屬性試驗(yàn)

2.4.1已知雜質(zhì)分離度

分別取各組分定性溶液和混合雜質(zhì)溶液20 μl，注入HPLC測(cè)定。從試驗(yàn)色譜圖可知主峰與各雜質(zhì)分離均符合要求，結(jié)果見表1及圖1。

（1）有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)限與定量限

精密量取各組分定性溶液，逐步對(duì)倍稀釋，分別精密量取上述溶液份20 μl注入HPLC測(cè)定，直至樣品色譜峰低至噪音水平。結(jié)果見表2。

（2）線性關(guān)系試驗(yàn)

取雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加乙腈-水（3：2）稀釋制成一定濃度的溶液。分別精密量取上述溶液20 μl注入HPLC測(cè)定。以樣品色譜峰面積A與濃度c進(jìn)行線性回歸。試驗(yàn)結(jié)果見表3。

（3）破壞試驗(yàn)

表3　線性試驗(yàn)結(jié)果

取坎地沙坦酯氨氯地平片粉末（約含坎地沙坦酯30mg），置20ml量瓶中，分別加1 mol/L鹽酸溶液1 ml、1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml、3%的過(guò)氧化氫溶液1 ml、強(qiáng)光照射、沸水浴加熱破壞，中和后，加乙腈-水（3：2）稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為破壞溶液。對(duì)坎地沙坦酯原料藥、苯磺酸氨氯地平原料藥、坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平混合原料以及混合空白輔料進(jìn)行同法破壞。

試驗(yàn)結(jié)果表明，本品在強(qiáng)光破壞試驗(yàn)條件下無(wú)明顯變化，在氧化破壞、高溫破壞、強(qiáng)酸破壞、強(qiáng)堿破壞條件下有關(guān)物質(zhì)均有所增加。在上述破壞試驗(yàn)中，兩個(gè)主峰純度在各破壞條件下，純度因子均達(dá)到995以上，其主峰與降解產(chǎn)物的色譜峰均能分離，分離度均符合要求。結(jié)果見表4。

表4　破壞性試驗(yàn)結(jié)果

（4）精密度試驗(yàn)

取本品供試品溶液及其對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣9次。已知雜質(zhì)峰面積、單個(gè)雜質(zhì)峰面積及總雜質(zhì)峰面積RSD值均小于2.0%，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。

表5　回收率試驗(yàn)（n=9）

（5）溶液穩(wěn)定性

取同一混合雜質(zhì)溶液、供試品溶液，室溫放置，分別于0、80、160、240、320、400、480、560、640、720 min注入HPLC測(cè)定。結(jié)果表明各雜質(zhì)峰在12 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD＜2%，表明溶液室溫放置12 h穩(wěn)定。

（6）回收率試驗(yàn)

分別取雜質(zhì)對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液及片粉適量（約相當(dāng)于30mg坎地沙坦酯），按2.1供試品溶液的制備方法處理，注入HPLC測(cè)定。結(jié)果見表5。

結(jié)果表明雜質(zhì)回收率均小于10%，符合注冊(cè)要求。

（7）有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法與結(jié)果

取本品的細(xì)粉適量，按2.1供試品溶液的制備方法處理，注入HPLC測(cè)定。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，以對(duì)照溶液的主峰面積計(jì)算單個(gè)最大雜質(zhì)和各雜質(zhì)總和?？驳厣程辊ルs質(zhì)B雜質(zhì)應(yīng)不得大于0.8%，坎地沙坦酯雜質(zhì)F雜質(zhì)應(yīng)不得大于0.5%，氨氯地平雜質(zhì)D雜質(zhì)應(yīng)不得大于0.8%，其他單個(gè)雜質(zhì)應(yīng)不得大于0.5%，雜質(zhì)總量應(yīng)不得大于3.0%。分別測(cè)定4批樣品，結(jié)果見表6。

表6　有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

3　討論

坎地沙坦酯氨氯地平片屬于復(fù)方制劑，包含坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平兩種成分，在BP2013、USP35、EP7.8等中均未收載，僅在JP16收載坎地沙坦酯氨氯地平片標(biāo)準(zhǔn)。但按當(dāng)前藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，JP16標(biāo)準(zhǔn)不足以完成藥品注冊(cè)。我們開發(fā)了HPLC，該法分析時(shí)間適中，各已知雜質(zhì)和破壞降解雜質(zhì)與主成分之間分離度均符合要求。

根據(jù)參比制劑原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅測(cè)定3個(gè)已知雜質(zhì)和總雜。因此本文參照J(rèn)P16、BP2013、USP35、EP7.8中坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法和雜質(zhì)類別，同時(shí)對(duì)多達(dá)15個(gè)已知雜質(zhì)進(jìn)行了研究，并根據(jù)穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)最終確定測(cè)定3個(gè)特性雜質(zhì)和總雜質(zhì)。結(jié)果表明該法專屬性強(qiáng)、靈敏度高，可以作為本品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，確保產(chǎn)品質(zhì)量。

［1］2003 World Health Organization（WHO）/International Society of Hypertension（ISH）statement on management of hypertension.http：//www.who.int/cardiovascular_diseases/guidelines/hypertension_guidelines.pdf？ua=1［EB/OL］2015-6-8.

［2］陳寧，毛柯，周衛(wèi)，等.HPLC測(cè)定坎地沙坦酯氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)及降解產(chǎn)物.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué).2014，31（4）：465-468.

［3］靳茂禮，姚振江，申磊，等.坎地沙坦酯氨氯地平片中降解產(chǎn)物的研究.中國(guó)藥業(yè).2014，23（3）：29-30.

［4］Japanese Pharmacopoeia［S］.2014：2660-2664.

［5］EUROPEAN PHARMACOPOEIA 8.0［S］.2013：1754-1756.

［6］U.S.Pharmacopeia/National Formulary［S］.2012：20185-2188，2468-2469.