曹 劍，黃志偉

（重慶三峽職業(yè)學(xué)院農(nóng)林科技系，重慶 404155）

不同培養(yǎng)基配方對(duì)白及組培苗生根培養(yǎng)的影響

曹 劍，黃志偉

（重慶三峽職業(yè)學(xué)院農(nóng)林科技系，重慶 404155）

本文以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，采用4因素3水平（L9（34））3次重復(fù)正交試驗(yàn)，探討不同激素NAA、GA3、6-BA及香蕉泥等因素對(duì)白及組培苗生根效果的影響。結(jié)果表明本試驗(yàn)中設(shè)計(jì)的4個(gè)試驗(yàn)因素對(duì)白及生根培養(yǎng)的影響程度依次為NAA＞香蕉泥＞6-BA＞GA3，NAA、GA3及香蕉泥有促進(jìn)白及根系生長的作用，6-BA則對(duì)白及生根有抑制作用，得出白及生根培養(yǎng)的最適配方為：1/2MS+NAA0.2 mg·L-1+GA31.0 mg·L-1+香蕉泥30 g·L-1。

白及；組培苗；生根培養(yǎng)

1　前言

白及又名及白芨、連及草、白根、紫蕙等，為蘭科白及屬植物白及Bletilla striata（Thunb.）Rchb.f.的干燥塊莖，作為我國民間的傳統(tǒng)中藥，其藥性甘、苦、澀，性寒，歸肺、胃、肝經(jīng)，具有收斂止血，消腫生肌之效，主治體內(nèi)外諸出血證，是具有相當(dāng)發(fā)展前景的藥用原料及生物醫(yī)學(xué)材料，經(jīng)濟(jì)價(jià)值不容忽視［1～2］。

白及種子較小，自然情況下萌發(fā)率極低，而在人工栽培條件下，以分株為主的傳統(tǒng)繁殖方式其繁殖速度很慢，繁殖系數(shù)極低，伴隨白及生態(tài)環(huán)境的破壞，野生資源日益枯竭，目前已被列為稀有瀕危植物［3～4］。

目前，利用白及種子進(jìn)行快繁獲得的組培苗逐漸取代了傳統(tǒng)的分株苗。然而在長期組培過程中存在一部分弱苗、玻璃化苗，影響正常的繼代擴(kuò)繁、降低生根率與移栽成活率，繼而降低種苗品質(zhì)，嚴(yán)重影響正常的工廠化生產(chǎn)與效益，因此，提高白及組培苗生根壯苗的比率是保證白及正常工廠化生產(chǎn)與銷售的前提［5-7］。因此，此次研究探討不同激素NAA、GA3、6-BA及香蕉泥等因素對(duì)白及組培苗生根壯苗培育的影響，旨在探索不同培養(yǎng)基配方下白及組培苗生根壯苗生長規(guī)律，建立白及生根壯苗的優(yōu)化生產(chǎn)工藝，為工廠化大規(guī)模生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)白及種苗提供理論依據(jù)與技術(shù)指導(dǎo)。

1　材料與方法

1.1材料

供試材料為白及成熟未開裂蒴果，來自重慶市藥用植物研究所。

1.2方法

1.2.1無菌苗的培育

無菌苗的培育于2014年8月在重慶三峽職業(yè)學(xué)院組培實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，選取白及成熟蒴果在無菌條件下播種，培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+ 10%椰子汁+活性炭0.4 g·L-1，其中添加30 g· L-1蔗糖，5 g·L-1瓊脂粉，pH值調(diào)節(jié)至5.8，培養(yǎng)溫度為25±1℃、光照強(qiáng)度2 000 lx～2 500 lx、光照時(shí)間12 h·d-1。

1.2.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以NAA（A）、GA3（B）、6-BA（C）、香蕉泥（D）為因素，每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平（表1），得到L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表（表2）。

表1　正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的因素及水平

表2　正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L9（34）

1.2.3實(shí)驗(yàn)步驟及培養(yǎng)條件

選取同一批次、長勢(shì)一致的白及組培苗，要求苗高在1.0～1.5cm（苗高指原球莖頂端至新葉抽生處的垂直高度），仔細(xì)去除下部黃葉及原球莖上已有根系。直接插入上述表2試驗(yàn)培養(yǎng)基中（30 g·L-1蔗糖，5 g·L-1瓊脂粉，pH值調(diào)節(jié)至5.8），20瓶·處理-1，10苗·瓶-1。培養(yǎng)溫度為25±1℃、光照強(qiáng)度2 000 lx～2 500 lx、光照時(shí)間12 h·d-1。

