呂海燕，湯詠梅，韓艷玲，張鄖芳，成拾明

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·臨床研究·

硅油并發(fā)性白內(nèi)障和年齡相關(guān)性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞中凋亡因子的表達(dá)差異

呂海燕，湯詠梅，韓艷玲，張鄖芳，成拾明

Department of Ophthalmology,Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, Hubei Province, China

Correspondence to:Shi-Ming Cheng. Department of Ophthalmology, Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, Hubei Province, China. Ming_13693256307@126.com

Abstract

?AIM: To analyze the expression of apoptosis factor in cataract and age-related cataract lens epithelial cells.

?METHODS: A total of 50 cases (50 eyes) of concurrent silicone oil cataract patients as study group and the same period of 50 cases (50 eyes) of age-related cataract patients as control group were selected in our hospital during Mar. 2014 to Mar. 2016. In the determination of two groups of patients had been accurately grasped the specific content of the research program and signed informed consent book of the lens epithelial cells apoptosis factor expression. They were measured and compared.

?RESULTS: Study group of Bcl-2 protein expression positive rate was 92%. Bax protein expression positive rate was 100%. The expression of caspase-3 protein expression positive rate was 100%. Compared with the control group, the expression of bcl-2 expression positive rate of 80%. Bax protein expression positive rate of 84%. Caspase-3 protein expression positive rate of 82%. Difference between the two groups were statistically significant (P<0.05).

?CONCLUSION: Concurrent silicone oil cataract lens epithelial cells apoptosis factor expression is significantly higher than that of age-related cataract. A clinical lens epithelial cells apoptosis factors of full participation in the silicone oil cataract extraction in the development and progression is prompted.

目的：分析硅油并發(fā)性白內(nèi)障和年齡相關(guān)性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞中凋亡因子的表達(dá)差異。

方法：將我院2014-03/2016-03收治的硅油并發(fā)性白內(nèi)障患者50例50眼作為研究組，另選同期收治年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者50例50眼作為對照組，兩組患者均已如實掌握此次研究方案具體內(nèi)容并簽署知情同意書后對其晶狀體上皮細(xì)胞中凋亡因子的表達(dá)進(jìn)行測定和比較。

結(jié)果：研究組Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率92%、Bax蛋白表達(dá)陽性率100%、Caspase-3蛋白表達(dá)陽性率100%，而同期對照組Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率80%、Bax蛋白表達(dá)陽性率84%、Caspase-3蛋白表達(dá)陽性率82%，組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

結(jié)論：硅油并發(fā)性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞中凋亡因子的表達(dá)顯著高于年齡相關(guān)性白內(nèi)障，提示晶狀體上皮細(xì)胞中部分凋亡因子全程參與硅油并發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展過程。

硅油并發(fā)性白內(nèi)障；年齡相關(guān)性白內(nèi)障；晶狀體上皮細(xì)胞；凋亡因子

引用：呂海燕，湯詠梅，韓艷玲，等.硅油并發(fā)性白內(nèi)障和年齡相關(guān)性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞中凋亡因子的表達(dá)差異.國際眼科雜志2016;16(9):1668-1670

0引言

硅油具有理化性質(zhì)穩(wěn)定、生物耐受性好等特征而暫時替代玻璃體用于復(fù)雜性視網(wǎng)膜脫離治療工作中。然而，隨著應(yīng)用頻率的不斷提高，硅油并發(fā)性白內(nèi)障成為一個不可回避的現(xiàn)實問題。近些年來，醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展使得細(xì)胞凋亡(apoptosis)成為生命科學(xué)研究的重要領(lǐng)域，由于其可以降解細(xì)胞內(nèi)至關(guān)重要的蛋白而導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)改變，尤其是晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡，在多種白內(nèi)障發(fā)生發(fā)展中扮演著至關(guān)重要的角色，為硅油并發(fā)性白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制的研究提供了全新方向及思路[1]。本次研究針對

表1　兩組Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率比較 眼(%)

表2　兩組Bax蛋白表達(dá)陽性率比較 眼(%)

表3　兩組Caspase-3蛋白表達(dá)陽性率比較 眼(%)

