王婷玉， 厲　瑤， 張　鑫，吳云明,2， 楊宜華,2

(1 徐州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，江蘇　徐州　221004；2 江蘇省新藥研究與臨床藥學(xué)重點(diǎn)實驗室，江蘇　徐州　221004)

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正交設(shè)計優(yōu)化尼莫地平脂質(zhì)體的制備工藝*

王婷玉1， 厲瑤1， 張鑫1，吳云明1,2， 楊宜華1,2

(1 徐州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，江蘇徐州221004；2 江蘇省新藥研究與臨床藥學(xué)重點(diǎn)實驗室，江蘇徐州221004)

優(yōu)化了尼莫地平脂質(zhì)體的制備工藝。利用乙醇注入法制備尼莫地平脂質(zhì)體，以包封率為評價指標(biāo)，采用正交試驗優(yōu)化制備工藝，并考察脂質(zhì)體形態(tài)、粒徑、Zeta 電位和包封率。結(jié)果表明：優(yōu)化工藝條件為藥物-磷脂的質(zhì)量比1:20，膽固醇-磷脂的質(zhì)量比1:10，脫氧膽酸鈉-磷脂的質(zhì)量比1:10，磷脂濃度1%；尼莫地平脂質(zhì)體外觀接近球形，平均粒徑(122.8±5.3)nm，平均Zeta 電位(-23.69±1.24)mV，包封率84.27%±0.58%。結(jié)論：優(yōu)選得到的尼莫地平脂質(zhì)體制備工藝合理，為尼莫地平新制劑的研發(fā)提供依據(jù)。

尼莫地平；脂質(zhì)體；正交設(shè)計

尼莫地平(nimodipine)，在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中微溶，在水中幾乎不溶[1]。尼莫地平屬于雙氫吡啶類鈣拮抗劑,可有效阻止Ca2+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)、抑制平滑肌收縮,從而達(dá)到解除血管痙攣的目的。目前在臨床上多用于缺血性腦血管病，輕或中度高血壓，偏頭痛等的治療[2-4]。但其水溶性差，具有肝臟首過效應(yīng),生物利用度低；在體內(nèi)的半衰期很短,僅有1～2 h，有效作用時間短，均直接影響臨床藥效的發(fā)揮[5-6]。將尼莫地平制成脂質(zhì)體，有助于增加其吸收，延長作用時間，為尼莫地平新制劑的研發(fā)提供參考與依據(jù)。

1　材　料

1.1儀器

B-260型恒溫水浴鍋，上海亞榮生化儀器廠；R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海中生科技有限公司；JY92ⅡN超聲波細(xì)胞粉碎儀，寧波新芝生物科技股份有限公司；DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；UV-2450 型紫外可見分光光度計，日本島津公司；H-7650透射電鏡，日本日立公司；Nicomp 380 ZLS粒度分析儀，美國Particle sizing systems公司；25-3.5K透析袋，上海綠鳥科技發(fā)展有限公司；0.45 μm/0.22 μm微孔濾膜，上海市新亞凈化器件廠。

1.2試劑

大豆磷脂酰膽堿S 100(注射級)，德國Lipoid 公司；膽固醇，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；脫氧膽酸鈉，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；尼莫地平原料藥，西安東曉生物科技有限公司；尼莫地平對照品(規(guī)格 50 mg，批號 100270-200002)，中國食品藥品檢定研究院；無水乙醇(AR)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；其他試劑為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1脂質(zhì)體的制備

稱取適量尼莫地平、磷脂和膽固醇，加無水乙醇適量溶解形成類脂溶液，置于磁力攪拌器上。脫氧膽酸鈉溶于pH 6.8磷酸鹽緩沖液(PBS)中，50 ℃下將類脂溶液緩慢滴加入其中，繼續(xù)攪拌至無水醇味。利用探頭超聲儀超聲3 min，依次過0.45 μm濾膜和0.22 μm濾膜，即得乳白色的尼莫地平脂質(zhì)體混懸液。

2.2制備工藝優(yōu)化

根據(jù)前期的探索性單因素試驗，確定藥物-磷脂的質(zhì)量比(A)，膽固醇-磷脂的質(zhì)量比(B)，脫氧膽酸鈉-磷脂的質(zhì)量比(C)，磷脂濃度(D)為影響因素，每個因素選取3個水平，見表1。精密稱取尼莫地平20 mg，以包封率為優(yōu)化指標(biāo)，采用正交實驗確定最佳工藝。正交實驗結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表1　因素水平設(shè)計

表2　L9(34)正交實驗結(jié)果

表3　方差分析結(jié)果

續(xù)表3

C4.85121.00019.000D460.433294.91519.000*誤差4.852

*P<0.05。

由表2中的極差值可以看出，四個因素對脂質(zhì)體藥物包封率的影響程度為A>D>B>C，最佳工藝條件為A2B2C2D2，即藥物-磷脂的質(zhì)量比1:20，膽固醇-磷脂的質(zhì)量比1:10，脫氧膽酸鈉-磷脂的質(zhì)量比1:10，磷脂濃度1%。

2.3脂質(zhì)體的形態(tài)、粒徑與電位

取適量鹽酸川芎嗪脂質(zhì)體混懸液，在電鏡下觀察，脂質(zhì)體外觀接近球形，形態(tài)較為完整(圖1)。利用粒度分析儀測定其平均粒徑(122.8±5.3)nm，平均Zeta 電位(-23.69±1.24)mV。

圖1　尼莫地平脂質(zhì)體電鏡形態(tài)