1.2.4結(jié)果記錄及數(shù)據(jù)處理

記錄白及組培無根苗生根情況，每隔10 d采集1次數(shù)據(jù)，連續(xù)記錄6次。每次每處理隨機(jī)抽取3瓶，采集組培苗生根數(shù)、根長（cm）、根粗（mm）、有無畸形根及畸形苗等數(shù)據(jù)。

對(duì)白及苗根系進(jìn)行綜合評(píng)分時(shí)，根據(jù)苑玉鳳［8］的多指標(biāo)正交試驗(yàn)分析方法，采用公式評(píng)分法對(duì)幾個(gè)主要生根指標(biāo)打分后進(jìn)行分析，其評(píng)分公式為：

綜合評(píng)分=平均根數(shù)×5+根系總長×3+根系直徑×2。

綜合評(píng)分時(shí)試驗(yàn)數(shù)據(jù)需進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，采用Min-max標(biāo)準(zhǔn)化法，即：

其中，max為樣本數(shù)據(jù)的最大值；min為樣本數(shù)據(jù)的最小值。

根系總長為1株組培苗所有根的長度之和，根系直徑為1株組培苗平均根粗，對(duì)各處理指標(biāo)采用公式評(píng)分法進(jìn)行評(píng)價(jià)，綜合評(píng)分越高的，說明生根效果越好。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel和DPS7.05軟件進(jìn)行分析。

2　結(jié)果與分析

2.1不同培養(yǎng)基配方對(duì)白及組培苗生根率及生根數(shù)的影響

在白及組培苗生根培養(yǎng)過程中，觀察發(fā)現(xiàn)當(dāng)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)40d后，7、8、9號(hào)處理的白及苗明顯的出現(xiàn)了畸形根、根相互纏繞、生出細(xì)小須根及叢生芽等現(xiàn)象（圖1），導(dǎo)致難以將其完好分離，不能準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。

圖1　叢生芽、畸形根等現(xiàn)象

通過表3，不難看出轉(zhuǎn)接10 d時(shí)所有處理均已生根，但生根率有較大差異，其中生根率最高的6號(hào)配方達(dá)97%，而最低的5號(hào)配方僅為40%；隨著轉(zhuǎn)接培養(yǎng)天數(shù)的增加這種差異將變得較小，當(dāng)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)到40 d時(shí)，所有配方的生根率都達(dá)90%以上。

表3　白及組培苗生根率及生根數(shù)

根據(jù)表3及圖2，可以看出在生根數(shù)方面，6號(hào)培養(yǎng)基表現(xiàn)最好，轉(zhuǎn)接10d時(shí)其平均生根數(shù)就達(dá)2.20根，而到40 d時(shí)則高達(dá)5.02根，其次是8號(hào)培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接40 d時(shí)其平均生根數(shù)為4.41根；表現(xiàn)最差的為1號(hào)培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接40 d時(shí)其平均生根數(shù)僅為2.30根。

在生根誘導(dǎo)方面，綜合考慮生根率、生根數(shù)指標(biāo)，能夠看出6號(hào)培養(yǎng)基即1/2MS+NAA0.2 mg· L-1+GA31.0 mg·L-1+香蕉泥30 g·L-1最好。

2.2不同培養(yǎng)基配方對(duì)白及組培苗根長的影響

在生根培養(yǎng)過程中，通過連續(xù)6次每次間隔10 d的觀察及數(shù)據(jù)采集，數(shù)據(jù)整理見表4，可以看出，6號(hào)處理從轉(zhuǎn)接開始到培養(yǎng)60 d時(shí)，在根總長方面表現(xiàn)最好，轉(zhuǎn)接60d時(shí)根總長達(dá)8.90 cm，最長根3.60 cm，其次表現(xiàn)較好的是8號(hào)處理，而9號(hào)處理表現(xiàn)最差，60 d時(shí)根總長僅為3.42 cm，最長根2.20 cm。

