李元新，劉來利，王必成，張鵬岳（甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所，甘肅平?jīng)?44000）

亞硒酸鈉小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)研究

李元新，劉來利，王必成，張鵬岳
（甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所，甘肅平?jīng)?44000）

為評價(jià)亞硒酸鈉的致突變性，進(jìn)行了小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞（PCE）微杭試驗(yàn)。結(jié)果表明：當(dāng)受試物終濃度為2mg／kg，1mg／kg劑量組PCE微核率與陰性對照組比較有極顯著性差異（p＜0.01），結(jié)果為陽性；0.5mg／kg劑量組PCE微核率與陰性對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），為陰性結(jié)果。結(jié)論：亞硒酸鈉具有一定的致突變性。

亞硒酸鈉；PCE；微核

硒是人體和動物所必需的的微量元素?？捎糜诎┌Y的化學(xué)預(yù)防，并且具有抗氧化和抗突變的作用，但較高濃度的硒亦有一定毒性。目前硒的遺傳毒性報(bào)道較少。為了探討亞硒酸鈉的安全性，通過亞硒酸鈉小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)研究，對其致突變性進(jìn)行評價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試藥物及其對照品 亞硒酸鈉，批號：940612，試驗(yàn)時(shí)配100g／mL、50g／mL、25g／mL亞硒酸鈉藥液，0.22μm濾膜濾過除菌，臨用現(xiàn)配。復(fù)方環(huán)磷酰胺片（天津金世制藥有限公司，批號：20100901）試驗(yàn)時(shí)配制2mg／mL（以環(huán)磷酰胺計(jì)）藥液。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物 選用SPF級NIH小鼠50只，體重25～30g，雌雄各半（由成都達(dá)碩生物科技有限公司生產(chǎn)，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（川）2008－24）。1.1.3 主要試劑 新生牛血清（批號：120510，成都哈里生物工程有限公司）。姬母薩染料，Sigma生產(chǎn)，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.4 儀器 ACS－0.6T電子單重秤（中山市金利電子衡器公司）；XSZ－7G雙目生物顯微鏡（重慶光電儀器有限公司），XK06－9J血球分類計(jì)數(shù)器（姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司）；BS124S電子天平，（德國Sartorius股份有限公司出品）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 根據(jù)《藥物遺傳毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》規(guī)定，遺傳毒性試驗(yàn)須進(jìn)行哺乳動物體內(nèi)微核試驗(yàn)。選用體重為25～30g的NIH小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，5組分別為：陽性對照組、陰性對照組和3個(gè)劑量受試藥物試驗(yàn)組。陽性藥物組按40.0mg／kg劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺；試驗(yàn)組灌胃給予受試藥物，劑量分別為2、1、0.5mg／kg，相當(dāng)于LD的1／2，1／4和1／8，陰性對照組灌胃相同體積的純化水。多次給藥，每天1次，連續(xù)4d單次給藥，各組在末次給藥后24h后骨髓采樣，取胸骨用止血鉗擠出骨髓液，滴在滴有一滴新生牛血清的載玻片上混勻，制片、鏡檢。具體操作詳見（GB15193.5－2003）。在油鏡下觀察2000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，計(jì)數(shù)其中含有微核的嗜多染紅細(xì)胞細(xì)胞數(shù)，計(jì)算嗜多染紅細(xì)胞微核率［微核的嗜多染紅細(xì)胞細(xì)胞比率＝（微核的嗜多染紅細(xì)胞細(xì)胞／2000）×1 000%］；計(jì)數(shù)觀察200個(gè)嗜多染紅細(xì)胞同時(shí)出現(xiàn)的正染紅細(xì)胞數(shù)，計(jì)算嗜多染紅細(xì)胞和總紅細(xì)胞的比例［嗜多染紅細(xì)胞比例＝嗜多染紅細(xì)胞／（嗜多染紅細(xì)胞＋正染紅細(xì)胞）］，并統(tǒng)計(jì)每組嗜多染紅細(xì)胞和總紅細(xì)胞的比例及微核的嗜多染紅細(xì)胞細(xì)胞比率平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。

1.2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理方法 微核細(xì)胞率和PCE／200比值數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，采用Excel軟件計(jì)算均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，判斷數(shù)據(jù)是否呈正態(tài)分布，正態(tài)分布則采用Excel中F檢驗(yàn)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，然后選擇t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若呈非正態(tài)分布，則進(jìn)行非參數(shù)檢驗(yàn)。

1.2.3 結(jié)果判定 各劑量組微核細(xì)胞率與陰性對照組進(jìn)行比較，若有差異并有劑量－反應(yīng)關(guān)系可判定為陽性結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)結(jié)果