2.4包封率的測定

2.4.1尼莫地平標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精密稱取尼莫地平對照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋到刻度，即得濃度為0.20 mg/mL的尼莫地平儲備液。分別取1，2，3，4和5 mL尼莫地平儲備液于100 mL容量瓶中，用無水乙醇定容，稀釋成濃度為0.002，0.004，0.006，0.008，0.010 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在238 nm波長處測定尼莫地平吸光度(A)，以質(zhì)量濃度(C)對A 回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為C=73.55 A+0.0135 (r=0.9999)。結(jié)果表明，尼莫地平在0.002～0.010 mg· mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.2精密度實驗

取濃度為0.006 mg/mL的尼莫地平標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)測定吸光度5次，其平均含量RSD為0.98%，表明日內(nèi)精密度良好。

取濃度為0.006 mg/mL的尼莫地平標(biāo)準(zhǔn)溶液每天在同一時間測定吸光度，連續(xù)5 d，其平均含量RSD為1.05%，表明日間精密度良好。

2.4.3穩(wěn)定性實驗

取脂質(zhì)體適量，用無水乙醇破乳，并定容，制成供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h測定吸光度值，計算濃度，其RSD為2.03%，表明樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.4.4加樣回收實驗

取濃度為0.006 mg/mL的尼莫地平標(biāo)準(zhǔn)溶液5 mL，加入不含尼莫地平的空白脂質(zhì)體中，無水乙醇破乳，其回收率為100.13%±0.64%。

2.4.5包封率的測定

精密移取脂質(zhì)體1 mL，加入無水乙醇破乳并定容，測定吸光度值，并計算藥物濃度，以及總藥量(W總)。精密移取脂質(zhì)體2 mL置于透析袋內(nèi)，兩端用透析夾夾緊，以pH 6.8 PBS為透析液，置于磁力攪拌器上攪拌，透析8 h達(dá)到平衡后，精密移取透析袋內(nèi)溶液1mL ，轉(zhuǎn)移至容量瓶中，加入無水乙醇破乳并定容，計算藥物濃度，以及包封藥量(W包)。按照式(1)計算包封率。

包封率=W包/W總×100%

(1)

按最佳工藝制備3批脂質(zhì)體，并計算包封率。其平均包封率為84.27%±0.58%。

3　討　論

尼莫地平對光敏感，在強(qiáng)光(日光直射等強(qiáng)光或紫外線)照射下會產(chǎn)生光解現(xiàn)象，光解產(chǎn)物在 270 nm處有新的吸收峰出現(xiàn)[7]。有文獻(xiàn)報道，尼莫地平溶液于50 mL透明容量瓶中靜置于室內(nèi)光照處，48 h 內(nèi)其濃度變化RSD<2%，說明尼莫地平標(biāo)準(zhǔn)液在室內(nèi)自然光下穩(wěn)定性良好[1]。故在操作時應(yīng)盡量在室內(nèi)弱光或避光下進(jìn)行，避免日光直射等強(qiáng)光照射，盡量采用避光操作。

脫氧膽酸鈉為表面活性劑，脂質(zhì)體中加入脫氧膽酸鈉，可以提高其穩(wěn)定性，增加包封率。

4　結(jié)　論

利用乙醇注入法，以包封率為評價指標(biāo)，采用正交試驗優(yōu)化制備工藝，得到的尼莫地平脂質(zhì)體外觀近球形，平均粒徑(122.8±5.3)nm，平均Zeta 電位(-23.69±1.24)mV，包封率84.27%±0.58%。優(yōu)選得到的尼莫地平脂質(zhì)體制備工藝合理，為尼莫地平新制劑的研發(fā)提供依據(jù)。

[1]常思. 尼莫地平 PLGA 微球的制備方法改良及其特性研究[D]. 天津:天津大學(xué)化工學(xué)院, 2012.

[2]Langley MS, Sorkin EM. Nimodipine. A review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties, and therapeutic potential in cerebrovascular disease [J]. Drugs, 1989, 37(5): 669-699.

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[4]周業(yè)旺, 鄭金甌. 尼莫地平治療蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的研究進(jìn)展[J]. 醫(yī)學(xué)綜述, 2011, 17(12): 1858-1860.

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Optimization of Preparation Process of Nimodipine Liposomes by Orthogonal Design*

WANG Ting-yu1, LI Yao1, ZHANG Xin1, WU Yun-ming1,2, YANG Yi-hua1,2

(1 School of Pharmacy, Xuzhou Medical College, Jiangsu Xuzhou 221004;2JiangsuKeyLaboratoryofNewDrugResearchandClinicalPharmacy,JiangsuXuzhou221004,China)

To optimize preparation process of nimodipine liposomes, the nimodipine liposomes were prepared by ethanol injection method. The preparation technology was optimized by orthogonal design with encapsulation efficiency as index. Morphology, average particle size, Zeta potential and entrapment efficiency of nimodipine liposomes were investigated. Results showed that the ideal preparation technology was as follows: ratio of nimodipine to phospholipid was 1:20, ratio of cholesterol to phospholipid was 1:10, ratio of sodium deoxyeholate to phospholipid was 1:10, the concentration of phospholipid was 1%, under these conditions, liposomes were nearly spherical, average particle size was (122.8±5.3) nm and Zeta potential was (-23.69±1.24) mV, average encapsulation efficiency of liposomes was 84.27%±0.58%. The selected preparation process of nimodipine liposomes could be rational which provided references for research of formulation of nimodipine.

nimodipine; liposomes; orthogonal design

江蘇省大學(xué)生實踐創(chuàng)新訓(xùn)練計劃項目(No. 201310313055X)。

王婷玉(1991-)，女，從事藥物新劑型與新制劑研究。

楊宜華(1977-)，女，講師，從事藥物新劑型與新制劑研究。

R944.9

A

1001-9677(2016)01-0068-03