硅油并發(fā)性白內(nèi)障和年齡相關(guān)性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞中凋亡因子的表達(dá)差異展開分析，報告如下。

1對象和方法

1.1對象將我院2014-03/2016-03收治的硅油并發(fā)性白內(nèi)障患者50例50眼作為研究組，其中男33例33眼，女17例17眼；年齡52～68(平均60.25±1.30)歲；左眼32例,右眼18例。另選同期年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者50例50眼作為對照組，其中男32例32眼,女18例18眼；年齡51～68(平均60.18±1.27)歲；左眼33例,右眼17例。所有白內(nèi)障診斷符合美國眼科學(xué)會(American Academy of Ophthalmology，AAO)診斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)徹照法檢查發(fā)現(xiàn)晶狀體周圍或者是后極部存在點(diǎn)狀暗影；(2)裂隙燈顯微鏡檢查可見晶狀體周邊或后極部有點(diǎn)狀混濁，皮質(zhì)尚透明，亦或是晶狀體后極出現(xiàn)水瘢樣改變[2]。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)臨床綜合診斷確診為硅油并發(fā)性白內(nèi)障/年齡相關(guān)性白內(nèi)障者；(2)臨床依從性好者；(3)無其他眼底部合并癥，視神經(jīng)嚴(yán)重?fù)p傷者。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)代謝性或外傷性因素所致白內(nèi)障者；(2)合并眼部或者是全身性疾病者；(3)不同意此次研究方案或未簽署知情同意書者。兩組患者一般資料比較無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2方法將采集到的晶狀體前囊膜迅速放置在含有40g/L多聚甲醛的離心管中固定后,放入4℃冰箱中保存待檢[3]。將待檢測晶狀體樣本放入96孔板并進(jìn)行打孔，時間為15min，之后以150r/min反復(fù)清洗3次共15min后放入100g/L養(yǎng)血清之中[4]。配置Bcl-2蛋白、Bax蛋白、Caspase-3蛋白抗體，稀釋液為磷酸鹽緩沖溶液，稀釋濃度為1∶100。配置熒光二抗溶液和細(xì)胞核染色液，稀釋液均為磷酸鹽緩沖溶液，濃度比分別為1∶200和1∶800，室溫放置時間分別為1.5h和10min[4]。將晶狀體前囊膜樣本進(jìn)行熒光染色并計算陽性細(xì)胞數(shù)量。觀察指標(biāo)晶狀體上皮細(xì)胞中凋亡因子Bcl-2蛋白、Bax蛋白、Caspase-3蛋白表達(dá)各自陽性率。

陽性判定標(biāo)準(zhǔn)： 采用美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的UniCel DxI 800全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對各表達(dá)陽性率進(jìn)行計算，選取4個具有代表性的視野，在500倍視野下計算陽性細(xì)胞占比，取其平均值作為最終測定結(jié)果并將其分為以下五個級別：無表達(dá)(無陽性細(xì)胞存在)為0、低表達(dá)(陽性細(xì)胞占比<25%)為1+、中度表達(dá)(陽性細(xì)胞占比25%～50%)為2+、高表達(dá)(陽性細(xì)胞占比50%～75%)為3+、極高表達(dá)(陽性細(xì)胞占比>75%)為4+[5]。

統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，計數(shù)資料采用率表示，用卡方檢驗，如果總樣本量小于40或最小理論頻數(shù)小于1，則采用Fisher確切概率法檢驗，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率比較研究組Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率92%，顯著高于同期對照組80%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

2.2兩組Bax蛋白表達(dá)陽性率比較研究組、對照組Bax蛋白表達(dá)陽性率分別為100%、84%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 見表2。

2.3兩組Caspase-3蛋白表達(dá)陽性率比較研究組Caspase-3蛋白表達(dá)陽性率100%，而同期對照組Caspase-3蛋白表達(dá)陽性率82%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 見表3。