表 亞硒酸鈉嚙齒動物骨髓微核試驗(yàn)結(jié)果（±SD）

由上表中可以看出，在亞硒酸鈉嚙齒動物骨髓微核試驗(yàn)中，小鼠給予2mg／kg，1mg／kg和0.5 mg／kg 3個(gè)受試劑量組誘導(dǎo)的微核發(fā)生率分別為（10.9‰），（5.6‰）和（2.3‰），其中2mg／kg，1mg／kg與陰性對照組比較有顯著差異性（P＜0.01）。陽性對照組的微核發(fā)生率為（20.1‰），與陰性對照組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。各受試劑量組和陽性對照組200個(gè)紅細(xì)胞中見到的嗜多染紅細(xì)胞（PCE）與陰性對照組比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），復(fù)核人員隨機(jī)選取本次實(shí)驗(yàn)中每組10%樣本進(jìn)行重新閱片，其平均閱片誤差為12.52%。

2.2 結(jié)果分析

上表結(jié)果顯示2mg／kg，1mg／kg與陰性對照組比較有顯著差異性（P＜0.01），為陽性結(jié)果。0.5mg／kg與陰性對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），為陰性結(jié)果。表明在本試驗(yàn)條件下，給予NIH小鼠亞硒酸鈉濃度為2mg／kg，1mg／kg時(shí)可誘發(fā)PCE微核率增高，亞硒酸鈉濃度為0.5 mg／kg時(shí)無誘導(dǎo)PCE微核率增高的能力。

3 討論

小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)是傳統(tǒng)而經(jīng)典的檢測染色體斷裂劑、紡錘體毒物及非整倍體誘導(dǎo)劑的體內(nèi)致突變試驗(yàn)，體內(nèi)試驗(yàn)具備的吸收、分布、代謝、排泄等與人體應(yīng)用更具有相關(guān)性。微核的形成是細(xì)胞受遺傳毒物作用后的一種遺傳學(xué)終點(diǎn)，微核率的增高反映了染色體損傷的遺傳效應(yīng)。目前微核試驗(yàn)已被公認(rèn)為檢測哺乳動物細(xì)胞遺傳物質(zhì)損傷和化學(xué)物質(zhì)毒性快速、敏感的常規(guī)方法之一。根據(jù)微核形成的原理，藥物誘發(fā)小鼠微核率的變化可以反映出所檢測藥物對小鼠的遺傳毒性。亞硒酸鈉2.0～0.5 mg／kg劑量小鼠灌胃給藥一次，給藥后24h處死，2 mg／kg，1mg／kg劑量具有誘發(fā)PCE微核率增高，導(dǎo)致染色體損傷的作用，提示在本實(shí)驗(yàn)條件下具有致突變性，0.5mg／kg劑量沒有誘發(fā)PCE微核率增高和染色體損傷的作用。

［1］ 藥物遺傳毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（第二稿）［S］.2006.

［2］ GB 15193.5－2003，骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)［S］.

［3］ 袁伯俊，廖陽明，李波.《藥物毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)》［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007：290－294.

［4］ 孫瑞元，鄭青山.數(shù)學(xué)藥理學(xué)新論［M＼］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：39－48.

［5］ 方治平，肖逸，宋曉紅，等.重組葡激酶的致突變試驗(yàn)［J］.四川生理科學(xué)雜志，2000，22（1）：22－26.

［6］ 王欽茂，李莉，方華武，等.中藥致癌、致突變和生殖毒性研究研究概況［J］.安微中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，20（5）64－67.

Study on Micronucleus Test of Polychromatics Erythrccytes in Bone Marrow of Sodium Selenium

LI Yuan－xin，LIU Lai－li，WANG Bi－cheng，ZHANG Peng－yue
（Gansu Institute of Animal Science and Veterinary，Pingliang Sansu 744000 China）

The mutagenicity of sodium selenite was evaluated by the micronucleus test of polychromatics erythrccytes in bone marrow.The results showed that at the concentration of 2mg／kg，1μg／mL dosage，the rate of micronucleus of polychromatics erythrccytes in bone marrow in treatment group was very significant different than control group（P＜0.01），which was positive.PCE micronucleus rate at 0.5mg／kg was not significant（P＞0.05）compares with control group，which was negative.In conclusion，Sodium selenite has mutagenicity to some extent.

Sodium selenite；PCE；micronucleus

S 852.651

A

1004－6704（2016）03－0020－02

2015－09－17

甘肅省科技計(jì)劃資助項(xiàng)目，項(xiàng)目編號：

0805TCYL006

李元新（1971－），男，甘肅平?jīng)鋈?，獸醫(yī)碩士，副研究員，主要從事動物代謝病研究。E－mail：lyxlyx4033＠sina.com。