圖2　白及苗生根數(shù)柱形圖

表4　白及組培苗根長

從表4中選取根系總長前4的處理即6、8、4及2號(hào)處理，繪制其根系生長曲線（圖3），可以看出，白及組培苗根系生長情況總體呈“S”型增長，大致分成3個(gè)階段，第一階段為從轉(zhuǎn)接開始到轉(zhuǎn)接20 d時(shí)，白及苗需經(jīng)過適應(yīng)新的培養(yǎng)基以及根系的萌發(fā)過程，此階段根系伸長生長緩慢；第二階段從轉(zhuǎn)接20 d～40 d時(shí)，由于白及已經(jīng)充分適應(yīng)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，根系能夠快速生長，是根系快速伸長生長階段；第三階段從轉(zhuǎn)接40 d～60 d時(shí)，由于前期白及苗的快速生長消耗了較多的營養(yǎng)成分，此時(shí)培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分已較少，加之由于白及苗根系的快速生長導(dǎo)致生長空間的競爭，所以此階段根系的伸長生長明顯減慢。

圖3　白及組培無根苗根系生長曲線

2.3不同培養(yǎng)基配方對(duì)白及組培苗根系直徑的影響

上述表5是在白及苗生根培養(yǎng)40 d時(shí)測得的數(shù)據(jù)，其中9號(hào)培養(yǎng)基白及苗根系最粗達(dá)1.40 mm，其次是8號(hào)培養(yǎng)基，而根系最細(xì)的則是3號(hào)培養(yǎng)基，僅為0.47 mm。然而觀察中發(fā)現(xiàn)，雖然7、8、9號(hào)培養(yǎng)白及苗根系都較粗，但根系的韌性較差，易斷，將會(huì)極大影響白及組培苗的移栽成活率。

2.4不同培養(yǎng)基配方對(duì)白及組培苗根系生長的綜合影響

利用轉(zhuǎn)接培養(yǎng)40 d時(shí)的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析試驗(yàn)結(jié)果，首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，然后進(jìn)行綜合評(píng)分（見表6）。由表6可以看出，在組合條件下，6號(hào)處理即1/2MS+NAA0.2 mg·L-1+GA31.0 mg·L-1+香蕉泥30 g·L-1的根系綜合評(píng)分達(dá)8.77，表現(xiàn)最好，說明生根效果好，其次是8號(hào)處理，而1號(hào)處理僅為0.39，表現(xiàn)最差，說明其生根效果不好。

利用上述綜合評(píng)分的得分做極差分析（見表6）。由表6可看出各因素作用的主次順序?yàn)锳＞D＞C＞B，即NAA對(duì)白及組培無根苗生根起主導(dǎo)作用，其次是香蕉泥濃度，然后是6-BA，但從表中可以看出6-BA對(duì)白及苗生根有一定抑制作用，而GA3的作用最弱。

表5　白及苗根系直徑

表6　L9（34）正交試驗(yàn)的極差分析表

3　討論

在白及組培苗的生根培養(yǎng)過程中，NAA、香蕉泥及GA3有促進(jìn)白及根系生長的作用，其中NAA起到主導(dǎo)作用，但NAA濃度達(dá)0.5 mg·L-1時(shí)，7、8、9號(hào)處理的白及苗均出現(xiàn)畸形根及叢生芽現(xiàn)象，不利于培育優(yōu)質(zhì)壯苗，而6-BA則相反，對(duì)白及根系生長有抑制作用，這與付志惠［6］、趙漫麗［9］等的研究結(jié)果不盡相同，究其原因還有待進(jìn)一步研究。此次試驗(yàn)得出白及生根培養(yǎng)的最適配方為：1/2MS+ NAA0.2 mg·L-1+GA31.0 mg·L-1+香蕉泥 30 g ·L-1。

觀察中發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)接60 d時(shí)，白及瓶苗之間的根系已糾結(jié)在一起，難以分離開來，或者即便能分離開也會(huì)有為數(shù)不少的根系在分離過程中受傷或折斷等現(xiàn)象發(fā)生。因此建議生產(chǎn)上，為確保煉苗移植時(shí)白及瓶苗成活率，應(yīng)隨時(shí)觀察根系的生長情況，當(dāng)要出現(xiàn)苗與苗之間根系打結(jié)時(shí)，就應(yīng)立即煉苗移栽。在實(shí)

際生產(chǎn)中，還應(yīng)注意轉(zhuǎn)接苗密度設(shè)置、培養(yǎng)基灌裝量對(duì)組培苗綜合生長的影響，具體機(jī)理也有待進(jìn)一步研究。

［1］ 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：95.

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S723.132

A

1003-5508（2016）03-0096-04

10.16779/j.cnki.1003-5508.2016.03.018

2015-10-05

重慶市教委科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（名稱：白及組培育苗技術(shù)條件優(yōu)化研究編號(hào)：KJ1403309）。

曹劍（1978-），女，碩士，研究方向?yàn)橛泻ι锓揽?、特種作物栽培，E-mail：407586199@qq.com。