3討論

硅油并發(fā)性白內(nèi)障是目前硅油填充治療過程中最為常見的并發(fā)癥類型，既往研究認(rèn)為該病癥的發(fā)病機(jī)制與氧化應(yīng)激反應(yīng)、紫外線照射、糖尿病等因素具有直接關(guān)聯(lián)性，但是并未得到國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的一致認(rèn)可[6]。隨著近些年來醫(yī)學(xué)研究的深入開展，晶狀體上皮細(xì)胞凋亡逐漸引起了臨床的高度關(guān)注，并且被認(rèn)定為非先天性白內(nèi)障發(fā)生與發(fā)展的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)[7]。B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)是生命科學(xué)研究中最受到重視的基因之一，Bcl-2蛋白以及Bax蛋白為該家族重要的表達(dá)形式，扮演著細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子的角色[8]。而Caspase-3蛋白則是半胱氨酸蛋白酶(Cysteine aspartic acid specific protease)家族中細(xì)胞進(jìn)入程序性死亡的特異性標(biāo)志物，廣泛分布于眼部組織之中且由于Caspase-3蛋白具有執(zhí)行剪切細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白的能力，直接導(dǎo)致晶狀體上皮細(xì)胞發(fā)生凋亡，成為了該細(xì)胞凋亡進(jìn)程中至關(guān)重要的終末執(zhí)行酶[9]。通過對凋亡因子的表達(dá)進(jìn)行測定，可以解釋多種白內(nèi)障疾病的發(fā)病機(jī)制，為后天性白內(nèi)障的預(yù)防、治療及預(yù)后評估提供強(qiáng)有力的幫助，具有重要的研究價值[10]。

本次研究中分別選取了硅油并發(fā)性白內(nèi)障以及年齡相關(guān)性白內(nèi)障作為對比對象，對其Bcl-2蛋白表達(dá)、Bax蛋白表達(dá)、Caspase-3蛋白表達(dá)各自陽性率之間的差異進(jìn)行比較和分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率92%、Bax蛋白表達(dá)陽性率100%、Caspase-3蛋白表達(dá)陽性率100%，而同期對照組Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率80%、Bax蛋白表達(dá)陽性率84%、Caspase-3蛋白表達(dá)陽性率82%，二者之間相比較，研究組各項數(shù)值均高于對照組且組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，尤其是研究組Bax蛋白表達(dá)和Caspase-3蛋白表達(dá)以中度表達(dá)及高表達(dá)為主，對照組則是以低表達(dá)和中度表達(dá)為主，提示臨床上述三種晶狀體上皮細(xì)胞中凋亡因子不僅在硅油并發(fā)性白內(nèi)障、年齡相關(guān)性白內(nèi)障發(fā)生發(fā)展之中扮演著重要的角色，同時進(jìn)一步豐富了目前尚不明確的硅油并發(fā)性白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制的研究內(nèi)容，能夠為臨床預(yù)防及治療硅油并發(fā)性白內(nèi)障工作開展提供強(qiáng)有力的幫助。

綜上所述，硅油并發(fā)性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞中凋亡因子的表達(dá)顯著高于年齡相關(guān)性白內(nèi)障，提示臨床晶狀體上皮細(xì)胞中部分凋亡因子全程參與硅油并發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。

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Expression of apoptosis factor in the lens epithelial cells of the patients with silicone oil complicated cataract and age-related cataract

Hai-Yan Lü, Yong-Mei Tang,Yan-Ling Han, Yun-Fang Zhang, Shi-Ming Cheng

2016-06-09Accepted：2016-08-05

?silicone oil complicated cataract; age related cataract; lens epithelial cell; apoptosis factor

(442000)中國湖北省十堰市太和醫(yī)院 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院眼科

呂海燕,本科，主管護(hù)師，研究方向：眼科護(hù)理學(xué)。

成拾明，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：葡萄膜疾病、屈光手術(shù).Ming_13693256307@126.com

2016-06-09

2016-08-05

Lü HY, Tang YM, Han YL,etal. Expression of apoptosis factor in the lens epithelial cells of the patients with silicone oil complicated cataract and age-related cataract.GuojiYankeZazhi(IntEyeSci) 2016;16(9):1668-1670

10.3980/j.issn.1672-5123.2016.9.17